（西藏职业技术学院动物科学技术学院，西藏 拉萨 850030）
基金项目：西藏自治区自然科学基金项目（2016ZR-ZX-01）
摘要：酥油为藏族食品之精华，类似黄油的一种乳制品，是从牛、羊奶中提炼出的脂肪。但是，酥油从原料收集、生产、产品贮存及流通过程中都有可能被病原微生物污染。目前，国内外对动物性食品病原微生物的分离鉴定、及致病菌污染造成的食品安全问题报道较多，对牛奶、及乳制品相关的检测报道也较多，但未见酥油中β-内酰胺酶检测及分子分型方面的报道。鉴于此，本文就酥油中病原微生物的概况、酥油中β-内酰胺酶检测、分子分型等方面进行了研究，旨在为临床提供参考依据。
关键词：酥油；病原微生物；β-内酰胺酶；分子分型
酥油是藏族人民不可缺少的精华食品，其味道香甜，含多种维生素，能补充人体正常代谢之需要，营养丰富[1]。因西藏牦牛饲养大多管理粗放，疫病预防不重视，泌乳期不注意乳房保健，病原微生物极易滋生，严重困扰着乳业的健康发展。酥油绝大多数采用传统的生产工艺，以家庭小作坊和小工厂生产模式为主，在制作过程中绝大多数不经过消毒灭菌处理，难免被有害微生物污染。以青霉素类和头孢菌素类为代表的β-内酰胺类抗生素被广泛应用于预防、治疗细菌性感染疾病，导致牛奶中高浓度的β-内酰胺类抗生素蓄积。随着牛奶解抗剂β-内酰胺酶（β-lactamase）的出现，掩盖了抗生素超标的实情，对食品安全构成了威胁。
1 酥油中病原微生物的概况
酥油、牛奶及奶制品中残留的β-内酰胺酶对人体健康及奶业健康发展存在较大危害，长期食用含β-内酰胺酶处理过的奶制品可产生一定的耐药性、致使人类对传染病的抵抗能力降低，给消费者的健康造成了严重威胁。据报道，β-内酰胺酶现已有200多种，其中头孢菌素酶、青霉素酶和超广谱β-内酰胺酶被广泛应用[2]。
当前，李婕妤[3]等报道的《6种市售西藏酥油理化指标及物理特性分析》，孙美青等[4]报道的《牦牛酥油理化性质研究》，全面阐述了酥油的理化性质。另外，据达娃卓玛[5]报道的
《西藏不同地区酥油微生物指标进行比较分析》，对酥油生产过程中微生物污染途径进行了调研。潘虎等[6]也报道了《西藏酥油中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因检测及脉冲场凝胶电泳分型研究》。至今，未见酥油病原微生物β-内酰胺酶检测及分型技术的报道。
2 酥油中病原微生物β-内酰胺酶检测
用头孢硝噻吩纸片检测微生物菌株是否产生β-内酰胺酶。按照临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的初筛和表型确证试验检测β-内酰胺酶[7]。
3 用新型β-内酰胺酶试剂盒（Cica-Beta Test）进行初步分型检测
按照Cica-Beta Test试剂盒的说明，对酥油中分离的病原微生物进行β -内酰胺酶分型，其步骤如下：对头孢硝噻吩纸片检测阳性的菌株使用试剂1，如试剂1阴性，结果判断为产青霉素酶或窄谱头孢菌素酶；如阳性(显示红色)则继续使用试剂2进行检测。如试剂2阴性，结果判断为产金属酶；如阳性则继续使用试剂3检测。如试剂3阴性，结果判断为产ESBLs；如阳性则继续使用试剂4。最后，如果试剂4检测结果为阴性，判断为产AmpC酶；如果阳性，则判断为产D类酶或复数ESBLs。
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4 用PCR扩增技术对β -内酰胺酶基因进行分子分型研究
提取病原微生物基因组DNA，以此为模板，参照刘保光等[8]方法设计10对β-内酰胺酶引物（TEM、SHV、CTX-M、OXA、ACC、CIT、DHA、EBC、FOX、MOX），PCR扩增，后通过电泳、凝胶成像检测β-内酰胺酶。如确含有，将PCR产物连接转化后，经生物公司测序，在NCBI数据库中用BLAST工具进行序列比对，确定β-内酰胺酶分型。
5 小结
酥油自身具有滋润肠胃，和脾温中，营养价值高等众多优点。但是，牦牛牛奶作为酥油的原材料，而携带病原微生物的牦牛极易将微生物传播到牛奶中去。为此，通过对西藏地酥油中病原微生物的分离、β-内酰胺酶检测和分型技术研究，旨在从源头把关，保障人类健康，确保食品及公共安全，防治病原微生物的污染显得很有必要。
同时，加大对β-内酰胺酶的检测力度，使牛奶生产相关人员能清醒意识到添加β-内酰胺酶的违法性和危害性；加快制定β-内酰胺酶的管理办法和管理条例，为β-内酰胺酶的监管营造法律屏障；动员消费群体和社会群众加强β-内酰胺酶的监管，以确保监管到位有效。当前，探索并突破一种快速、科学、灵敏度高的β-内酰胺酶检测方法，这显得很有必要。此外，应提升β-内酰胺酶检测为辅的意识，以拒绝β-内酰胺酶添加。
为此，开展对西藏不同地区酥油病原微生物的分离、β-内酰胺酶检测和分型技术显得很有必要，这为西藏地区酥油的生产工艺进行规范，减少病原微生物污染的几率，确保藏区食品安全具有重要意义。该研究对β-内酰胺酶进行检测，可以确保规范用药，科学饲养，防止病原微生物随着酥油进入人体，导致食物中毒，同时可以避免病原微生物的传播扩散，确保人类健康。
参考文献
[1]朱喜艳. 青海牧区传统乳制品营养成分浅析[J]. 青海畜牧兽医杂志, 2010, 4: 60.
[2]Rupp M E, Fey P D. Extended-spectrum beta-lactamases(ESBL)-producing Enterobacteriaceae: considerations for fordiagnosis, prevention, and drug treatment[J]. Drugs, 2003, 63: 353–365.
[3]李婕妤, 马传国, 王英丹, 等. 6种市售西藏酥油理化指标及物理特性分析[J]. 河南工业大学学报(自然科学版), 2018, 39(3): 38-46.
[4]孙美青, 马莺, 程金菊. 牦牛酥油理化性质研究[J]. 中国乳品工业, 2016, 44(3): 9-11.
[5]达娃卓玛. 西藏不同地区酥油微生物指标比较及分析[J]. 西藏科技, 2015, (8): 3-5.
[6]潘虎, 次顿, 李颖, 等. 西藏酥油中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因检测及脉冲场凝胶电泳分型研究[J]. 中国卫生检验杂志, 2016, (1): 12-15.
[7]CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Suseptibility Tests for Bacteria Isolated
From Animals; Approved Standard-Fouth Edition. CLSI document VET01-A4. Wayne, PA: Clinical and
Laboratory Standards Institute; 2013.
[8]刘保光, 吴华, 胡功政. 鸡源肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的基因型鉴定[J]. 中国兽医杂志, 2014, 50(4): 10-11.
作者简介：宋博利(1975-),女,讲师,学士,研究方向为动物性食品卫生检验。
论文作者:宋博利
论文发表刊物:《知识-力量》2019年2月中
论文发表时间:2018/12/11
标签：酥油论文; 微生物论文; 病原论文; 内酰胺论文; 西藏论文; 试剂论文; 头孢论文; 《知识-力量》2019年2月中论文;