林良惠 杨龙珍 吴孙志
（广东省中医院 广东 广州 510120）
【摘要】 目的：建立以高效液相色谱法测定复方芩连肠溶片中盐酸小檗碱含量的方法。方法：以Waters XterraRP18为色谱柱，流动相为乙腈-水＝55：45，检测波长为265nm，流速为1ml·min-1，柱温为25℃，进样量是10μl。结果：盐酸小檗碱在3.071μg～24.568μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为100.2％，RSD=0.9％。结论：本方法简便、准确、专属性强，可用于该制剂的含量测定。
【关键词】 复方芩连肠溶片；高效液相色谱法；盐酸小檗碱
【中图分类号】R927.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）24-0326-02
Determination of the Content of Berberine Hydrochloride in Fufang Qinlian Changrong Tablets by RP-HPLC
【Abstract】 Objective: To establish a method for the determination of berberine hydrochloride in fufang qinlian changrong tablets. Methods: HPLC was performed on a C18 column using acetonitrile-water (55:45) as the mobile phase at a flow rate of 1ml·min-1. The detection wavelength was at 265nm. The column temperature was 25℃ and the sample size w as 10μl. Results: The linear range of berberine hydrochloride was 3.071μg～24.568μg (r= 0.9999), the average recovery was 100.2％(RSD=0.9%). Conclusions: The method is simple, accurate, special and can be used for the quality control of fufang qinlian changrong tablets.
【Key words】 fufang qinlian changrong tablets; HPLC; berberine hydrochloride
该肠溶片是按照中医药理论组方，经多年临床经验用于治疗溃疡性结肠炎的中药制剂，处方中主要含有黄连、黄芩、黄芪等药材。原剂型是灌肠剂，但给药不方便且质量难以控制，故对其进行二次开发制成口服肠溶片，使药物在结肠部位定位释放，提高药效。黄连是处方中君药，盐酸小檗碱是黄连中主要的有效成分，为控制制剂质量，采用高效液相色谱法测定制剂中盐酸小檗碱的含量，相关研究结果报告如下。
1.仪器和试药
仪器：岛津LC-10AVP型的高效液相色谱仪（购于日本岛津公司）。
试药：盐酸小檗碱的标准对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208）；复方芩连肠溶片（自制，批号：100301-100303）；甲醇和乙腈（色谱纯），其它的试剂均是分析纯。
2.方法和结果
2.1 色谱的条件和系统适应性试验[1] [2] [3]
色谱柱：Waters XterraRP18（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈-水（每1000 ml中含有磷酸二氢钾3.4g、十二烷基硫酸钠1.7g）＝55：45；流速为每分钟1 ml；检测波长为265nm；柱温为25℃；进样量为10μl。供试品中的盐酸小檗碱的峰可以和相近的峰达到基线而进行分离，另外，分离度和拖尾因子均符合相关要求，理论板数按照盐酸小檗碱的峰进行记得需高于3000，表明此法系统适应性好。色谱图见图1、图2、图3。
图3空白供试液的色谱图
2.2 对照品溶液的制备方法
准确称取122.84mg的盐酸小檗碱对照品装于100ml的量瓶内，加入流动相获得浓度为1.2284mg/ml的盐酸小檗碱的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备方法
取20片的该肠溶片，进行准确的称取后研磨成为药物粉末，准确的称取适量药物粉末置100ml量瓶中，加流动相制得供试品溶液。
2.4 空白供试液的制备
根据该肠溶片的相关制备工艺获得空白片，并根据“2.3”的方法制备获得空白的对照供试品的溶液。
2.5 线性关系和范围
准确的吸取2.5μl、5μl、10μl、15μl、20μl梯度的对照品溶液并分别注入到液相色谱仪中，根据上述的色谱条件对盐酸小檗碱的色谱峰面积进行测定，将测定的结果为纵坐标，盐酸小檗碱的不同进样量为横坐标，实施相应的线性回归分析，获得的回归方程为y=-263735.7+262062.3x，r值为0.9999。可以看出，盐酸小檗碱于3.071μg～24.568μg进样量的范围之内和色谱峰面积具有良好的线性相关关系。
2.6 重复性试验
取得同一批的供试药品（批号100301），研细成粉末，精密称取适量6份，装入100m的l量瓶内，加入流动相进行溶解后稀释到量瓶的刻度线，根据上述方法对盐酸小檗碱的含量进行测定。测得盐酸小檗碱的平均含量为0.417g/g，相对标准偏差为0.1％，说明试验的重复性比较好。
2.7 稳定性试验
取得同一批的“2.6”中的供试药品，于0h、1h、2h、3h、4hg分别进行进样测定，得到相对标准偏差为0.21%，可见4h内的测定结果比较稳定。
2.8 加样回收试验
取复方芩连肠溶片（批号：100301），研成药物粉末后称取适量装入100ml的量瓶内。取10ml盐酸小檗碱的对照品贮备液加到量瓶内，加入流动相进行溶解获得供试品的溶液。按“2.1”对盐酸小檗碱的峰面积进行测定，获得平均的回收率为100.2％，相对标准偏差是0.9％。
2.9 样品测定
取该肠溶片20片，研磨成细粉后称取适量转入100ml的棕色量瓶内，加入流动相进行溶解并稀释，然后对溶液进行摇匀和滤过之后获得供试品的溶液。按“2.1”对盐酸小檗碱所形成的峰面积进行一定的测定，进行三批样品的测定后得到复方芩连肠溶片的平均含量为标示量的99.8%，相对标准偏差为0.4%。
3.讨论
本实验加入磷酸二氢钾、十二烷基硫酸钠后，可和盐酸小檗碱产生中性的分子态的物质，使盐酸小檗碱的保留能力增强，所形成的峰形比较良好，理论的塔板数和拖尾因子均达到相关要求，试验结果比较满意。这种方法比较的简便和准确、精密度良好、专属性比较强，回收率较高，对于复方芩连肠溶片的含量和相关的稳定性实验的考查效果较好，使一种比较可靠和适用的试验方式。
【参考文献】
[1]李文连，徐辉，明晓峰. HPLC法测定黄连上清丸中盐酸小檗碱的含量[J].中国药品标准，2006；7（1）：21～23.
[2]王金香，张玉祥，袁旭江. HPLC法测定四季三黄胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].中药新药与临床药理，2006；17（4）：271～272.
[3]应懿，何志红，周世文，等.正交试验法优化提取黄连中小檗碱型生物碱[J].中国药房，2007；18（7）：670～672.
论文作者:林良惠 杨龙珍 吴孙志
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第24期供稿
论文发表时间:2015/10/23
标签：盐酸论文; 小檗论文; 色谱论文; 溶液论文; 复方论文; 含量论文; 试药论文; 《医药前沿》2015年第24期供稿论文;