邵阳市疾病预防控制中心 湖南邵阳 422000
【摘 要】目的 探讨儿童腹泻病毒检验的结果分析和方法比对。方法 取我市疾病预防控制中心2014~2015年196例病毒性腹泻儿童作为研究对象，196例患儿腹泻粪便标本采用胶体金法和荧光RT-PCR核酸检测方法对轮状病毒、诺如病毒、肠道腺病毒和星状病毒进行检测，对比四种病毒检测阳性结果在性别和各年龄段分布情况，对比两种检测方法的检测结果。结果 监测结果显示轮状病毒的总阳性检出率为20.92%（41/196），诺如病毒的总阳性检出率为30.16%（60/196），轮状病毒和诺如病毒总阳性检出率较高；肠道腺病毒总阳性检出率为1.53%（3/196），星状病毒总的阳性检出率为1.02%（2/196），肠道腺病毒和星状病毒的阳性检出率较低。除轮状病毒外、诺如病毒、肠道腺病毒和星状病毒性腹泻在儿童性别、年龄组间无显著性差异，轮状病毒阳性检出率最高的年龄组为0~岁，诺如病毒各年龄组都有较高的阳性检出率。男童、女童性别之间无显著性差异。两种检测方法阳性检出率显示有显著性差异。结论显示人群普遍易感，应加强饮食和卫生管理，合理处理粪便和污水，尤其加强托幼机构及公共场所卫生管理。轮状病毒状病毒感染主要在2岁以下儿童。胶体金法对大规模的无症状带菌者筛查应用，实时荧光RT-PCR快速准确及时的提供早期诊断结果，实际工作中应用广泛
【关键词】儿童；腹泻病毒检验；结果分析
腹泻是临床常见的疾病，主要是因为多种病原体和多种因素导致大便次数增多和大便性状发生改变出现的消化道疾病[1-2]。儿童，尤其是婴幼儿的消化系统发育不成熟，患儿机体免疫力较差，肠道正常菌群容易失调，因此引起腹泻。引起腹泻的原因主要是感染和非感染因素两种，其中由于感染导致的腹泻临床发病率较高。
1 材料和方法
1.1标本来源 我市疾病预防控制中心2014~2015年哨点医院监测的196例腹泻儿童为研究对象，年龄在0 ~12岁之间，患儿均符合病毒性腹泻的诊断标准，24小时内出现腹泻3次以上，大多数粪便呈水样。
1.2方法 取196例患儿的粪便标本采用胶体金法和荧光RT-PCR核酸检测方法对轮状病毒、诺如病毒、肠道腺病毒和星状病毒进行检测。
1.2.1 粪便标本处理在患儿出现腹泻后，及早的收集患儿的粪便标本，采集粪便2~3g左右，放在无菌的大便采样瓶瓶中，取0.5g固体粪便或0.5ml液体粪便加入装有灭菌PBS缓冲液1ml的EP管，置于漩涡振荡器充分混匀，用冷冻离心机≧3000r/min离心30min，取上清液立即检测或置-20℃保存备用。放入-20℃的冰箱冷冻保存的检验标本检测需要解冻，标本恢复常温后[3-4]实验。
1.2.2 胶体金法检测 轮状病毒抗原检测试剂和诺如病毒抗原检测试剂、肠道腺病毒抗原检测试剂和星状病毒抗原胶体金检测试剂均在有效期内使用。将以处理好的粪便和试剂放在室温，恢复到20~25℃后，避开阳光进行检测，水平放置检测卡，垂直滴加3~5滴样本，等待20分钟左右，可检测出结果。评价标准[5]观察反应窗中的C标记和T标记是否出现检测线，如果10分钟后，两个标记处同时出现蓝色检测线，那么检验结果为阳性，如果10分钟后C标记出出现蓝色检测线，T标记未出现检测线，检测结果为阴性。如果10分钟后，C和T标记未出现蓝色检测线，那么结果无效。
1.2.3 荧光RT-PCR核酸检测 提取试剂为采用Qeneaid 公司的Viral Nucleic Acid Extraction KitⅡ RNA试剂盒（货号：VR100），按说明书操作，最终收集RNA模板60微升备用。核酸检测试剂均为江苏硕世生物科技有限公司生产：轮状病毒A群、B群、C群核酸检测试剂盒（货号：JC50301），诺如病毒GⅠ、GⅡ型核酸检测试剂盒（货号：JC50201），肠道腺病毒（货号：JC50106）和星状病毒（货号：JC50104）核酸检测试剂盒检测在有效期内使用，按说明书操作使用。
1.3 统计分析 采用SPSS19.0软件对资料进行统计分析。
2 结果
2.1不同性别检出情况 196例腹泻儿童中，有男童105例（构成比53.57%），女童91例（构成比46.43%）；男童腹泻病毒阳性标本54份（阳性率为51.43%），女童腹泻病毒阳性标本52份（阳性率57.14%）经检验，X2=0.641，P﹥0.05，不同性别阳性检出率无显著性差异。
2.2 不同年龄检出情况 轮状病毒以2岁以下儿童阳性检出率很高达到48.10%（38/79），0岁组阳性检出率达55.10%（27/49），X2=61.93，P﹤0.05各年龄组有显著性差异。诺如病毒各年龄组都有较高的阳性检出率，X2=10.02，P﹥0.05各年龄组间阳性检出率无显著性差异。肠道腺病毒和星状病毒阳性检出率较低，各年龄组之间阳性检出率无显著性差异，肠道腺病毒X2=6.72，P﹥0.05星状病毒X2=11.18，P﹥0.05。
3 讨论
腹泻是影响全世界人群的一种疾病，主要是感染和非感染因素两种，每年全球感染性腹泻数十亿人次，每个国家均有流行，由于感染导致的腹泻临床发病率较高，病毒感染腹泻又占非常大的比例，尤其是婴幼儿的消化系统发育不成熟，机体免疫力较差，肠道细菌容易菌群失调，因此容易引起病毒性腹泻。196例样本检测结果显示病毒总阳性检出率为54.08%（106/196），与报道病毒性腹泻以占感染性腹泻的75%以上[6]有差别，显示各地区腹泻的致病原构成可能不一致；轮状病毒在儿童病毒性腹泻阳性检出率为20.92（41/196）和诺如病毒在儿童病毒性腹泻中阳性检出率为30.61（60/196），与轮状病毒和诺如病毒为主与有关报道一致[7]。轮状病毒两岁以下儿童的阳性检出率为48.10%（38/79），显示轮状病毒感染主要在2岁以下儿童，X2=61.93，P﹤0.05各年龄组有显著性差异；诺如病毒各年龄组都有较高的阳性检出率，X2=10.02，P﹥0.05各年龄组间阳性检出率无显著性差异；肠道腺病毒和星状病毒的阳性检出率较低为2.55（5/196），各年龄组之间阳性检出率无显著性差异，肠道腺病毒X2=6.72，P﹥0.05星状病毒X2=11.18，P﹥0.05；.不同性别之间差别无显著差异，病毒性腹泻一般通过粪-口途径感染，极少数通过呼吸道和其他途径感染，除轮状病毒外各年龄组无显著差异，感染后普遍不能产生长时间的抗体保护显示人群普遍易感，应加强饮食和卫生管理，合理处理粪便和污水，尤其加强托幼机构及公共场所卫生管理，以免发生暴发流行。不同的的检测方法结果有显著差异，胶体金法灵敏度、特异性稍低，疫情处理时可能出现误诊，但对大规模的无症状带菌者筛查应用较方便、快捷、成本低廉，但对散发病例须立即确诊的样本应选用实时荧光RT-PCR虽价格贵，但特异性强、灵敏度高和操作简洁能快速准确及时的提供早期诊断结果，实际工作中应用广泛。
参考文献：
[1]王琼，张银辉，杨来智等.深圳市儿童秋冬季腹泻诺如病毒检测及基因型分析[J].中华实验和临床病毒学杂志，2014，28（6）：410-412.
[2]乔英琴，余凤，陈婉冰等.2014年重庆地区511例急性腹泻儿童中诺如病毒腹泻流行特点与分子亚型鉴定[J].第三军医大学学报，2016，38（1）：101-106.
[3]曾德兴，高民胜，彭涛等.腹泻儿童中病毒检验的结果分析及意义[J].中外医学研究，2015，（1）：69-70.
[4]王琼，张银辉，杨来智等.深圳市儿童秋冬季腹泻诺如病毒检测及基因型分析[J].中华实验和临床病毒学杂志，2014，28（6）：410-412.
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[7]张海龙，李苑，张克春.2010年广东省深圳市病毒性腹泻监测结果分析[J].疾病控制，2012.27（2）：97-100.
论文作者:周爱华
论文发表刊物:《航空军医》2016年第9期
论文发表时间:2016/6/24
标签：病毒论文; 阳性论文; 检出论文; 年龄组论文; 肠道论文; 儿童论文; 粪便论文; 《航空军医》2016年第9期论文;