（1济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院 山东济南 250002）
（2山东大学附属山东省肿瘤医院 山东济南 250117）
【中图分类号】R735.3 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）04-0279-02
结直肠癌（colorectal cancer，CRC）的发病率在全球癌症发病率中居第三位[1]。并有逐年上升的趋势。本研究针对CRC患者手术前后癌胚抗原（CEA）、糖类蛋白19-9（CA19-9）及血液cfDNA的水平进行动态观察，评价对手术效果及预后判断敏感的生物学指标。
1.材料与方法
1.1 病例选择与样本收集
2014年以来术前未接受放化疗的CRC手术患者38例，术后病理证实为癌。采集术前以及术后30天外周静脉血各8ml，各取4ml置于抗凝管及促凝管中，分离血浆及血清。3000×g离心10min，取上清；再以16000×g离心10min。取上清置-80℃保存。
1.2 检测方法
1.2.1 cfDNA定量 OMEGA E.Z.N.A Blood DNA Kit提取CRC患者DNA，定量后倍比稀释制备标准品，最终浓度分别为1ng/ml，10ng/ml，100ng/ml，1000ng/ml，10000ng/ml。Qiagen Circulating DNA Kit提取血浆中的cfDNA。LightCycler 480仪器进行实时荧光定量PCR扩增。
1.2.2 CEA、CA19-9检测方法 美国罗氏公司配套试剂。
1.2.3统计分析 三者含量均不满足正态分布，采用Wilcoxon秩和检验，中位数（四分位距）描述趋势特点。Graphpad Prism 5.0进行统计分析。P＜0.05时则差异没有统计学意义。
2.结果
2.1 术后较术前cfDNA含量变化
CRC患者术前及术后30天血浆cfDNA含量分别为408.545（1171.81）ng/ml、313.75（845.31）ng/ml，二者差异没有统计学意义（P＞0.05），即手术前后cfDNA含量没有显著变化。
2.2 术后较术前CEA、CA19-9含量的变化
检测术前及术后30天血清中CEA及CA19-9含量。与术前相比，CRC患者术后二者的含量均出现显著的下降（P＜0.05）。
2.3 临床参数与术前三者含量的相关性
CRC患者术前循环DNA含量及CEA含量与年龄，性别，病理分期以及发病位置均不存在相关性（P＞0.05）；CA19-9含量与患者年龄，性别以及发病位置不存在相关性（P＞0.05），而与肿瘤的病理分期存在显著的相关性（P=0.003），病理分期越高，则其含量越高。
3.讨论
血液循环DNA（circulating free DNA，cfDNA），主要来源于细胞的凋亡、坏死和分泌[2]。cfDNA水平变化与性质改变在一定程度上可以反映原发肿瘤的特征。CEA广泛用于CRC的诊断、治疗以及预后的监测[3]。CA19-9为与消化道肿瘤相关的标志物。CEA、CA19-9含量的动态变化与病程发展密切相关。
CRC患者术后血清CEA、CA19-9水平均明显低于术前，说明二者水平的变化对CRC患者病情判断、疗效观察有一定的临床参考价值。相反，患者术后cfDNA的水平与术前相比无显著变化（P=0.5140）。这证明相比cfDNA含量的变化，CEA、CA19-9水平的变化对临床疗效的判断更有价值。然而，应当注意虽然cfDNA水平在手术前后差异无显著性，但cfDNA水平的中位数术后比术前低，而差异没有显著性的原因可能是由于纳入的病例数较少，因此本研究的结论与之前文献报道的结论[4]不同也是可以理解的。
本研究证明相比cfDNA水平的动态变化，CEA、CA19-9的动态变化可能对CRC患者的诊断、治疗以及预后的监测更有参考价值，但该结论需要在较大的样本中进一步证实。
【参考文献】
[1] Torre LA,Bray F,Siegel RL, Ferlay J,Lortet-Tieulent J, Jemal A.Global cancer statistics,2012. CA Cancer J Clin. 2015;65:87-108.doi:10.3322/caac.21262.
[2] Nakamura T,Sueoka-Aragane N,Iwanaga K,Sato A,Komiya K,Kobayashi N,Hayashi S,Hosomi T,Hirai M, Sueoka E,Kimura S.Application of a highly sensitive detection system for epidermal growth factor receptor mutations in plasma DNA.J Thorac Oncol.2012;7:1369-81.doi:10.1097/JTO.0b013e31825f2821.
[3]Keesee SK,Briggman JV,Thill G,Wu YJ.Utilization of nuclear matrix proteins for cancer diagnosis.Crit Rev Eukaryot Gene Expr.1996;6:189-214.doi:
[4]Hao TB,Shi W,Shen XJ,Qi J,Wu XH,Wu Y,Tang YY,Ju SQ.Circulating cell-free DNA in serum as a biomarker for diagnosis and prognostic prediction of colorectal cancer.Br J Cancer.2014;111:1482-9.doi:10.1038/bjc.2014.470.
论文作者:谢文利,宋现让
论文发表刊物:《心理医生》2017年4期
论文发表时间:2017/5/23
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