靳远祥[1]2004年在《家蚕雌性附腺功能蛋白质组研究》文中指出同许多昆虫一样,家蚕雌性附腺由分泌部和贮存部组成,分泌部分泌的胶状蛋白贮存于贮存部中。胶状粘液蛋白主要作用是将产出的卵粘附于外界的物质上,以保证昆虫在有大风大雨的自然环境中也能正常继代。从形态学和解剖学上的研究发现,家蚕雌性附腺是逐步发育的,但非常有趣的是雌性附腺在羽化前的2～3天开始突然大量分泌粘液蛋白,并在贮存部中积蓄,导致贮存部迅速的膨大。而家蚕欧洲种的一些品种产下的卵为天然散卵,这些品种的雌体不能正常分泌胶状粘性物质,经研究确认为遗传性状,命名为Ng突变。家蚕雌性附腺是一个特殊器官,合成和分泌特异蛋白质在短时间内完成,对雌性附腺的研究有助于搞清楚细胞、组织或器官发育分化的调节机制。 蛋白质组学是在蛋白的水平大规模研究基因表达的产物,能够直接的研究蛋白质的表达水平和相关蛋白的活性状态。家蚕的雌性附腺无论是在形态上还是在功能上在发育过程上都发生了显着的变化。因此,本研究利用双向电泳和质谱相结合的蛋白质组学的研究方法对不同发育阶段的雌性附腺分泌部表达的蛋白进行比较研究,以进一步研究这个复杂的生物学过程。 1.探讨了家蚕不同组织包括雌性附腺、丝腺、中肠和血液等的总蛋白提取和样品制备方法,优化不同组织来源蛋白的一向等电聚焦电泳(固相胶条)和二向SDS电泳的实验条件。由于组织的特异性,对不同的组织采用不同的蛋白提取方法和电泳条件。研究结果表明,对雌性附腺、中肠和丝腺用不同的裂解缓冲液提取蛋白和用不同的电泳参数进行双向电泳分离,能获得较好的蛋白质提取率、较高的分辨率(>1000蛋白点)、良好的重复性。 2.为了获得理想的家蚕雌性附腺分泌部组织在不同发育阶段的蛋白质表达图谱,对不同发育阶段的正常和Ng突变体的雌性附腺的分泌组织蛋白质样品制备和电泳进行了多次重复实验,确立了实验条件,取得良好的实验结果,建立了蛋白质参考图谱。利用分析软件(Image master)可以检测到800以上个蛋白点,而且不同发育时期的蛋白分布图基本相似,蛋白点主要分部在分子量30kD到70kD和等电点pH4～8的范围内。进一步对凝胶进行对比和软件匹配以及表达量的分析,发现有11个蛋白点的表达量在不同的发育时期表达量差异达到1.5
王永强, 靳远祥, 何秀玲, 徐孟奎, 孟智启[2]2006年在《家蚕蛋白质组研究现状与趋势》文中进行了进一步梳理蛋白质组研究是在蛋白质水平定量、动态、整体研究生物体,由此可获得疾病过程、细胞生理生化过程以及调控网络的相关信息。家蚕是鳞翅目昆虫的模式生物,随着蛋白质组学、生物信息学的迅速发展和家蚕全基因组序列的测定完成,家蚕蛋白质组研究方面也逐步展开,已在家蚕丝腺、雌性附腺、胚胎、血液及中肠蛋白质组的研究方面取得进展。利用差异蛋白质组学技术发现家蚕重要经济性状相关的功能蛋白,并探明其作用机制及调控模式,则是今后的主要研究方向。
靳远祥, 徐孟奎, 陈玉银, 姜永煌[3]2004年在《家蚕雌性附腺及其Ng突变体蛋白质组双向电泳图谱分析》文中研究表明分别对家蚕 (Bombyxmori.L)正常及Ng突变体雌蛾性附腺分泌部组织的蛋白质进行提取 ,并采用双向凝胶电泳和计算机辅助分析方法 ,对提取的蛋白质混合物进行分离和比较分析。用银染的方法 ,平均每张电泳图谱可以分离约 70 0个蛋白质点 ,其中大部分的蛋白质点分布在pH 4～ 8范围内 ,在分子量上主要集中在 30～ 70kD区域。比较分析发现 ,有 4种蛋白只在正常性附腺组织中特异表达 ,而有 2种蛋白只在Ng突变体的组织中特异表达。另外约有 2 9种蛋白在正常性附腺分泌部组织中的表达水平明显高于Ng突变 ,而约有 1 5种蛋白在Ng突变体的分泌部组织中表达水平较高。这些差异蛋白质可能与Ng突变的形成和导致这种突变体的性附腺不能正常分泌粘性蛋白的性状有关
靳远祥, 徐孟奎, 陈玉银, 姜永煌[4]2004年在《家蚕雌性附腺及其Ng突变体的蛋白质组差异研究(英文)》文中研究说明家蚕雌蛾性附腺在化蛾前 2到 3天开始大量分泌胶状粘性蛋白 ,其贮存部迅速地膨大 ,而其Ng突变体的雌蛾性附腺不能正常分泌胶状粘性物质 .分别对家蚕 (Bombyxmori)的正常及Ng突变体雌蛾性附腺分泌部组织的蛋白质进行提取 ,并采用双向凝胶电泳和计算机辅助分析方法 ,对提取的蛋白质混合物进行分离和比较分析 ,并对主要差异表达的蛋白质用质谱鉴定 .实验结果表明 ,用银染法 ,平均每张电泳图谱可以分离约 70 0个蛋白质点 ,其中大部分的蛋白质点分布在pH 4～ 8范围内 ,其分子质量主要集中在 30～ 70ku区域 .比较分析发现一些差异表达蛋白 ,其中No2 ,3蛋白质点经质谱鉴定为肌动蛋白A3,该蛋白质只在化蛹后期正常雌性附腺组织中特异表达 ,而Ng突变体中肌动蛋白A3的缺失 ,暗示了肌动蛋白A3可能与家蚕雌性附腺的胶状粘性物质的胞外分泌有关 .
靳远祥, 徐孟奎, 陈玉银, 姜永煌, 杜鑫[5]2005年在《家蚕雌性附腺及其分泌物的蛋白质双向电泳分析》文中研究说明家蚕雌性附腺由分泌部和贮存部组成,化蛾前期分泌大量胶状粘液蛋白,产卵时胶状粘液蛋白将蚕卵固定在外界物质上。对雌性附腺分泌部及胶状粘液的蛋白质进行提取,并用双向电泳进行分离和分析,结果表明用裂解缓冲液可以得到丰度较高的蛋白质混合物,利用双向电泳技术可以获得高分辨率、高重复性的蛋白质图谱。
参考文献：
[1]. 家蚕雌性附腺功能蛋白质组研究[D]. 靳远祥. 浙江大学. 2004
[2]. 家蚕蛋白质组研究现状与趋势[J]. 王永强, 靳远祥, 何秀玲, 徐孟奎, 孟智启. 蚕业科学. 2006
[3]. 家蚕雌性附腺及其Ng突变体蛋白质组双向电泳图谱分析[J]. 靳远祥, 徐孟奎, 陈玉银, 姜永煌. 生物工程学报. 2004
[4]. 家蚕雌性附腺及其Ng突变体的蛋白质组差异研究(英文)[J]. 靳远祥, 徐孟奎, 陈玉银, 姜永煌. 生物化学与生物物理进展. 2004
[5]. 家蚕雌性附腺及其分泌物的蛋白质双向电泳分析[J]. 靳远祥, 徐孟奎, 陈玉银, 姜永煌, 杜鑫. 蚕业科学. 2005
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