（连云港市第一人民医院 江苏 连云港 222002）
【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定疗肺宁片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的方法。方法：色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5 ?m,4.6×150 mm）；流速为1.0 ml/min；柱温：30℃；流动相：甲醇-水（52:48）；用检测波长切换法；进样量：10 ?l。结果：穿心莲内酯在浓度为5.030～80.48 ?g/ml时线性关系良好，r=0.9998，平均回收率为102.23％；RSD为1.4％（n=6）；脱水穿心莲内酯在浓度为5.090～81.44 ?g/ml时线性关系良好，r=0.9997，平均回收率为100.79％；RSD为1.1％（n=6）。结论：该方法简单、准确，并且同时测定该制剂中两种有效成分的含量，可作为疗肺宁片的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法；疗肺宁片；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）17-0027-03
HPLC method for determination of cure lung ning in andrographis paniculta lactone content of lactone and dehydrations Wang Baolin Sun Xiao. The First People's Hospital of Lianyungang City, Jiangsu Province, Lianyungang 222002, China
【Abstract】Objectiv Establish a high performance liquid chromatography determination of cure pulmonary ning in paniculta lactone and dehydration of the content of method. Methods Chromatographic column: the Ultimate XB - C18 column (including 5 m, 4.6 * 150 mm). The flow rate of 1.0 ml/min; Column temperature: 30 ℃; Mobile phase: methanol-water (52:48); By detection wavelength switching method; Sample quantity: 10 (including l. Results Paniculta lactone in concentration of 5.030 ~ 80.48 (including g/ml good linear relation, r = 0.9998, the average recovery was 102.23%. The RSD was 1.4% (n = 6); Dehydration paniculta lactone in concentration of 5.090 ~ 81.44 (including g/ml good linear relation, r = 0.9997, the average recovery was 100.79%; The RSD was 1.1% (n = 6). Conclusions The method is simple, accurate, and simultaneously determine the content of two kinds of active ingredients in the preparation, quality control can be used as cure lung ning tablets.
【Key words】High performance liquid chromatography; Cure lung ning slices; Paniculta lactone; Dehydration paniculta lactone
疗肺宁片由百部、穿心莲、羊乳根和白及组成，可润肺，清热，止血，用于肺结核。其组成中的穿心莲主要成分为穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，具有清热解毒，消肿止痛的功效，主要用于感冒发热、咽喉肿痛、口舌生疮、顿咳劳嗽、泄泻痢疾、热淋涩痛、痈肿疮疡、蛇虫咬伤等症[1]。其含量对于疗肺宁片药效的发挥起着重要的作用，而现有文献并无对该制剂中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量测定的报道。本研究为了进一步控制疗肺宁片的质量，以高效液相色谱法同时测定了疗肺宁片中脱水穿心莲内酯以及穿心莲内酯的含量，方法简便、灵敏、准确、可靠。
1.仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪；穿心莲内酯对照品（供应处为中国药品生物制品检定所，批号110797-201108）；脱水穿心莲内酯对照品（供应处为中国药品生物制品检定所，批号110854-201007）；疗肺宁片（由厂家提供，批号：130601，130712，130809），甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5 ?m，4.6×150 mm）；流动相：甲醇-水（52:48）；流速：1.0 ml/min；进样量：10 ?l；柱温30℃；检测波长：0～10 min（224 nm），10～30 min（250 nm）。
2.2 对照品溶液制备
分别精密称取适量的穿心莲内酯以及脱水穿心莲内酯对照品，用甲醇溶解制成101.8 ?g/ml、100.6 ?g/ml的储备液；分别精密量取上述储备液适量，用甲醇溶解制成25.15 ?g/ml、25.45 ?g/ml的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备[2-4]
取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，精密称定约1片的重量，放置于具塞锥形瓶，精密量取25 ml甲醇，加入，密塞，称定重量，超声处理（功率500 W，频率80 KHz）30分钟，放冷，摇匀，滤过。精密量取5 ml续滤液，上于中性氧化铝柱（200～300目，5 g，内径为1.5 cm）上，用甲醇15 ml洗脱，将洗脱液收集，蒸至近干，加甲醇使溶解，转移至5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 线性范围
各精密量取上述两种对照品储备液0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、4.0 ml、8.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，各取10 ?l注入高效液相色谱仪进行测定，测量峰面积。以对照品浓度（?g/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，经线性回归。结果表明：穿心莲内酯在5.030～80.48 ?g/ml范围内与峰面积线性关系良好，其回归方程为：Y=18.958X+2.2851，r=0.9998；脱水穿心莲内酯在5.090～81.44 ?g/ml范围内与峰面积线性关系良好，其回归方程为：Y=14.319X+5.3343，r=0.9997。
2.5 干扰试验
将除去穿心莲的其他几味药按处方所述方法制成阴性供试品，照“2.3”项下操作，制成阴性对照品溶液。在相同色谱条件下进样。色谱图见图1。
2.6 精密度测试
精密量取制备的对照品溶液10 ?l，连续进样6次，记录峰面积，结果 穿心莲内酯峰面积：RSD=1.2%（n=6）；脱水穿心莲内酯峰面积：RSD=0.9%（n=6）。
2.7 稳定性测试
精密吸取制备的溶液（批号：130601）溶液10 ?l，分别在0、3、6、9、12、18、24 h进样，结果 24 h内穿心莲内酯峰面积：RSD=1.5%(n=7)；脱水穿心莲内酯峰面积：RSD=1.3%（n=7）。结果表明，供试液待测组分在24h内稳定。
2.8 重复性测试
取同一样品（批号：130601）6份，测定含量，结果表明，本方法重复性良好，穿心莲内酯含量：RSD=0.8％（n=6）；脱水穿心莲内酯含量：RSD=1.2％（n=6）。
2.9 加样回收率测试
取同一样品（批号：130601）6份，每份取0.5片的重量，精密称定，分别加入一定量的脱水穿心莲内酯对照品以及穿心莲内酯，按2.3项操作，进样，测得回收率，结果表明：穿心莲内酯平均回收率为102.23％，RSD为1.4％（n=6）；脱水穿心莲内酯平均回收率为100.79％，RSD为1.1％（n=6）。
2.10 测定样品
按2.3项下条件，分别测定3批疗肺宁片样品含量，结果见表1。
3.讨论
3.1 检测波长的选择
在200～400nm波长范围内对各组分的对照品溶液进行紫外光谱扫描，结果表明穿心莲内酯在224nm的波长处有最大吸收，脱水穿心莲内酯在250nm的波长处有最大吸收，故用检测波长切换方法在这两种物质的λmax处进行检测。
3.2 提取方法
本研究参照中国药典2010版以及相关文献[5-9]中关于穿心莲有效成分提取方法的描述，对用甲醇超声提取、甲醇超声提取后过中性氧化铝柱纯化、甲醇超声提取后用正己烷萃取这三种样品处理方法进行了比较，结果表明样品仅超声提取后杂质过多，无法使穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯与其他组分分离，采用正己烷萃取样品有效成分损失大，而过中性氧化铝柱洗脱效果最理想，穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯得到良好分离，且有效成分几乎无损失，故采用甲醇超声提取后过中性氧化铝柱的样品处理方法。
【参考文献】
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论文作者:王保琳,孙晓
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第17期供稿
论文发表时间:2015/8/7
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