陆卫平, 王笑云, 赵秀芬[1]2008年在《高磷诱导及膦甲酸钠干预血管平滑肌细胞钙化的研究》文中研究指明目的观察不同浓度磷对体外培养的牛主动脉平滑肌细胞钙沉积及骨钙素表达的影响,同时观察膦甲酸钠对高磷诱导该细胞钙化的干预作用。方法体外培养牛主动脉平滑肌细胞,观察不同磷浓度(Pi 1.5、2.0 mmol.L-1)、不同培养时间(3、6、9 d)血管平滑肌细胞的钙沉积,以及不同磷浓度(Pi 1.5、2.0、2.5 mmol.L-1)培养血管平滑肌细胞72 h骨钙素的表达。同时观察不同浓度膦甲酸钠对高磷(Pi 2.0 mmol.L-1)诱导的钙沉积和骨钙素增加的抑制作用。用甲O-酚酞络合酮方法测定钙含量;放射免疫法测定培养上清液中骨钙素的浓度;BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量与骨钙素浓度;RT-PCR测定骨钙素mRNA的表达。结果在相当于正常血磷浓度(1.5 mmol.L-1)的培养基中,平滑肌细胞钙沉积量小;而在相当于高磷血症(2.0 mmo.lL-1)的培养基中,钙沉积明显增加[培养6 d,(77.187±11.692)vs(25.768±1.750)μg.(mg蛋白)-1,P<0.01],并呈时间和剂量依赖性。与Pi 1.5 mmo.lL-1组相比,Pi 2.0 mmol.L-1组培养上清液中骨钙素的水平明显增高[(1.503×10-2±2.601×10-3)vs(2.981×10-3±8.382×10-4)ng.(μg蛋白)-1,P<0.001];Pi 2.0 mmol.L-1组平滑肌细胞骨钙素mRNA的表达也明显增加(OC/GAPDH,1.906±0.132vs0.748±0.036 6,P<0.001)。膦甲酸钠能有效地抑制钙沉积[培养6 d,Pi 2.0 mmol.L-1+PFA 1.0 mmol.L-1组vsPi 2.0 mmol.L-1组,(37.729±5.899)vs(77.187±11.692)μg.(mg蛋白)-1,P<0.001]和上清液中骨钙素的表达[(4.529×10-3±1.250×10-3)vs(1.503×10-2±2.601×10-3)ng.(μg蛋白)-1,P<0.001]及平滑肌细胞骨钙素mRNA的表达(OC/GAPDH,0.642±0.092vs1.885±0.165,P<0.01)。结论高磷能直接促进血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素表达的增加,说明高磷血症可能是促进血管钙化的独立危险因素;膦甲酸钠能有效地抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素表达的增加,可以作为一种新的防治高磷诱导血管钙化的药物。
陆卫平[2]2002年在《高磷诱导及膦甲酸钠干预血管平滑肌细胞钙化的研究》文中认为慢性肾衰竭(CRF)是临床的常见病和多发病。在长期透析治疗的终末期肾病(ESRD)病人中，心血管疾病是引起死亡的首要原因，约占50％。流行病学资料证实，尿毒症患者中普遍存在高磷血症，CRF病人心血管病变发生率及死亡率的增高与高磷血症和钙磷乘积的升高密切相关。高磷血症以及随后发生的钙磷乘积升高促进血管钙化(vascular calcification,VC)。血管钙化加重动脉粥样硬化斑块病变，使心肌梗死、周围血管缺血性病变的发生率增加，冠状动脉钙化与心源性猝死相关或者是心源性猝死的先兆。 研究高磷血症致血管钙化的机制，并采取积极的治疗措施，对于降低CRF病人心血管病变的发生率和死亡率具有重要的临床意义，故设计并开展了本研究课题。 目的：观察不同浓度磷对体外培养的牛主动脉平滑肌细胞钙沉积及骨钙素(osteocalcin,OC)表达的影响，初步探讨高磷血症促进血管钙化的可能机制；同时观察膦甲酸钠(phosphonoformic acid，PFA)对高磷诱导该细胞钙化的干预作用，从而为防治CRF病人血管钙化提供新的理论观点。 方法：体外培养牛主动脉平滑肌细胞，观察不同磷浓度(Pi 1.5mmol／L、2.0mmol／L)、不同培养时间(3天、6天、9天)血管平滑肌细胞的钙沉积；以及不同磷浓度(Pi 1.5mmol／L、2.0mmol／L、2.5mmol／L)培养血管平滑肌细胞72小时骨钙素的表达。同时观察不同浓度膦甲酸钠对高磷(Pi 2.0mmol／L)诱导的钙沉积和骨钙素增加的抑制作用。用甲o-酚酞络合酮方法测定钙含量；放射免疫法测定培养上清液中骨钙素的浓度；BCA法测定蛋白含量，用蛋白含量标化钙含量与骨钙素浓度；RT-PCR观察骨钙素mRNA的表达。 南京医科大学硕士学位论文 结果1：林B当于正常血磷门．5。W）的培服中，平滑肌细胞 钙沉积量小；而郁目当于高磷血症门刀 rnmljL）的培养基中，钙 沉积显着增加（培养 6 H，Pi 2．0。l／L组w Pi．5。l／L组，77．187 i 11．692Pg吨蛋白 VS 25＊68＊50PgirnZ 蛋白，P＜0．of），呈时间 和剂量M性。von KOssa染色，Pi 2刀 mini／L组平滑肌细月肌大量 的黑色颗粒沉积，而刊1．5——巩组中很少。同样，与n1．5——w 纽相比，Pi 2刀 mrnol／L组培养上清液中骨钙素的水平明显增高门．503 X 10－’i 2．601X 10刁呛pg蛋白。，S 2．9815 10刁 i 8．382 X 104 n叭；蛋白，P＜0．001X Pi 2＊ mmol／L组平滑月几细胞骨钙素 mtvA 白表达也显着增力。（OC／GAPDH：1．906．132 VS 0．748＊366， p＜0．0川＊ 结果2：我们也观察了胰甲酸钠对高酿导的钙沉积和骨钙素表这 的干预作用。瞬甲嘲h能有勿收拓呻I钙沉积［培养6天，Pi 2．ePFA．0 （mmol／L）组 vs Pi 2＊ rnmo讥组，37．729。5．899u鹏蛋白 vs 77．187 土门＊92卜旮p蛋白，p＜0＊of］和骨钙素的表达Pi 2．e PFA．0 删OW组VS刊2．0。O几纽，上清液中，4．529 X m刁。1．250 X m上 n旮pg蛋白vs．503 x 10’12＊of x 10一略＊蛋白，p＜0＊of；mRNA， OC／GAPDH，0．642 i 0．092 VS．886．165，p＜0＊ 1］。 结论：高磷能脓…管平滑肌细B站5沉积和骨钙素表达的增加， 说明高磷血症可能是促狐管钙化的独立危险因素；膀甲酸钠能有 效地抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素表达的增加， 可以作为一种新的防治高贼导血管钙化的药物。
陆卫平, 王笑云, 赵秀芬[3]2003年在《膦甲酸钠干预高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的研究》文中研究表明目的 观察不同浓度的膦甲酸钠 (PFA)对高磷诱导的牛主动脉血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素 (OC)表达的影响。方法 用不同磷浓度 (正常磷Pi1.5mmol·L-1、高磷Pi2 0mmol·L-1)及含不同浓度膦甲酸钠的培养液 ,体外培养牛主动脉平滑肌细胞 ,观察血管平滑肌细胞钙沉积及骨钙素表达。用甲ο 酚酞络合酮方法测定钙含量 ,BCA法测定蛋白含量。培养上清液中骨钙素浓度用放射免疫法测定 ,用蛋白含量标化钙含量、骨钙素的浓度 ,RT PCR观察骨钙素mR NA的表达。结果 ①高磷组较正常磷组平滑肌细胞钙沉积增加 :细胞培养 6d后 ,高磷组 (77 187± 11 6 92 )mg·g-1Pro ,正常磷组 (2 5 76 8± 1 75 0 )mg·g-1Pro ,P <0 0 1;②膦甲酸钠能有效地抑制钙沉积 :培养 6d ,高磷 +PFA 1 0mmol·L-1组 (37 72 9± 5 899)mg·g-1Pro ,与高磷未干预组相比 ,P <0 0 1;③高磷组骨钙素表达明显增高。高磷组与正常磷组相比 ,培养上清液中骨钙素水平 :(1 5 0 3× 10 -2 ±2 6 0 1× 10 -3 )mg·g-1Pro对 (2 981× 10 -3 ± 8 382× 10 -4)mg·g-1Pro ,P <0 0 1;平滑肌细胞骨钙素mRNA表达 (OC/GAPDH) :1 886± 0 16 5对 0 75 2± 0 0 5 2 1,P <0 0 1;④膦甲酸钠能有效地抑制骨钙素的表达。高磷 +PFA 1 0mmol·L-1组与高磷组?
参考文献：
[1]. 高磷诱导及膦甲酸钠干预血管平滑肌细胞钙化的研究[J]. 陆卫平, 王笑云, 赵秀芬. 现代医学. 2008
[2]. 高磷诱导及膦甲酸钠干预血管平滑肌细胞钙化的研究[D]. 陆卫平. 南京医科大学. 2002
[3]. 膦甲酸钠干预高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的研究[J]. 陆卫平, 王笑云, 赵秀芬. 中国药理学通报. 2003