（1河北省兴隆县医院 2承德医学院附属医院 3河北省承德市平泉县医院 4河北省承德市中心医院 河北 承德 067000）
【摘要】目的：探讨临床实验室常用的几种检测方法在早期新型隐球菌性脑膜炎诊断中的临床应用价值；方法：以脑脊液墨汁染色阳性和/或脑脊液真菌培养鉴定为新型隐球菌作为确诊新型隐球菌脑膜炎的金标准。对37例新型隐球菌脑膜炎患者1次或多次腰穿脑脊液，同时以单纯墨汁染色、脑脊液培养、胶体金法、墨汁染色联合脑脊液培养方法分别检测脑膜炎新型隐球菌。结果：单纯墨汁染色和单纯脑脊液培养初次腰穿检出率(48.6% vs 56.8%)比较无明显差异（P>0.05）。墨汁染色联合脑脊液培养(81.1%)较上述两种方法单独检测初次腰穿检出率均显著增高（P<0.05），与胶体金法(94.6%)比较无明显差异（P>0.05），但胶体金法初次腰穿检出率看似更高一些。胶体金法在2例非隐球菌性脑膜炎标本中出现假阳性。结论：脑脊液墨汁染色联合脑脊液培养较该两种方法分别单纯检测明显提高新型隐球菌初次腰穿的检出率，该联合检测可做为颅内新型隐球菌感染灵敏、特异的实验室检测方法在临床早期诊断中应用。胶体金法首次腰穿检出率最高，其阳性高度提示了新型隐球菌脑膜炎感染，但应注意假阳性的可能。
【关键词】颅内新型隐球菌感染；检测；应用价值
【中图分类号】R742【文献标识码】A
1、资料和方法
1.1病例来源2010年1月～2015年10月在承德医学院附属医院住院确诊为新型隐球菌脑膜炎的37例患者。所有检测标本为上述患者脑脊液标本。以脑脊液墨汁染色阳性和、或脑脊液真菌培养鉴定为新型隐球菌作为确诊新型隐球菌脑膜炎的金标准。
1.2仪器试剂 梅里埃VITEK 2 compact全自动细菌鉴定仪及YST酵母菌鉴定卡；梅里埃BACT/ALERT 3D全自动血培养仪及配套儿童型微生物培养瓶；IMMY公司CrAg Lateral Flow Assay隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）；珠海贝索公司印度墨汁染色试剂盒；温州康泰沙氏培养基及念珠菌鉴别琼脂。
1.3方法
1.3.1脑脊液常规培养：无菌收集约1～2ml脑脊液，尽快送检。在相对离心力为1000r/min条件下离心10分钟，弃去上清液，轻轻混匀底层，用一次性接种环蘸取离心后的脑脊液在沙氏培养基上常规培养。
1.3.2墨汁负染实验：取离心后的脑脊液1滴于载玻片上，再加入一滴墨汁与标本混匀(标本与墨汁的比例为1:1)，盖上盖玻片，轻压使标本混合液变薄制成湿片，静置片刻后将其置于显微镜下观察，先用低倍镜寻找有荚膜的真菌不着色点，找到后转换到高倍镜下确认。如果在视野中看到有圆形的透明菌体，细胞外有宽厚的胶质样荚膜，其厚度是菌体的1~3倍，折光性很强，有菌芽，为墨汁染色找到隐球菌阳性结果，否则为阴性。
1.3.3隐球菌胶体金免疫层析法：按操作说明书进行：滴一滴标本稀释液于小试管内，再加入40ul脑脊液原液标本于同一只小试管内混匀，插入末端为白色的检测卡于小试管内的混合液，静置10分钟后判读结果。检测结果判定：鉴定卡中仅质控线处有一条紫红色线出现为阴性；质控线和检测线均出现紫红色线为阳性；质控线和检测线均未显示紫红色表明试验失败或鉴定卡失效。
1.3.4 统计学处理 采用SPSS 11.0统计软件，计数资料用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2、结果
临床资料 男性患者25例，女性患者12例，中位年龄34（19～62）岁。29例（78.4%）患者既往有免疫力低下基础疾病或长期应用激素病史，其中AIDS患者11例，该组患者中3例合并梅毒螺旋体特异抗体阳性。淋巴白血病、淋巴瘤患者2例，系统性红斑狼疮患者4例，肺结核患者2例，骨髓移植患者1例，肾移植患者1例，糖尿病患者6例，肿瘤晚期患者2例。无明确免疫力低下基础疾病患者8例，该组患者中，有肺部感染患者7例，颅部外伤史1例。
脑脊液常规实验室检查 脑脊液白细胞、蛋白、葡萄糖、氯化物检查中位数值见表1
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脑脊液病原体检查 该组新型隐球菌脑膜炎患者经初次或多次腰穿脑脊液，单纯墨汁染色、脑脊液培养、胶体金法、墨汁染色+脑脊液培养联合检测阳性检出率见表2。统计结果显示单纯墨汁染色和单纯脑脊液培养比较初次腰穿检出率无明显差异（P>0.05）。墨汁染色联合脑脊液培养较上述两种方法单独检测初次腰穿检出率显著增高（P<0.05），与胶体金法比较无明显差异（P>0.05），但胶体金法初次腰穿检出率看似更高一些。另外统计结果显示单纯墨汁染色、单纯脑脊液培养初次腰穿和多次累计腰穿检出率比较均有显著差异（P<0.05）。工作中，尚有2例临床确诊为结核性脑膜炎患者，脑脊液胶体金法抗原检测阳性而墨汁染色及脑脊液培养均阴性。未检出病原体，提示胶体金法检测新型隐球菌脑膜炎虽然有很好的敏感性，但可能出现假阳性。结果见表2。
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3、讨论
本研究结果显示隐球菌脑膜炎患者初次腰穿，胶体金法较上述2种“金标准”法更为敏感，对于初次腰穿脑脊液胶体金法阳性，而脑脊液涂片、脑脊液真菌培养阴性的中枢神经系统感染患者，应高度警惕隐球菌颅内感染的可能，需多次腰穿查找病原体。我们的另外实验资料显示有2例临床确诊为结核性脑膜炎患者，胶体金法阳性，多次腰穿墨汁染色及脑脊液培养均未检出病原菌。提示胶体金法检测新型隐球菌脑膜炎虽然有很好的敏感性，但也可能出现假阳性。王欣[1]等发现胶体金检测方法脑脊液原液时对结核性脑膜炎的交叉反应高，易被误诊为新型隐球菌性脑膜炎，需结合其它检测方法进行诊断。该2例患者是否只存在结脑或结脑伴发隐球菌脑膜炎的可能，尚须进一步研究。我们认为，隐球菌荚膜多糖抗原的胶体金免疫层析法最大价值是对新型隐球菌脑膜炎的早期诊断提供思路、提供线索、提供依据。
对于阴性脑脊液检查结果，临床又高度怀疑隐球菌颅内感染患者，不能轻易排除该病。特别是目前已有缺乏荚膜的新型隐球菌颅内感染的病例报道[5]，该类患者脑脊液墨汁染色、真菌培养和隐球菌荚膜多糖抗原的胶体金免疫层析法均为阴性，对该病的早期诊断具有更大的挑战性。
参考文献
[1]王欣，张伦理，郭彦,等。新型隐球菌检测方法的比较及临床应用.中国卫生检验杂志, 2013 , 23(5) :1180-1182
论文作者:刘启明1 谢守军2 骆泉3 姜子斌3 赵志国4（通讯作者）
论文发表刊物:《解放军预防医学杂志》2015年第12期供稿
论文发表时间:2016/2/25
标签：脑脊液论文; 球菌论文; 墨汁论文; 脑膜炎论文; 胶体论文; 患者论文; 阳性论文; 《解放军预防医学杂志》2015年第12期供稿论文;