DOI：10.7504/nk2016010203 中图分类号：R587.1 文献标识码：A
摘要：目的 研究分析鉴定手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6的结果。方法 可以随机选取50例医院在2013年1月到2015年1月期间收治的手足口病患儿，通过采集患儿的咽拭子作为标本，对能够引起手足口病的病原体柯萨奇病毒开展鉴定分析，具体可通过 BLAST 程序，分析其 A10和A6产生的影响。结果对手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6进行分析，得出在患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒引物 040-011 能够对 A10 和 A6 产生良好的基因扩增特异性；手足口病男性患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒检测阳性率达到52.3%，女性病原体柯萨奇病毒检测阳性率达到13.8%，对比存在差异（P<0.05）；其中，在原体柯萨奇病毒检测中，检测到12例为A10阳性, 3 例为A 6阳性，同时病毒中A10阳性、A 6阳性的比例分别是24.0%、6.0%，对比存在差异（P<0.05）；同时A10 和 A6也是手足口病患儿的重要病原。结论 在临床诊治鉴定手足口病过程中，可以根据患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6鉴定结果，强化手足口病病原检测工作，通过A10、A6变化来为患儿制定有效治疗决策，以确保提升临床手足口病治疗方案效果。
关键词：咽拭子病原体、手足口病、A10、A6、柯萨奇病毒
相关医学文献指出，针对临床手足口病治疗中，由于该病有一定的传染性，且3 岁以下的儿童群体多发手足口病，不仅能引起患儿的手、足、口部位出现疱疹，严重的也会引发患儿出现肺水肿、心肌炎以及循环障碍等并发症，影响患儿身体健康。对此，加强手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒监测鉴定工作，提高临床中对病原体病毒监测的敏感性，会成为目前临床中控制该病的关键因素。本研究针对医院收治的50例手足口病患儿，研究其临床资料，对对手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6检鉴定分析，以确保强化监测手足口病病原，制定良好的临床疾病诊治方案。
1 资料与方法
资料
对于医院在2013年1月到2015年1月收治的50例手足口病患儿进行研究，且患儿也均符合临床诊断手足口病疾病的标准[2]，其中男性手足口病患儿有21例，女性患儿则有29例，且患儿的年龄范围在1-12岁之间，患儿平均年龄是（6.5±0.3）岁，符合本次研究需求。
1.2方法
在手足口病患儿咽拭子标本的采集中，可以应用北京天根公司生产的病毒 RNA 提取试剂盒，根据说明书进行操作，提取患儿的咽拭子标本。然后可以将提取得到的 RNA 溶在 60 μl Rnase - freedd H2O之中,将其放置在-20 ℃环境下进行低温保存。再者，可以对标本开展核酸检测，主要应用由中山大学达安基因股份生产的试剂，应用“聚合酶链反应-荧光探针体外扩增法”，对患儿的肠道病毒通用型（EV）、以及柯萨奇病毒进行核酸检测。同时，可以开展引物扩增分析，主要就是应用上海博尚生物有限公司合成的引物。其引物是：
CVA16编号：040:5′-AT G T AYRT ICCIMCIGGIGC-3′(2905 ～ 2924 )
CVB1的编号：
然后，可以应用以上的引物，扩增咽拭子人肠道病毒(HEV)VP1 区的3′端核苷酸部分。
最后，将测得病毒部分 VP1 区 3′端的基因序列通过在线 BLAST 程序进行比对 , 以核苷酸序列 M ax i dent 大于75 %的最大值鉴定血清型。
1.3评定标准
分析手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6检测阳性率，若是检测标本中，其扩增曲线没有出现对数增长期，或是其阈值（Ct）＞35 ，就表示为阴性；若检测标本中 Ct＜35 ，且引物的扩增曲线产生显著的对数增长期，则可表示为阳性。
1.4统计处理
针对本次研究的结果，应用统计学SSPS20.0版本软件处理，对于其中的计数资料，能够用率%来进行表示，行x2方面检验；且以P<0.05结果表示有统计学意义。
2结果
2.1对比病毒中A10 、 A6阳性率鉴定情况
在本次鉴定分析中，通过对手足口病患儿咽拭子中的病原体柯萨奇病毒开展A10、A6鉴定分析，并通过利用 040-011引物对病原体开展RT-PCR扩增分析,从而能够得到长度约为 400 bp的VP1 区 3′核苷酸 。 经运用在线BLAST 程序进行比对 ,得出在患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒引物 040-011 能够对 A10 和 A6 产生良好的基因扩增特异性，同时A10 和 A6 也是手足口病患儿的重要病原。柯萨奇病毒A10、A6鉴定结果方面，具体见表1中所示：
表1 病原体病毒中A10 、A6的鉴定结果分析
经x2检验，男性与女性患儿对比，存在差异*P<0.05。
2.3对比病毒中A10 、 A6阳性率鉴定情况
对于患儿病原体柯萨奇病毒阳性率检测中，病毒中A10 、A6的阳性率进行比较分析，其之间存在统计的差异(P<0.05)。相关数据如表3之中所示：
表3 病毒A10 、 A6阳性率对比
经x2检验，病毒A10与A6对比，存在差异*P<0.05。
3 讨论
临床研究证实，手足口病的起因，多是由于人体肠道被病毒感染，从而病毒会经人体的胃肠道、呼吸道，引发患者感染手足口病【3】。对于临床手足口病患儿，由于该病具备传染性，因此本次研究中，通过分析鉴定病原体柯萨奇病毒A10 、 A6，有助于为临床诊断治疗手足口病，以及预防手足口病传染，能够提供有力的科学依据，发挥积极研究意义。
在手足口病发病后，能够在患儿咽拭子中检测出病毒，并且此时已有传染力【4】。相关研究指出，在手足口病患儿发病后 1 周内病毒传染力最强【5】。而在发病 1~2 周，此时手足口病患儿体内，其病原体中的柯萨奇病毒A10 、 A6也会从而人体的自咽部被排出体外，而若是患儿发病到3~5 周之时，则病毒可以从粪便中排出。研究人员证实，对于临床手足口病患儿，对于感染咽拭子病原体柯萨奇病毒A6 、A10 的患儿，容易出现神经系统症状,而对于以部分感染咽拭子病原体柯萨奇病毒A6 的患儿，在临床治疗恢复期伴有脱甲【6】。故此，有效提高临床对手足口病检测手段，加强临床医生对手足口病疾病的有关认识，强化患儿病原体柯萨奇病毒鉴定工作，早发现、早诊断、早治疗，对有效防控手足口病传染以及诊治手足口病均具有重要的临床意义。
针对本次研究中，得出男性患儿病原体柯萨奇病毒阳性率检测中，阳性11例，阳性率52.3%；女性患儿病原体柯萨奇病毒阳性率检测中，阳性4例，阳性率13.8%，男性患儿与女性患儿在病毒检测阳性率方面进行比较存在差异 (P<0.05)。本次研究还得出，对于患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒阳性率检测中，病毒中A10 、 A6阳性率方面进行比较，对比存在差异 (P<0.05)。并且临床也有人员研究证实，在手足口病发病后，可以在患儿的咽拭子之中检测出病毒EV71，并且病毒A6 、A10 在引起手足口病中的病原中，与EV71 同等重要【7】。相关研究指出， A10是特有基因型，从患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒进化特征上分析, A10基因在进化关系上形成了一个独特的谱系；同时在A6 型引起的手足口病方面，发现A6 株与台湾株核苷酸同源性高,位于同一个进化树中，达 92.3%【8】。应加强对手足口病柯萨奇病毒A10、A6的检测鉴定工，以全面了解患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒在手足口病中的位置, 掌握其病毒A10、A6的特征，有效改善临床诊治手足口病的方案，将会发挥积极的影响。
综上所述，在临床治疗手足口病患儿中，可以根据患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6鉴定结果，强化手足口病病原检测工作，通过A10、A6变化来为患儿制定有效治疗决策，以确保提升临床手足口病治疗方案效果。
参考文献：
[1] 梅玉发,杨小丽,王喜云等.2008-2013年湖北省十堰地区手足口病病原谱动态分析[J].疾病监测,2014,29(6):437-440.
[2] 苏旭,吕莉琨,李力等.荧光定量RT-PCR检测柯萨奇病毒A组6和10型的方法建立及应用[J].国际病毒学杂志,2015,22(6):372-375.
[3] 刘莹莹,于秋丽,赵文娜等.河北省手足口病伴脱甲症的流行特征分析[J].疾病监测,2015,30(12):1036-1039.
[4] 蔡明毅,赵文良,沈琦等.上海市某医院2011-2014年手足口病病原谱及流行特征分析[J].国际病毒学杂志,2015,22(6):376-379.
[5] 候文郁,陈海龙,李焱等.手足口病16964例流行病学及病原学分析[J].陕西医学杂志,2014,(5):626-628.
[6] 陈茜,董晓春,孙美玲等.2013-2014年天津市手足口病流行病学特征分析[J].疾病监测,2015,30(6):463-467.
[7] 刘社兰.WHO手足口病临床管理与公共卫生应对指南第二部分病毒学[J].疾病监测,2013,28(1):83-84.
[8] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.手足口病监测试点运行方案[J].中国实用乡村医生杂志,2015,22(21):3-6.
论文作者:孙振璐
论文发表刊物:《中国实用内科杂志》2016年7月第7期
论文发表时间:2016/12/12
标签：手足论文; 患儿论文; 病毒论文; 病原体论文; 萨奇论文; 鉴定论文; 引物论文; 《中国实用内科杂志》2016年7月第7期论文;