新疆石河子市人民医院 新疆 石河子 832000
作者简介：李雪梅（1969—），女，大学本科，研究方向：新型靶向制剂的研发和利用
通信作者：来海中（1970—），男，博士研究生，研究方向：新型靶向制剂的研发和利用
摘要目的：制定齐墩果酸脂质体体内检测方法，研究其药动学过程。方法：①建立HPLC法测定齐墩果酸脂质体体内药物含量的方法。②通过对SD大鼠尾静脉给药，初步研究齐墩果酸的药动学过程。结果：在优化的色谱条件，在10～200.0μg/ml浓度范围内,齐墩果酸线性关系良好。大鼠尾静脉注射齐墩果酸脂质体其药动学行为符合二室开放模型，药动学参数为：分布半衰期(T1/2α）为11.300min; 消除半衰期(T1/2β）为134.170min；AUC为104552.060ug·min·mL-1。结论：该实验研究齐墩果酸脂质体动力学过程，为开发齐墩果酸脂质体提供参考。为进一步研究其在肝炎治疗中的应用提供了基础。
关键词：齐墩果酸脂质体；HPLC；药动学
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0429-02
pharmacokinetic process Study on
oleanolic acid liposome
Abstract
Objective: To develop detecting methods and study on pharmacokinetic process of
oleanolic acid liposome. Methods: ①Establishing the method of HPLC to examine the drug content that comprise oleanolic acid liposome in exterior and interior.② To study oleanolic acid liposome pharmacokinetic process by giving oleanolic acid liposome to SD rats. Results: There was an excellent linear correlation Within the range of 10～200.0μg/ml, The pharmacokinetic result revealed that it was a double-departmentmodel. Tail vein injection of SD rats pharmacokinetic parameter : t1/2(α) was 11.300min; t1/2(β) was 134.170min;AUC was 104552.060ug·min·mL-1. Conclusion: This study focused on kinetic properties of oleanolic acid liposome, which will provide theoratical support for clinical re-searches, it is feasible to employ liposome as the drug carrier of oleanolic acid. It will provid the basis for the further study the application of the treatment for hepatitis.
Keywords: oleanolic acid liposome;HPLC;Pharmacokinetic
齐墩果酸是五环三萜类化合物，以游离或结合成苷的形式广泛分布于青叶胆、女贞子等药用植物中[1]。齐墩果酸具有消炎、增强免疫、抑制血小板聚集、降血脂等作用，目前临床上主要用来治疗急性黄疸型肝炎和慢性肝炎，具有毒副作用低等优点[2－4] 目前，市售齐墩果酸制剂剂型主要是片剂，不易溶解于水，溶出速度慢，吸收不好，生物利用度低[5]。为改善其生物利用度，本课题组前期成功将其制成脂质体制剂[6]。本课题拟研究其体内过程及生物利用度，为今后药物开发提供基础数据和质量控制标准。
材料与方法
1．实验材料
1.1 试验动物
S.D大鼠（SPF级；新疆医科大学实验动物中心提供；动物合格证：XK（新）2006-0068；体重300～350g；雄性）。
1.2 试验药品与试剂
齐墩果酸脂质体：本课题组自制
齐墩果酸对照品：中国药品生物制品检定所（0709-200403）（规格：HPLC≥98%）
甲醇：美国天地公司（色谱纯）
乙腈：美国天地公司（色谱纯）
1.3 实验仪器
HP-1100高效液相色谱仪，HP-1100工作站，EclipseXDB-C18色谱柱（美国惠普公司）；UV监测器。
LG10-24A离心机（北京医用离心机厂）；WH-801涡旋混合器（上海环球物化仪器厂）
2．方法与内容
2.1 齐墩果酸脂质体测定方法的建立
2.1.1 色谱条件
色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18 （4.6×150mm，5μm）；流动相：乙腈︰水＝90︰10；流速：0.8ml/min；紫外检测波长：215nm；柱温：40℃；进样20μl。
2.1.2 血浆样品预处理
精密量取血浆样品0.15ml，置离心管中，加甲醇1.0ml，涡旋5min，离心10min（3000r/min），移取上清液置离心管中，于40℃水浴挥干，残余物中精密加入甲醇0.1ml，离心10min（5000r/min），进样20μl。
2.1.3 方法专属性考察
以空白血浆、对照品和样品血浆按“2.1.2”项下操作，同时进行HPLC分析，观察其色谱行为。见图1
以齐墩果酸对照品和样品血浆同时进行HPLC分析，结果保留时间都相同，证明在血浆中测得的是齐墩果酸原形药物，且空白血浆无干扰。理论塔板数按齐墩果酸峰计算应不低于3000。
2.1.4 齐墩果酸血浆标准曲线的绘制
精密量取空白血浆0.15ml，加入齐墩果酸系列标准溶液，使浓度分别为：10、25、50、75、100、150、200μg/ml。按“2.1.2”项下操作测定，以进样量对峰面积回归，得标准曲线为：
Y=-12.8015+15.3501X （r=0.9996）
进样量在10μg/ml～200.0μg/ml范围内，呈良好的线性关系。
方法的最低最低定量限为20ng。
2.1.5 回收率实验
取齐墩果酸标准溶液按2.1.4项配制低、中、高3种浓度（15、75、100μg/ml）的血浆样品，每一浓度5个样品,按“2.1.2”项下，10 μl进样测定，另取相同进样量的齐墩果酸标准溶液直接进行测定，按峰面积计算，得绝对回收率。3个质量浓度的方法回收率分别为85.1％、80.01％、90.91％，方法回收率大于80％且误差较低，说明本实验选用的方法较合理。
2.1.6 精密度试验
取齐墩果酸标准溶液按2.1.4项配制低、中、高3种浓度（15、75、100μg/ml）的血浆样品，按“2.1.2”项下操作，连续测定3 d，并做随行标准曲线，计算日内 (n=5)相对标准差（RSD）分别为1.9％、2.4％、2.6％，日间(n=15)相对标准差（RSD）分别为3.5％、4.1％、3.7％，由数据可以看出日内和日间精密度误差较低，说明齐墩果酸对本实验中选用的处理方法较稳定。
2.2 齐墩果酸脂质体大鼠给药的药物动力学与生物利用度研究
2.2.1 齐墩果酸脂质体尾静脉注射给药
健康SD大鼠5只，实验前禁食12 h，自由饮水，分别取0.3ml空白血浆后，以100mg/kg的剂量尾静脉给药，于给药后0.03、0.25、0.5、1、2、4小时尾静脉取血0.3ml，离心（3000r/min）10min后各取血浆0.15ml，-20℃保存待测。按“2.1.2”项下操作，测定齐墩果酸含量。
2.2.2 数据处理方法
将各血药浓度－时间数据用中国药学会数学药理专业委员会编写的3P87实用药代动力学程序进行拟和，求得主要药物动力学参数。
3结果和讨论
3.1 大鼠尾静脉注射齐墩果酸脂质体后的血药浓度及药动血参数 结果见表1、2。
3.2 讨论
本研究首次以齐墩果酸脂质体为对象,探讨其在大鼠体内的代谢过程。研究表明该方法线性关系良好,方法回收率、日内精密度、日间精密度均较高。
大鼠尾静脉注射100mg/kg齐墩果酸脂质体，其药动学行为符合二室开放模型，分布相生物半衰期t1/2（α）为11.300min，提示齐墩果酸脂质体自中央室向周边室分布迅速；消除相生物半衰期t1/2（β）为134.170min，提示齐墩果酸脂质体在体内消除较慢。中央室分布容积Vc为0.065L/kg，而大鼠平均血容量为0.074L/kg，由此可知药物主要分布于中央室，而在周边室分布很少。
参考文献
[1]罗云敬, 刘海涛, 李天剑, 等. 头孢菌素类抗生素脂质体的包封率测定与渗漏研究[J]. 中国生化药物杂志, 1999, 20(1):4-6
[2]杨焕, 刘世喜, 梁传余, 等. 阳离子脂质体介导IL22基因治疗SCCⅧ移植瘤的初步研究[J]. 四川大学学报 (医学版), 2003, 34(1):9-11
[3]吕万良, 齐宪荣, 孙华东, 等. 阿霉素隐性脂质体的研制及其在小鼠体内的组织分布[J]. 中国药学杂志, 1999, 34 (5):31-34
[4]Yanagie H, TomitaT, Kobayashi H, et al. Inhibition of human pancreatic cancer grow thin nudemice by boron neutron capturetherapy[J]. Br J Cancer, 1997, 75(5): 6601
[5]翟光喜, 王唯红, 赵焰, 等. 低分子肝素柔性纳米脂质体的研究[J]. 山东大学学报(医学版), 2002, 40(3)240-242
[6]来海中，马龙 齐墩果酸脂质体的制备研究[J] 新疆医科大学学报,2007,30(6):581-583
论文作者:李雪梅,来海中,刘盼盼
论文发表刊物:《中国医院药学杂志》2016年9月
论文发表时间:2016/11/4
标签：果酸论文; 血浆论文; 脂质体论文; 方法论文; 色谱论文; 浓度论文; 大鼠论文; 《中国医院药学杂志》2016年9月论文;