周进1 王春林1 岳阳1 胡鸾1 田启东1 柴塬2 张军2
（1.云南中医学院临床医学院，昆明 650021；2.云南中医学院针灸推拿康复学院，昆明 650504）
【摘要】 目的 观察肩关节轴向拔伸法对肩周炎模型兔氧自由基代谢的影响，探讨肩关节轴向拔伸法治疗肩周炎的疗效机理。方法 将40只健康成年白兔，雌雄不限，随机分为实验组、对照组、模型组、空白组，每组10只。采取持续劳损加冰敷法制作兔肩周炎模型。实验组和对照组分别进行肩关节轴向拔伸法和电针治疗，模型组造模后给饲料喂养，空白组正常饲养不予治疗，10天一疗程，两疗程后进行实验取材，分别取兔患肩肱二头肌肌腹、长头肌腱及滑膜组织，检测超氧化物歧化酶（SOD）和脂质过氧化物（LPO）的含量。结果 肩关节轴向拔伸法对肩周炎模型兔局部肌肉中的脂质过氧化物（LPO）有良好的调整作用，可显著降低肩周炎模型兔局部肌肉中异常脂质过氧化物（LPO）含量（P<0.05，P<0.01），同时对局部肌肉中的超氧化物岐化酶（SOD）也有较好的调整作用。结论 肩关节轴向拔伸法可对肩周炎模型兔局部肌肉组织中的氧自由基代谢发挥良性调节作用，肩关节轴向拔伸法能增加局部肌肉组织中超氧化物歧化酶（SOD）的含量，从而更好地清除局部病变组织氧自由基以及脂质过氧化物，可能是其发挥治疗作用的重要环节之一。
【关键词】 肩关节轴向拔伸法；肩周炎；氧自由基；超氧化物歧化酶；脂质过氧化物
肩周炎又称肩关节周围炎，是指肩关节周围肌肉、肌腱、滑囊和关节囊等软组织的慢性炎症,形成关节内外粘连,临床主要特征为肩关节功能活动障碍及不同程度的疼痛,严重影响患者的生活和工作。本病属中医学的“五十肩”、“漏肩风”、“肩凝症”等范畴。临床研究表明肩关节轴向拔伸法治疗本病有确切疗效，可显著减轻疼痛，改善肩关节功能活动（1），但对于肩关节轴向拔伸法治疗本病的机理尚缺乏实验研究。本实验通过观察肩关节轴向拔伸法对肩周炎模型兔患肩肌肉组织中与氧自由基代谢密切相关的超氧化物歧化酶（SOD）和脂质过氧化物（LPO）的影响，探讨肩关节轴向拔伸法治疗肩周炎的疗效机理。
1材料与方法
1.1 实验动物与分组
健康成年白兔40只，体重1.8千克－2.5千克，雌雄不限，重量分布均一，昆明楚商科技有限公司提供，在云南中医学院动物实验中心动物室喂养。适应性喂养一周后随机分为四组，每组10只：（1）实验组（肩关节轴向拔伸法组），（2）对照组（电针组），（3）模型组，（4）空白组。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。
1.2 主要仪器设备
0.25mm×25mm华佗牌无菌针灸针，苏州医疗用品厂有限公司出品；离心机（12000g， SC-3610），安徽中科中佳科学仪器有限公司生产；-80℃低温冰箱，中科美菱低温科技有限责任公司生产；微量加样器10μl，德国eppendorf公司生产；多通道移液器300ul，德国eppendorf公司生产；全自动酶标仪Model 550，美国伯乐公司生产；Milli-Q纯水器，美国Millipore公司生产；制冰机，常熟市学科电器有限公司生产；旋涡混合器，北京优晟联合科技有限公司生产；经穴治疗仪（型号HJ6805-1），成都航天产业开发有限责任公司生产；ZD-9556水平摇床，江苏太仓市实验设备厂生产。
1.3 主要试剂
碘伏消毒剂，昆明制药厂生产；75%乙醇，昆明制药厂生产；0.9%氯化钠注射液，昆明制药厂生产；水合氯醛，北京化学试剂厂生产；SOD试剂盒，南京建成生物工程研究所生产；LPO试剂盒，美国abcam公司生产。
1.4造模方法
采取持续劳损加冰敷法（2）制作兔肩关节周围炎模型。取右侧肩部外侧以Na2S脱毛，脱毛面积约7cm×7cm。家兔仰卧操作台，后肢与左前肢固定，右侧前肢与电动振荡器固定连接，平行摇动肩关节，每天持续8小时，连续3天；然后将兔子仰卧固定于兔笼上，将塑料袋以水浸湿后装冰块敷于家兔右侧肩部，冰块融化后及时更换，每天持续8小时，连续3天。造模期间用电吹风对准家兔连续低风速吹风。造模后正常喂养10天开始实验干预。
1.5处理方法
模型组和空白组正常饲养不予治疗。对照组进行电针干预，实验组以肩关节轴向拔伸法进行干预，十天为一疗程，休息两天进行下一疗程，共两个疗程。
1.5.1 电针方法
将模型兔固定于兔台，取右侧肩髃、肩井、天宗、肩贞四穴，常规消毒，毫针刺入1cm，连接电针仪，选连续波，刺激强度以针颤动为度，每次20分钟。
1.5.2肩关节轴向拔伸法
将模型兔仰卧，固定双下肢及左上肢，以按揉法为主配合弹拨法施于肩关节周围部位，以肱二头肌长头肌腱、 三角肌、 冈上肌、 冈下肌、喙肩韧带及肩胛骨周围紧张之软组织为主，再弹拨腋窝前后壁痉挛的筋膜(胸大肌和背阔肌筋膜)，共2分钟。按揉肩井、天宗、肩内陵、肩贞、肩髃、曲池穴等，共1分钟。以肩关节轴向拔伸法进行各部位拔伸：a.外展拔伸法，拔伸下内外旋法；b.上举拔伸法，拔伸下内外旋法。共2分钟。最后按揉肩胛骨内侧缘及外侧缘，再以搓法来回施于患肢上臂，共半分钟。
1.6取材
两疗程后各组动物均进行取材。首先采用10%水合氯醛按2ml/kg体重进行耳缘静脉麻醉，麻醉完全后，迅速进行肩关节周围软组织取材，分别取患肩肱二头肌肌腱、肱二头肌肌腹以及滑膜相同大小、相同位置的组织块，将组织块放置在冰面上，用0.9NS%漂洗干净放入离心管，送入实验室低温保存待测。之后以耳缘静脉空气注射法处死动物。在实验过程中，空白组、对照组各1只，模型组2只，实验组3只动物，因腹泻死亡。
1.7 指标检测
超氧化物歧化酶（SOD）活性测定采用黄嘌呤氧化法；脂质过氧化物（LPO）含量测定采用硫代巴比妥酸荧光法。操作步骤严格按试剂盒说明书施行。
1.8统计学方法
数据采用SPSS17.0统计软件包处理。进行方差分析、t检验、秩和检验等统计学处理，所有计量资料数据以均数±标准差（X ±SD）表示，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1局部组织肉眼观察结果
空白组局部肌腱组织韧性好，颜色白亮；肌肉组织颜色鲜红，关节中有少量滑液，颜色透明；滑膜组织薄亮，正常覆盖于肌肉组织表层。模型组局部肌腱组织肿胀充血，颜色发白；肌肉组织颜色暗红，关节中有液体渗出，稍发黄色；滑膜组织颜色发黄，组织增厚。对照组局部肌腱组织柔韧性较好，颜色白亮；肌肉组织较暗红，缺乏光泽，关节中渗出液体较多，颜色微黄；滑膜组织较薄。实验组局部肌腱组织韧性好，颜色光亮；肌肉组织颜色鲜红，关节中滑液较少，颜色清澈；滑膜组织薄亮，包裹于肌肉表层。
2.2肩关节轴向拔伸法对肩周炎模型兔局部组织SOD的影响
造模后，模型组肌腱、肱二头肌肌腹、滑膜SOD含量较空白组下降（P<0.05，P<0.01），对照组肌腱、肱二头肌肌腹、滑膜SOD含量较空白组下降（P<0.05，P<0.01），实验组肌腱、肱二头肌肌腹、滑膜SOD含量较空白组有下降趋势，但无显著性差异（P＞0.05）。对照组肌腱、肱二头肌肌腹、滑膜SOD含量较模型组均升高（P<0.05，P<0.01），实验组肌腱、肱二头肌肌腹、滑膜SOD含量较模型组显著升高（P<0.05，P<0.01），实验组肌腱、肱二头肌肌腹、滑膜SOD含量较对照组有升高趋势，但无显著性差异（P＞0.05）。详见表一。
3 讨论
目前，人们认为自由基与大部分疾病以及人体的衰老有关。自由基作为人体垃圾，能够促使某些疾病的发生和机体的衰老，人们把自由基称为细胞的杀手。氧自由基的化学性质是很活跃的，能够攻击细胞膜上的脂肪酸产生过氧化物（脂质过氧化物（Lpopcroxidc LPO）是自由基引起组织细胞损害的毒性终产物），这些物质是毒性很强的一种物质，它会侵害体内的核酸、蛋白质等而引起一系列的细胞破坏作用。同时，氧自由基还可作为重要的细胞内信使，活化许多信号传导通路，间接导致组织和细胞的损伤（3）。沈霖、朱闽等（4）研究发现，兔肩周炎模型局部肌肉组织的超氧化物歧化酶（SOD）活性明显下降，而脂质过氧化物（LPO）含量增高，说明肩周炎模型兔的局部抗氧化能力降低，有害氧化增加，提出自由基代谢的紊乱是肩周炎发病机制之一。
机体内氧自由基积累越多，衰老和损伤的进程就越快，能对抗氧自由基的物质很多，超氧化物岐化酶（SOD）被认为是消除生物体内自由基的首要物质，它对抗衰老、提高机体免疫力、限制炎症等方面都具有很高价值。SOD具有特殊的生理活性，它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成细胞的伤害，因此，生物抗氧化机制中SOD的地位至关重要。SOD是机体自由基防御体系中一个重要的抗氧化剂，在自由基损害组织细胞的应激状态下代偿性增加，活力升高，以减轻自由基对组织细胞的损害作用，保护细胞免受进一步的损伤（5）。LPO是细胞膜脂质过氧化反应的代谢终产物，反应体内脂质过氧化的程度。LPO可分解产生丙二醛，丙二醛可以引起蛋白质分子内和分子间交联,致细胞损伤和死亡（6）。
本研究结果显示，造模后兔肩周炎模型组SOD水平显著降低，LPO水平显著升高，说明氧自由基代谢出现了紊乱，脂质过氧化反应加重，机体抗氧化能力下降，导致了肩部局部组织损伤，加重了肩周炎的病理进程。而肩关节轴向拔伸法对肩周炎模型兔局部肌肉组织中的SOD均具有良好的调节作用，可显著升高局部肌肉组织中SOD的含量（P<0.05，P<0.01）。同时，对局部肌肉组织中LPO的含量可显著降低（P<0.05，P<0.01），说明该手法对局部肌肉组织中LPO的含量也有很好的调整作用。对照组和实验组对SOD和LPO的调整稍有差异，实验组对SOD的含量水平调整较对照组稍高，对LPO的含量水平调整较对照组减低，说明肩关节轴向拔伸法对SOD和LPO的调整稍优于电针治疗，但趋势一致。实验表明，肩关节轴向拔伸法可提高机体的抗氧化能力，减轻氧自由基对肩周炎肌肉组织造成的损伤。
肩关节轴向拔伸法遵循肩关节的解剖结构学原理，针对不同的粘连病理采用相应的体位松解步骤，具有明确的解剖学基础（7），它的松解力可直达病灶局部，通过对病灶的松解剥离，解除病灶局部组织的粘连，消除疼痛，恢复肌肉组织正常解剖学结构和功能，达到治疗目的。与传统电针治疗相比，肩关节轴向拔伸法对局部病变的治疗更为直接和更具针对性，直接作用于局部病变组织进行松解。本实验结果显示，肩关节轴向拔伸法的起效机制不仅仅是松解剥离粘连，还可能通过对肩周炎局部肌肉组织中的氧自由基代谢发挥良性调节作用，增加局部肌肉组织中超氧化物歧化酶（SOD）的含量，清除局部病变组织中多余的氧自由基以及脂质过氧化物，恢复氧自由基代谢平衡，发挥其治疗作用。肩关节轴向拔伸法对肩周炎模型兔氧自由基代谢的影响，从而发挥其抗氧化能力的作用，可能是其发挥治疗作用的重要环节之一。
参考文献
(1) 周进，肩关节轴向拔伸法治疗粘连期肩周炎的疗效分析[J]，医药前沿，2014，4（22）：83-84
(2) 沈霖，林燕萍，王拥军等.骨伤科实验研究[M]，北京：北京科学技术出版社，2005，8：435
(3) Ceolotto G,Bevilacqua M,Papparella l,et al.Insulin generates free radicals by an NAD(P)H,phosphatidylinositol 3-kinase-dependent mechanism in human skin fibroblasts ex vivo[J].Diabetes,2004,53(5):1344-1351.
(4)沈霖，朱闽，熊昌源等，等.兔实验性肩关节周围炎局部病变组织中的氧自由基代谢变化[J].中国中医骨伤科，1994,2（6）：7-9
(5)Li G,Feng X. Wang S. Effects of Cu/Zn superoxide dismutase on stran injury-induced oxidative damage to skeletal muscle in rats[J].Physiol Res,2005,54(2):193-199
(6)宁廷选等，脂质过氧化物与辐射损伤的研究[J].中国生化药物杂志，1998，（2）：26-27
(7)周进，肩关节轴向拔伸手法及其解剖学基础[J].按摩与康复医学，2014,5（11）：96-97
﹡基金项目：云南省教育厅科学研究基金理工类重点项目，编号：2014Z123
作者简介：周进（1977-1-），四川成都，男，汉族，本科，主治医师，主要从事骨科康复，神经康复工作。
论文作者:周进1,王春林1 岳阳1 胡鸾1 田启东1 柴塬2 张军2
论文发表刊物:《中国医学人文》2016年第7期
论文发表时间:2016/6/29
标签：肩关节论文; 肩周炎论文; 组织论文; 局部论文; 自由基论文; 轴向论文; 肌腱论文; 《中国医学人文》2016年第7期论文;