大庆油田总医院 163001
摘要：目的 探究及讨论乳腺癌HER-2基因扩增显色原位杂交与免疫组织化学检测方法对比效果。方法 选择在2010年6月至2012年10月入住我院接受治疗的153例乳腺浸润性导管癌患者作为研究对象，153例患者均组织蜡块行免疫组化、显色原位杂交检测。结果 通过比较得出CISH基因扩增与HER-2 IHC（+++）表达结果符合率较高，二者明显相关（均P<0.01）。结论 CISH检测 HER2基因扩增结果与IHC检测蛋白表达及FISH结果高度一致，可作为乳腺癌HER2基因扩增检测的一项安全可靠的技术。
关键词：乳腺癌；HER-2；免疫组化；显色原位杂交
研究报道指出，约20%～30%的乳腺癌患者能够检测到HER-2基因扩增及过表达，该指标的研究对判断预后具有重要作用，同时也是乳腺癌患者靶向治疗药物-赫赛汀使用的唯一指标[1]。CISH是近年来发展的一种新的检测乳腺癌HER-2基因状态的方法，为了对IHC及CISH两种检测方法进行研究和对比，笔者选取了153例乳腺癌患者，回顾相关资料。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2010年6月～2012年10月，在本院经病理学诊断的153例乳腺癌患者。年龄25～76岁，平均（48.2±7.8）岁。标本用10%中性甲醛固定，常规石蜡切片（4 ?m），脱蜡入水，备用。
1.2 HER-2 IHC检测
1.2.1 试剂 选用福州迈新生物技术有限公司的即用型非生物素免疫组化EnVision检测试剂盒（KIT-9901）。
1.2.2 操作步骤 按照乳腺癌的HER-2免疫组化试剂盒的说明书操作。高压修复；滴加50 ?L 3%过氧化氢，室温孵育10 min，PBS冲洗；滴加一抗，室温孵育60 min，PBS冲洗；滴加1滴聚合物，室温孵育20 min，PBS冲洗；滴加1滴酶标抗鼠/兔聚合物，温育30 min；滴加100 ?L DAB显色液，冲洗；苏木素复染，封片。
1.2.3 结果判读标准（-）完全没有着色或少于10%癌细胞有胞膜着色；（+）：>10%的癌细胞呈现微弱、不完整的胞膜着色；（++）>10%的癌细胞呈现弱至中度完整的胞膜着色；（+++）：>10%的癌细胞呈现强的、完整的胞膜着色。
1.3 HER-2 CISH检测
1.3.1 试剂 美国Zymed公司生产的地高辛标记的HER-2原癌基因原位杂交探针和试剂盒（SPOT-Light HER-2 CISHTM试剂盒）。
1.3.2 操作步骤 按照Zymed SPOT-Light HER-2 CISHTM试剂盒说明书操作。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆切片蒸馏水洗后置加热预处理液内煮沸15 min；胃蛋白酶孵化15 min，脱水，凉干；每片滴加15?L地高辛标记的HER-2探针，杂交膜封片，原位杂交仪内95℃变性5 min；37℃湿盒孵育过夜；次日SSC冲洗液冲洗5 min；浸入浓度为3%双氧水的甲醇溶液，放置10 min；浓度为0.01%的Tween-20 PBS液冲洗3遍；滴加CAS-BLOCK，室温下孵育10 min；滴加鼠抗人的地高辛抗体，温育30 min；DAB显色30 min，冲洗；苏木素复染，脱水，封片。
1.3.3 结果判读标准 在400倍显微镜下观察，超过半数的肿瘤细胞核内存在1～5个信号点为无基因扩增；超过半数的肿瘤细胞核内存在6～10个信号点为低度基因扩增；超过半数的肿瘤细胞核内存在10个以上信号点，或是信号点聚集成团状、簇状则为高度基因扩增[2]。
1.4 统计学处理
采用SPSS18.0软件进行统计处理，采用x2检验法检验差异，当P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 HER-2 IHC检测结果
阳性信号定位在细胞膜之上，为黄色（图1）。153例乳腺癌标本IHC检测HER-2蛋白表达30例（-），32例（+），47例（++），44例（+++）。
2.2 两种检测方式的关系
CISH基因扩增与HER-2 IHC（+++）表达结果符合率较高，为98%，二者差异有统计学意义（均P<0.01）。见表1。
3 讨论
HER-2基因状态不仅是预测乳腺癌患者预后的独立因素，同时还是赫赛汀靶向治疗和辅助化疗的重要参考指标。检测HER-2基因目前在实验室最为常用的方法有IHC、显色原位杂交、荧光原位杂交[3-4]。IHC方法评估HER-2蛋白表达是目前首选的方法，但极易受到包括标本固定液差异、切片制作时温度、抗体特异性以及评判人员主观因素等的影响，结果差异较大。FISH被誉为“金标准”[5]，结果可靠，受影响小，但只能在荧光显微镜下观察，且设备、试剂昂贵、切片不能长期保存，国内病理实验室使用较少。CISH是建立在DNA技术上的一种HER-2基因检测方法，该方法通过普通显微镜能够对基因正常与否和组织学形态的变化一起进行观察，切片能长期保存，具有简单、快速、成本低、信号稳定的特点。大量研究均证实了CISH与FISH的检测结果具有高度的一致性（85%～100%）[6]。
据相关研究显示，基因扩增显色原位杂交与免疫组化检测具有较高的一致性，其符合率最高可达95%以上[7]。而本研究中，两种方法对于IHC（+++）者的检测结果一致性较高，两组结果没有显著差异（P>0.05）。根据本研究结果，乳腺癌HER-2基因CISH检测的敏感性及特异性都较高。
综上所述，CISH检测HER-2基因扩增结果与IHC检测蛋白过表达及FISH结果高度一致，可作为乳腺癌HER-2基因扩增检测的一项安全可靠的技术。
参考文献：
[1]王文义，王桂芝，张明智.荧光原位分子杂交技术检测乳腺癌组织中HER-2基因的表达[J].医药论坛杂志，2011，13（7）：123-126.
[2]安杰，符鼎，郭建昇，等.荧光原位杂交和免疫组化法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究[J].山西医科大学学报，2009，11（5）：211-212.
[3]谢黎黎，李俊，顾康生.乳腺癌HER-2基因基础与临床研究进展[J].安徽医药，2009，10（5）：302-303.
[4]秦璟，马爱玲.显色原位杂交与免疫组织化学检测乳腺癌HER-2基因的比较研究[J].宁夏医学院学报，2008，06（3）：120-121.
[5]柳光宇.曲妥珠单抗用于乳腺癌辅助治疗的基本原则与策略[J].中国癌症杂志，2009，06（3）：211-212.
[6]冬国友，刘志英，高颖红，等.用免疫组化和显色原位杂交方法对乳腺癌组织中HER-2基因的联合检测分析[J].中国误诊学杂志，2008，11（5）：78-79.
[7]赵丽娟.ER、PR、pS2、C-erbB-2、Ki-67在乳腺癌新辅助化疗前后的表达与化疗疗效的相关性研究[D].四川大学，2009：287-288.
论文作者:吴晓棠
论文发表刊物:《健康世界》2015年11期供稿
论文发表时间:2016/2/3
标签：乳腺癌论文; 基因论文; 原位论文; 显色论文; 免疫论文; 方法论文; 较高论文; 《健康世界》2015年11期供稿论文;