（天津医科大学代谢病医院药剂科 天津 300070）
【摘要】目的：研究吡格列酮对糖尿病大鼠血清中神经酰胺表达的影响。方法：SD大鼠随机分为3组：正常组、模型对照组、吡格列酮组，每组20只大鼠。链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型制备成功后，吡格列酮组开始治疗，正常组和模型组给予同体积蒸馏水，每日1次，连续2个月至实验结束。高效液相色谱法测定血清神经酰胺的表达。结果：血清神经酰胺的表达：与正常组比较，模型组大鼠血清神经酰胺含量增高（P<0.01）；与模型组比较，吡格列酮组大鼠血清神经酰胺含量均降低（P<0.05）。结论：吡格列酮可降低血清神经酰胺的表达。
【关键词】吡格列酮；糖尿病；神经酰胺
【中图分类号】R587.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）07-0155-02
糖尿病是继肿瘤、心血管病变之后，严重威胁人类健康的第三大慢性病[1]。由于饮食和生活方式的改变，自2000年以来，我国糖尿病的发病率与日俱增。每天约16000人诊断为糖尿病，约3000人死于糖尿病并发症[2]。近一亿中国人饱受到糖尿病的困扰，这其中90%属于Ⅱ型糖尿病。噻唑烷二酮类药物吡格列酮，为过氧化物酶体增生物激活受体（PPAR）-γ受体的激动剂，作为目前临床常用的治疗Ⅱ型糖尿病药物[3]。神经酰胺（ceramide，Cer）作为第二信使，是鞘磷脂信号途径的中心分子[4]。最新研究表明，神经酞胺在胰岛素抵抗的形成过程中发挥了重要的作用[5]。但Ⅱ型糖尿病的治疗药物对神经酰胺的影响国内报道较少，故本课题拟研究吡格列酮对糖尿病大鼠血清中神经酰胺含量的影响。
1.材料与方法
1.1 材料
1.1.1实验动物
健康SD大鼠（SPF级），体质量在100～150g，购于中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。合格证号：SCXK-（军）2015-006。动物房温度20～22℃，24h恒温。实验前，大鼠自由进食饮水，适应环境一周。
1.1.2试剂及仪器
吡格列酮：15mg，赛诺菲（杭州）制药有限公司，批号：040216。雅培血糖仪及血糖试纸：美国雅培公司。高效液相色谱仪：waters2695。MSB010.CX2.5型台式高速离心机：SANYO。链脉佐菌素（Streptozotocin，STZ）、邻苯二甲醛、β-巯基乙醇（色谱纯）、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1mmol/L，pH4.4）均购自Sigma公司。
1.2 方法
1.2.1模型制备
70只SPF级雄性3周龄SD大鼠，随机取20只为正常对照组，其余50用于造模。事先采用灭菌的的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配置2%的STZ溶液。造模大鼠禁食12h，然后单次腹腔注射STZ，剂量为35mg/kg。正常对照组给予等剂量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。72h后尾静脉取血测定血糖，空腹血糖高于7.0mmol/L并且餐后血糖高于11.1mmol/L的为造模成功的大鼠。血糖为达到的大鼠补注一次STZ，剂量不变[6]。
1.2.2分组与给药
造模完成后，选取40只造模成功大鼠，随机分为模型对照组和吡格列酮组，每组各20只。吡格列酮组按大鼠体重每日1次灌胃0.6mg/100mg的吡格列酮，正常对照组和模型对照组大鼠每日1次给予同体积的蒸馏水，持续治疗两个月。模型对照组和吡格列酮组采用高脂高糖饲料喂养，正常对照组给予普通饲料喂养。治疗结束后，大鼠以25%乌拉坦麻醉，剂量为0.5ml/100g。心脏采血后离心，分离血清，置于-20°冰箱保存。
1.2.3血清神经酰胺含量测定
采用高效液相色谱法测定神经酰胺的表达水平，外标一点法推算出对应的待测样本中的神经酰胺含量。样品预处理：神经酰胺标准品及血清样本氢氧化钾脱酰基后，于邻苯二甲醛中衍生试剂反应60～90s。色谱条件：色谱柱为KromasilC18（250mm×4.5mm，5μm），流动相为甲醇—0.02mol?L-1磷酸二氢钾溶液（90:10），流速1.0mL?min-1，采用荧光检测器，激发波长340nm，吸收波长455nm，进样量50μL[7]。
1.3 统计学处理
计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，采用SPSS 18.0软件对数据进行处理，采用单因素方差分析（one-wayANOVA）检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
血清中神经酰胺含量结果与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清中神经酰胺含量明显增高（P<0.01）；与模型对照组比较，吡格列酮组血清神经酰胺含量显著降低（P<0.05），见表。
3.讨论
随着我国人民生活水平的提高，高糖高脂食物摄入过多，以及生活方式的改变，造成肥胖病和Ⅱ型糖尿病的发病率迅速升高。大部分肥胖病病人都伴随胰岛素抵抗，即对胰岛素敏感性降低。同样，Ⅱ型糖尿病的发病机制之一即为胰岛素抵抗[8]。神经酰胺作为细胞信号转导的第二信使，调控细胞分化、增值和凋亡等。
最新研究表明，神经酞胺在胰岛素抵抗的形成过程中发挥重要作用，能够降低丝氨酸/苏氨酸激酶Akt的活性[9]。胰岛素信号通路的关键因素即为Akt，其活性的降低直接导致胰岛素抵抗的形成，但胰岛素受体及其底物不受影响[10]。本实验结果显示，模型对照组大鼠血清中神经酞胺的含量明显高于正常对照组（P<0.01），吡格列酮组与模型对照组比较，血清中神经酞胺的含量明显降低（P<0.05），提示吡格列酮可能通过降低神经酰胺水平，从而使Akt的活性增强，达到治疗胰岛素抵抗的作用[11]。
综上所述，本实验建立了大鼠Ⅱ型糖尿病模型，并测定了吡格列酮对糖尿病大鼠血清神经酰胺含量的影响，并对该机制进行初步探讨，为干预鞘脂类水平对改善胰岛素抵抗的研究及应用提供一定帮助。然而，本实验未能对此过程中神经酰胺对Akt的抑制存在机制进行探索，有待将来进一步研究。
【参考文献】
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[11]覃海静.吡格列酮对STZ致糖尿病前期小鼠胰岛β细凋亡及氧化应激的影响[D].广西医科大学，2015.
论文作者:郑国斌（通讯作者）,安美娜
论文发表刊物:《医药前沿》2017年3月第7期
论文发表时间:2017/3/30
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