黑龙江省中医医院儿科二/小儿肾病科 150036
【摘 要】目的：探讨当归芍药散对阿霉素肾病幼鼠治疗作用；方法：4周龄幼鼠32只，分为空白组、模型组、坎地沙坦组及当归芍药组，模型组、坎地沙坦组及当归芍药组幼鼠建立肾病综合征模型，造模成功后，各组给与相应药物，空白组、模型组则予以等量生理盐水，持续4周，于给药前及第4周末观测幼鼠一般状态、24小时尿蛋白定量、腹主动脉取血测血浆白蛋白、甘油三酯水平；光镜观测肾脏病理改变；结果：0周模型组与空白组体重比较，差异有统计学意义（p＜0.05），尿蛋白等指标虽有所改变，但与空白组比较差异无统计学意义（p＞0.05）；这些指标在4周末时进一步恶化，差异有统计学意义（p＜0.01）；经过药物干预的幼鼠上述指标均有所改善，与模型组比较，差异有统计学意义（p＜0.05）。光镜下可见系膜细胞少见或轻微增生，基质轻微增宽，或只有轻微的局灶、节段性系膜增厚，经药物干预后，较模型组肾小球基底膜增厚略见缓解。结论：当归芍药散可降低阿霉素肾病幼鼠尿蛋白及总胆固醇水平，升高其血浆白蛋白水平，并能一定程度上改善其病理形态，对阿霉素肾病幼鼠具有治疗作用。
【关键词】当归芍药散；阿霉素肾病；幼鼠
[Abstract] Objective：To explore the therapeutic effect of Danggui Shaoyao San on adriamycin nephropathy in young rats；Methods：Thirty-two 4-week-old young rats were divided into blank group，model group，candesartan group and Danggui Shaoyao group. Nephrotic syndrome models were established in model group，candesartan group and Danggui Shaoyao group. After successful modeling，the corresponding drugs were given to each group，while the blank group and model group were given the same amount of saline. For 4 weeks，the general state，24-hour urinary protein quantification，abdominal aorta blood collection，plasma albumin and triglyceride levels were observed before and at the end of the 4th week. The pathological changes of kidney were observed by light microscopy. Results：There was significant difference in body weight between the 0-week model group and the blank group（p < 0.05）. There was no statistical difference in urinary protein and other indicators between the 0-week model group and the blank group（p < 0.05）. Learning significance（p > 0.05）；these indicators deteriorated further at the end of the 4th week，with statistical significance（p < 0.01）；the above indicators were improved after drug intervention in young rats，and compared with the model group，the difference was statistically significant（p < 0.05）. Under light microscopy，mesangial cells were rare or slightly proliferated，the matrix was slightly widened，or only slightly focal and segmental mesangial thickening was observed. After drug intervention，the glomerular basement membrane thickening was slightly alleviated compared with the model group. CONCLUSION：Danggui Shaoyao Powder can reduce the levels of urinary protein and total cholesterol in adriamycin nephropathy young rats，increase the level of plasma albumin，and improve the pathological morphology to a certain extent. It has therapeutic effect on adriamycin nephropathy young rats.
Danggui Shaoyao Powder；Adriamycin Nephropathy；Young Rats
近年来随着空气污染、食品添加剂等的泛滥，小儿肾病综合征呈现多发趋势，该病病因多为感染、免疫功能紊乱等，肾病综合征以水肿为主要症状，实验室检查可见大量蛋白尿、低蛋白血症和高脂血症，[1]。小儿常见病理类型为微小病变型，其蛋白尿产生与肾小球滤过膜有关，肾小球滤过膜具有内皮细胞、基底膜、足细胞三层结构，足细胞受损多出现在肾病早期或微小病变型之中，足细胞损伤后可引起滤过屏障功能的改变，导致蛋白重吸收障碍，从而形成蛋白尿[2]。祖国医学将肾病综合征归属于“水肿”、“尿浊”，范畴，病因多为脾虚湿盛或脾虚失摄，当归芍药散出自《金匮要略》，可健脾利湿，养血调肝[3]，笔者尝试以之治疗小儿肾病综合征效果较好，现拟通过动物实验探讨其作用机制，尝试建立动物治疗模型，成文如下：
1 资料与方法
1.1 实验动物及分组方法
实验选取4周龄雄性SD幼年大鼠64只，平均体重214.43±8.47g，于动物实验中心饲养，实验室正常通风保暖，垫料及饲养笼每3天更换1次，保证氨浓度不超过20ppm，温度不低于20℃，不高于25℃，湿度50%~60%，饲养笼温度不超过室温2℃，湿度不超过室内湿度5%。所有幼鼠适应性饲养3天，随机分为空白组、模型组、坎地沙坦组、当归芍药组，每组8只分笼饲养。
1.2实验药物
实验用西药坎地沙坦酯片厂家重庆圣华曦，规格4mg/片，蒸馏水制备为20mg/mL混悬液备用，当归芍药散采用黑龙江省中医医院药局饮片，方药为：当归9g，芍药18g，川芎24g，茯苓12g，泽泻24g，炒白术12g。煎药方法：上述药材以水浸泡1小时后，反复煎煮3次，取汁混合，60℃水浴浓缩至生药浓度1.5g/mL备用。
1.3实验试剂及仪器
阿霉素购自合肥巴斯夫生物科技有限公司，以生理盐水配制为1mg/ml溶液，2℃保存；水合氯醛购自青岛宇龙海藻有限公司，生理盐水配置为10%溶液，4℃保存，其他病理学相关试剂如甲醛溶液、酒精、二甲苯、光学显微镜、石蜡切片机等由黑龙江中医药大学实验中心提供，全自动生化仪由黑龙江省中医医院检验科提供。
1.4模型制备及给药方法
除空白组外，其余幼鼠适应性饲养3天后予以造模，幼鼠于实验前12小时起禁食不禁水，实验时以固定器固定，温水浸泡鼠尾使尾静脉充盈，碘伏消毒后取生理盐水注射器自腹侧尾静脉远端1/3处，斜行15°角进针，刺入血管后平行进针，回抽见血说明针头在静脉中，更换换阿霉素注射液缓慢推注，剂量为4mg/kg/只，推注过程中避免渗漏，注完后推注0.2~0.3ml生理盐水冲净针头内药物。空白组予以等量生理盐水尾静脉注射。7天后重复上述操作，阿霉素剂量为2.5mg/kg/只[4]。二次给药7天后开始给药，各组以公式：幼鼠剂量（g／kg）=儿童剂量（g／kg）×折算系数（6）[5]分别以相应药物灌胃，空白组、模型组予以等量生理盐水，持续4周。
1.5 观察指标
将给药起始记为0周，0周及给药4周后，每组取8只幼鼠以代谢笼留取24小时尿，检测 24 h 尿蛋白定量，水合氯醛麻醉幼鼠后腹主动脉取血后检测血浆白蛋白、甘油三酯水平；将肾脏组织学固定后包埋、切片、HE染色，光镜下观察肾脏损伤情况。
1.6 统计学方法
数据以Excel录入，导入SPSS20.0统计软件分析，计数资料差异性采用卡方检验，计量资料采用t检验，P＜0.05有统计学意义。
2 结果
2.1一般状态
空白组幼鼠活泼，食欲正常，一般状态较好，模型组幼鼠自0周开始活动度降低，进食、饮水量均减少，精神倦怠，皮毛光泽暗，眼睑可见水肿，四肢末端、尾部等处皮肤黏膜呈现苍白，至4周时症状加重。药物干预的各组活动度、食欲及水肿情况略好于模型组。
2.2 体重、生化指标结果
0周模型组与空白组体重比较，差异有统计学意义（p＜0.05），尿蛋白等指标虽有所改变，但与空白组比较差异无统计学意义（p＞0.05）；这些指标在4周末时进一步恶化，差异有统计学意义（p＜0.01）；经过药物干预的幼鼠上述指标均有所改善，与模型组比较，差异有统计学意义（p＜0.05）。见表1：
表1：体重、生化指标结果
注：编号1空白组0周，2模型组0周，3当归芍药组0周，4坎地沙坦组0周，5空白组4周，6模型组4周，7当归芍药组4周，8坎地沙坦组4周，
3讨论
原发性肾病综合征临床上以大量蛋白尿，低蛋白血症，高脂血症，水肿为主要表现[6]，小儿肾病综合征其病理类型以微小病变型为主，但部分微小病变型并不容易控制，容易进展其他严重病理类型[7]。祖国医学并无肾病综合征病名，而依据其症状命名为“水肿”或“尿浊”等，水肿系脾虚运化水液不利，致水液输布于周身，发为水肿，尿浊系脾气不足，不能固摄精微，以致精微物质随尿流失所致[8]。《金匮要略?水气病脉证并治第十四》中指出，“血不利则为水”，指出了血瘀可以致使水肿病，“曰血分者，谓虽病于水，而实出淤血也”。故治则以健脾利湿、养血柔肝为主，当归芍药散中以当归、芍药养血柔肝，川芎活血化瘀，茯苓，泽泻渗湿利水，炒白术健脾燥湿，全方共奏健脾利湿，养血柔肝之功[9]。
本研究结果提示，空白组幼鼠活泼，食欲正常，一般状态较好，模型组幼鼠自0周末开始活动度降低，进食、饮水量均减少，精神倦怠，皮毛光泽暗，眼睑可见水肿，四肢末端、尾部等处皮肤黏膜呈现苍白，至4周末时症状加重。药物干预的各组活动度、食欲及水肿情况略好于模型组。0周模型组与空白组体重比较，差异有统计学意义（p＜0.05），尿蛋白等指标虽有所改变，但与空白组比较差异无统计学意义（p＞0.05）；这些指标在4周末时进一步恶化，差异有统计学意义（p＜0.01）；提示阿霉素对幼鼠肾脏具有慢性损伤作用，可导致蛋白尿、低蛋白血症和高脂血症等肾病综合症症状，这些指标可能在2周或3周时差异就已出现统计学意义，这与其他学者对肾病综合征模型的研究基本符合[10]。经过药物干预后，当归芍药组及坎地沙坦组体重有所恢复，尿蛋白水平降低，血浆白蛋白有所回升，总胆固醇也有所下降，与模型组比较，差异有统计学意义（p＜0.05），提示当归芍药散与坎地沙坦酯可降低阿霉素肾病幼鼠尿蛋白水平和高脂血症，并能一定程度上恢复其血浆白蛋白水平，具有一定的治疗作用。病理结果显示，光镜下肾小球基本正常，偶见上皮细胞肿胀、空泡样变性或脂肪变性，本研究中当归芍药组及坎地沙坦组经药物干预后，较模型组肾小球基底膜增厚略见缓解，提示当归芍药散可一定程度上改善微小病变型病理形态。因微小病变型病理改变不明显，故进一步研究应在电镜下观察肾小球基底膜结构改变情况。
综上所述，当归芍药散可降低阿霉素肾病幼鼠尿蛋白及总胆固醇水平，升高其血浆白蛋白水平，并能一定程度上改善其病理形态，对阿霉素肾病幼鼠具有治疗作用。
参考文献：
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作者简介：张天照（1985-），黑龙江省中医医院儿科二/小儿肾病科，硕士，主治医师
课题来源：黑龙江省自然科学基金面上项目，编号H2015106
论文作者:张天照
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2019年3月下第6期
论文发表时间:2019/8/14
标签：芍药论文; 当归论文; 模型论文; 统计学论文; 阿霉素论文; 肾病论文; 空白论文; 《中国医学人文》(学术版)2019年3月下第6期论文;