（黑龙江省宝泉岭管理局中心医院 黑龙江鹤岗 154211）
【摘要】目的：探讨蛋白C测定方法及临床诊断价值。方法：血浆PC测定可分为PC抗原（PC：Ag）测定法和PC活性（PC：A）测定法。结果：PC抗原（PC：Ag）测定法是用免疫化学法测定PC：Ag含量，PC活性（PC：A）测定法是用血液凝固法或生色底物水解释放显色基团的反应测定PC的生物学活性。结论：为临床诊断C水平低下或功能缺陷有关疾病提供了重要的实验室依据。
【关键词】蛋白C；测定方法；临床意义
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）36-0099-02
PC是维生素D依赖性蛋白酶原，分子量为62kD，由两条多肽链能过双硫键连接而成，与凝血因子Ⅸ、Ⅹ及凝血酶原等有很高的同源性。是人体抗凝血机制的重要组成部分，同时活化的蛋白C（APC）也可对炎症组织发挥多种抗炎作用[1]。
1.标本与方法
1.1 标本
取枸椽酸钠抗凝血，立即分离血浆，－20℃保存备用。
1.2 测定方法
1.2.1PC：Ag测定 免疫火箭电泳法测定PC：Ag。
1.2.1.1试剂 抗人PC抗体。PC缓冲液：每升溶液中含巴比妥钠1.62g，Tris 5.65g，甘氨酸7.05g，EDTA－Na2 1.80g，PEG（MW6000）10g，pH调至8.8。生理盐水。标准血浆。考马斯亮蓝染色液：取考马斯亮蓝R-250 2.5g，冰醋酸100ml，乙醇450ml，蒸馏水450ml，溶解后混合。考马斯亮蓝脱色液：取乙醇1000ml，冰醋酸250ml，蒸馏水1000ml，混匀。
1.2.1.2操作 用PC缓冲液配制10g/L琼脂糖溶液，制板方法与一般免疫火箭法相同。将标准血浆稀释为原倍（100％）、1:2（50％）、1:4（25％）、1:8（12.5％）、1:16（6.25％）5个稀释度。待检血浆作1:2稀释。电泳：电泳槽内，每侧放PC缓冲液1L左右，两侧等量。琼脂凝胶板于槽中间，在琼脂凝胶上搭三层滤纸作电桥，电桥间距5.3cm，先于50V低电压下加样，每孔15μl，每板必须同时作标准曲线，待加样完后，提高电压至110V。在室温不高于30℃条件下电泳18h。电泳完毕后关闭电源，取出琼脂糖凝胶板，置于生理盐水中漂洗杂蛋白9约12～24h），以出后用蒸馏水稍冲一下，除去盐类。用多层滤纸干，以吸去大部分水，再用电吹风吹干置温箱中60～70℃烘干，用考马斯亮蓝染液染3～5min，再用脱色液脱至底色白，峰形清晰为止。测火箭峰高度，用两分规测定火箭峰高度，以加孔上缘至峰顶为准，将5个标准的各自读数，通过回归得到标准曲线。然后求出各待检样本的PC:Ag含量。
1.2.1.3参考值 102.5±20.1％。
1.2.2发色底物法测定PC：A。
1.2.2.1试剂 缓冲液A：0.04mol/L巴比妥缓冲液，pH7.4。Protac激活液，每瓶3U＜加缓冲液A3ml，分装，置－20℃保存。使用时稀释成150U/L。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆发色底物液：用重蒸馏水将Chro-mozym-PCA配成1.6mmol/L。正常混合血浆用缓冲液A稀释成为原液，80％、60％、40％、20％、10％。待检样品用生理盐水作1:2稀释。终止液为冰醋酸溶液。酶标仪及酶标板。
1.2.2.2操作 将待检已稀释样品25μl加入酶标板孔中，同时也将6个不同稀释度下混合血浆各25μl分别加入各孔内。在上述待检样品及标准管各孔加入激活液100μl，置37℃水浴温育8min。再各加发色底物100μl，混匀，置37℃水浴中继续温育10min，使其充分显色，然后各加50μl冰醋酸终止反应[2]。以缓冲液A为空白管，酶标仪405nm读出各孔的A值。以正常人混合血浆的各稀释孔A值为纵坐标，相应PC：A含量为横坐标作出标准曲线。待测样品查标准曲线，结果乘以2。
1.2.2.3参考值 100.24±13.18％。
2.方法分析
PC：Ag测定法以火箭电泳法（EID）最为简单实用，但敏感度低。酶联免疫吸附法（ELISA）敏感，特异性强，常作为PC：Ag测定的实验室参比方法。放射免疫法（RIA）和免疫放射测定法（IRMA）亦常用于PC：Ag测定，但RIA法需先纯化PC，故操作繁杂，且重复性差。IRMA和RIA相似，敏感度高，但不需纯化蛋白C。
PC：A测定常用的方法有活化部分凝血活酶时间（APTT）和酰胺酶活性法（生色底物法）。APTT法、生色底物法及光度APTT法彼此间有较好的相关性。APTT法和光度APTT法包含了PC活化及抗凝血的全部生理反应，而生色底物法则无此特点，尤其在口服抗凝药时，不能真正地反映PC：A，故不同的标本应采用不同的方法。
在正常及大多数病理情况下，PC：Ag和PC：A水平呈平行升降，且两类测定方法间有较好相关性，EID与生色底物法，ELISA与APTT的相关系数r均＞0.900。因此，常规的PC：Ag和PC：A测定分别以EID和APTT法较为实用，对各种原因引起的Ⅱ型PC缺乏症，应同时测定PC：Ag和PC：A，并要以PC：A测定为主。
3.临床意义
3.1 遗传性PC缺乏症
本症为常染色体显性遗传，患者常有明显的阳性家族史，根据血浆PC的变化可分为纯合子和杂合子两型，前者PC：Ag和PC：A缺如，主要临床表现为新生儿期有广泛的暴发性紫癜，用PC制剂可缓解病情，但存活率极低；后者PC：Ag基本正常，而PC：A中度降低，多数为正常的20％～50％，约半数患者无临床症状，少数可出现脑栓塞和肠系膜静脉血栓形成，成年患者易形成静脉血栓栓塞症。
3.2 弥散性血管内凝血（DIC）
DIC患者由于体内一系列凝血因子的消耗，血小板减少及继发纤溶的形成，使大量PC被凝血酶活化，导致血浆PC含量显著降低。
3.3 血液病
急性白血症患者PC含量降低或明显降低，红白血病、淋巴瘤、微血管病性深血性贫血和ITP患者PC含量也降低[3]。早期抗凝的治疗宜与小剂量肝素合用。另外，输血治疗，由于血管内轻度溶血或异型抗体的免疫反应，PC亦呈消耗性降低。
3.4 肝脏疾患
慢性肝炎、肝硬化患者，血浆PC含量降低，其降低程度与疾病的严重程度成正比。肝病患者血浆PC含量降低，主要与肝脏受损，合成PC的功能障碍有关。因此，PC测定可作为肝功能受损的又一实验室指标。
3.5 肾脏疾患
肾脏病患者PC含量和PC活性变化较大。据报道，肾病综合征和狼疮性肾炎PC：A明显升高，而慢性肾炎普通型PC含量明显降低，肾功能不全和尿毒症时PC：Ag及PC：A显著降低，其降低程度与血肌酐增高呈良好的相关性。肾病时PC活性降低可能是尿毒症中毒的结果，并可促使在肾病和尿毒症时血栓栓塞并发症的发生。
【参考文献】
[1]门剑龙，陈宏，刘瑞玲，等.血浆蛋白C活性测定对支气管哮喘患者病情和预后的评估[J].中华检验医学杂志，2014，37(5):352-356.
[2]冯肖.血清C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α水平检测在急性脑梗死患者病情及预后评估中的应用价值[J].实用临床医药杂志，2016，20(1):32-34.
[3]童绍珍，胡永丽，郝树梅，等.血清hs-CRP检测对冠心病PCI手术患者病情及预后评估的价值[J].国际检验医学杂志，2015(4):461-463.
论文作者:刘蕾
论文发表刊物:《心理医生》2016年36期
论文发表时间:2017/3/7
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