张俊玲[1]2003年在《扇贝裙边糖胺聚糖抑制脂质过氧化物及自由基对血管内皮细胞损伤的作用与机理研究》文中提出目的：探讨扇贝裙边提取物(ESS)抗动脉粥样硬化(AS)作用，研究其多糖成分--糖胺聚糖(SS-GAG)对脂质过氧化物及自由基损伤血管内皮细胞的形态及合成和分泌功能的影响。 方法：1、用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC，CRL-2480)，建立氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤模型，应用MTT方法观察分析SS-GAG对血管内皮细胞氧化损伤后的增殖活性抑制的影响。 2、采用过氧化氢(H_2O_2)造成血管内皮细胞体外氧化损伤的模型，用MTT方法观察SS-GAG对过氧化氢(H_2O_2)引发的血管内皮细胞氧化损伤的增殖活性抑制的影响。 3、用黄嘌呤氧化酶法测定血管内皮细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性，分析SS-GAG对OX-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤后细胞的SOD活性的影响；通过硫代巴比妥酸反应物(TBARS)方法测定血管内皮细胞内脂质过氧化损伤的代表性代谢产物丙二醛(MDA)的含量，分析SS-GAG对OX-LDL造成的血管内皮细胞脂质过氧化损伤后细胞的丙二醛(MDA)含量的影响。 4、建立OX-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤模型，用硝酸还原酶法测定SS-GAG对血管内皮细胞的血管依赖性舒张因子／一氧化氮(EDRF／NO)含量的影响；用化学比色法测定分析SS-GAG对血管内皮细胞内的内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)活性的影响。 5、利用OX-LDL所致的血管内皮细胞氧化损伤模型，用放射免疫法测定血管内皮细胞合成分泌的前列环素I_2(PG I_2)的稳定性代谢产物6-酮-前列腺素F_(1a)(PGF_(1a))和血栓素A_2(TXA_2)的稳定性代谢产物血栓素B_2(TXB_2)的含量，分析SS-GAG对血管内皮细胞氧化损伤后的合成分泌功能的影响。 结果：1、OX-LDL损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组血管内皮细胞比较，细胞数量显着减少，MTT染色吸光度(OD值)明显下降中文摘要(P(0.01);而用55一GAG(终浓度为50林g/ml一1600件g/ml)预处理的各保护组血管内皮细胞的细胞数量、MTT染色吸光度(0D值)均较模型组细胞明显增加(P<0.01);高剂量(终浓度为200林g/ml~1600林g/ml)55一GAG保护组血管内皮细胞的增殖活性明显高于低剂量(终浓度为50吨/m1)保护组的血管内皮细胞的增殖活性(P<0 .05);甚至有的55一GAG保护组(终浓度为400林g/m1一1600拼g/ml)细胞增殖活性超过正常对照组细胞的增殖活性(P<0.05);55一GAG对照组血管内皮细胞数量、MTT染色吸光度(OD值)与正常对照组细胞比较也明显增加(P<0.01)。 2、HZOZ损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组内皮细胞比较，增殖活性明显下降(P<0.01);而经55一GAG(终浓度分别为50吨/m1，100陀/m1，20郎g/m1)预处理后，血管内皮细胞的损伤明显减轻，细胞增殖活性较模型组细胞明显增加(P<0，01)。 3、与正常对照组血管内皮细胞比较，经OX一LDL损伤的模型组内皮细胞内的SOD活性明显减弱，MDA含量明显增加(P<0 .01);而经55一GAG(终浓度分别为50吨/m1，100魄/m1，200陀/m1)预处理的各保护组血管内皮细胞与模型组内皮细胞相比，细胞内SOD活性明显增强，MDA含量明显减少(P(0.01)。 4、用55一GAG(终浓度分别为50协g/ml，1 00卜g/ml，200林g/ml)预处理的各保护组血管内皮细胞虽然同样受到OX一LDL损伤，但与模型组内皮细胞比较，其细胞内的NO含量明显增加，eNOS活性明显增强(P<0 .01);经OX一LDL损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组内皮细胞比较，其内皮细胞内的NO含量明显减少，eNOS活性明显降低(P<0 .01)。 5、经OX一LDL损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组内皮细胞比较，细胞培养液中的PGFI。水平明显减少，TXBZ水平明显增加(P<0 .01);经55一GAG(终浓度分别为100魄/m1，200陀/m1)预处理的各保护组血管内皮细胞培养液中的PGF;。水平明显增加，TXBZ水平明显减少(P<0.01)。 结论:55一GAG不仅可减轻OX一LDL和HZOZ氧化损伤造成的血管内皮细胞增殖活性的抑制，而且还能促进正常血管内皮细胞的增殖;不但能降低脂质过氧化损伤造成的细胞内脂质过氧化毒性代谢产物丙二醛(MDA)的产生和血栓素AZ(TXAZ)水平的升高，而且能有效拮抗OX一LDL所致的血管内皮依赖性血管舒张因子一氧化氮(NO)和前列腺素工2(PGIZ)水平的下降，增加血管内皮细胞内的超氧化物歧化酶(SOD)和内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的活性。 综合分析本次实验结果，表明55一GAG对血管内皮细胞损伤有良好的保护作用。其保护作用机理可能与55一GAG稳定血管内皮细胞的细胞膜、抗脂质过氧化物和氧自由基对血管内皮细胞的氧化损伤作用、增加血管内 中文摘要皮细胞的内皮型一氧化氮合成酶和前列腺素或前列环素合成酶的活性有密切关系。这为动脉粥样硬化的防治提供了新的理论和实验依据。
张杰[2]2003年在《扇贝糖胺聚糖对血管内皮细胞损伤的保护作用与机理研究》文中进行了进一步梳理目的： 研究扇贝裙边提取物—糖胺聚糖(SS-GAG)对内皮细胞损伤的保护作用，探讨SS-GAG的抗动脉粥样硬化(AS)作用机制。 方法： 1 采用体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，建立氧自由基、多聚阳离子诱导的HUVEC的损伤模型，通过MTT比色法研究SS-GAG对HUVEC损伤和增殖活性抑制的影响。 2．采用Fenton体系造成体外培养HUVEC的氧化损伤，用化学方法观察SS-GAG对HUVEC损伤后乳酸脱氢酶(LDH)渗出的影响。 3．应用放射免疫方法，观察SS-GAG对Fenton体系所引发的HUVEC损伤后内皮素及血管紧张素Ⅱ分泌改变的影响。 4．运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法，观察HUVEC受到Fenton体系所致的氧化损伤后，血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达的改变，以及SS-GAG对此改变的影响。 5．运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法，观察HUVEC经Fenton体系氧化损伤后，血小板衍生生长因子B链(PDGF-BB)表达的改变，观察SS-GAG对此改变有否影响。 结果： 1．分别经Fenton体系、多聚赖氨酸作用的损伤对照组，内皮细胞增殖活性明显下降(P＜0.01)。而细胞经不同浓度的SS-GAG预先处理后，细胞活性的损伤明显减轻(P＜0.05)，高剂量的SS-GAG保护组内皮细胞增殖活性明显高于低剂量组(P＜0.05)。 2．经Fenton体系介导的氧自由基损伤后，HUVEC培养液中LDH渗出明显增多，经SS-GAG预处理后，LDH渗出量明显减少(P＜0.01)。 3．SS-GAG保护组与经氧自由基损伤的损伤对照组对比，内皮素的分泌明显减少(P＜0.01)，且随SS-GAG剂量增加而降低；SS-GAG保护组与经氧自由基损伤的损伤对照组对比，血管紧张素Ⅱ的分泌也明显减少(P＜0.01)，高剂量的SS-GAG组的血管紧张素Ⅱ的分泌量低于低剂量组(P＜0.01)。 4．经SS-GAG保护的HUVEC表达VCAM-1的量，较氧自由基损伤的损伤中文摘要对照组明显减少(P<0.01)。 :5 55一GAG保护的HUvEC表达PDGF一BB的量，较Fenion体系作用的损伤对照组明显减少(P<O，05)。结论: s$GAG可减少Fenton体系及多聚赖氨酸介导的氧自由基及多舞阳离子对血管内皮细胞损伤，抑制血管内皮细胞对内皮素和血管紧张素n的分泌，减少血管内皮细胞VCAM一1、PDGF一BB的表达。表明55一GAG对血管内皮细胞的损伤有良好的保护作用，提示 55一GAG的抗动脉粥样硬化机制可能与其保护内皮细胞免受损伤、抑制损伤的血管内皮细胞分泌内皮素和血管紧张素n、使vCAM‘l、PDGF一BB的表达增强有关。
高莹[3]2006年在《扇贝裙边糖胺聚糖对过氧化氢损伤的血管内皮细胞保护作用的研究》文中指出目的：通过观察扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对过氧化氢(H_2O_2)损伤的血管内皮细胞的合成及分泌功能的影响，进一步探讨扇贝裙边提取物(ESS)抗动脉粥样硬化(AS)的作用机理。方法：1、采用体外培养的方法，用人脐静脉内皮细胞株(HUVEC，ECV304)，建立H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤模型。2、用噻唑蓝(MTT)法观察SS-GAG对不同浓度的H_2O_2损伤的血管内皮细胞增殖活性的影响。3、用化学比色的方法测定分析SS-GAG对H_2O_2损伤的血管内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响。4、用酶促反应的方法测定内皮细胞内谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)的活性；用化学比色法测定内皮细胞内总的抗氧化能力(T-AOC)，分析SS-GAG对H_2O_2诱导的内皮细胞氧化损伤后GSH-PX及T-AOC活性的影响。5、用黄嘌呤氧化酶法测定内皮细胞内的超氧化物歧化酶(SOD)的活性；用硫代巴比妥酸反应物(TBARS)法测定内皮细胞内氧化损伤产物丙二醛(MDA)的含量；分析SS-GAG对受损细胞的SOD活性及损伤产物MDA的含量影响。6、建立H_2O_2诱导的血管内皮细胞氧化损伤模型，用硝酸还原酶法测定SS-GAG对血管内皮细胞的血管内皮舒张因子—一氧化氮(NO)含量的影响；用化学比色法测定SS-GAG对血管内皮细胞的一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。7、建立H_2O_2所致的血管内皮细胞氧化损伤模型，用放射免疫法测定内皮细胞合成分泌的前列环素(PGI_2)的稳定性代谢产物6-酮-前列环素F_(1α)(PGF_(1α))和血栓素A_2(TX A_2)的稳定性代谢产物血栓素B_2(TX B_2)的含量，分析SS-GAG对血管内皮细胞氧化损伤后的合成分泌功能的影响。8、用放射免疫法测定血管内皮细胞合成分泌的缩血管生物活性多肽-内皮素ET的含量，分析SS-GAG对H_2O_2诱导的血管内皮细胞氧化损伤后细胞的合成分泌功能的影响。结果：1、H_2O_2在75、150、300、600、1500、3000、6000μmol／L浓度时对血管内皮细胞的增殖有明显抑制作用，H_2O_2的浓度与细胞增殖活性呈反比，H_2O_2的浓度越高，其抑制作用越强，二者有明显量效关系。2．SS-GAG对低浓度的H_2O_2(75～600μmol／L)引起的VEC损伤有一定对抗作用，尤其是对抗H_2O_275μmol／L时的作用显着(P＜0.05)；但在高浓度H_2O_2(1500～6000μmol／L)存在时，SS-GAG则进一步抑制细胞的增殖活性(P＜0.05)。3、H_2O_2损伤组血管内皮细胞的LDH活性明显高于正常对照组；与损伤对照组比较，SS-GAG各保护组(50、100、200μg／ml)内皮细胞的LDH活性显着降低(P＜0.01)。4、与正常对照组比较，损伤对照组细胞内GSH-PX活性及T-AOC明显降低(P＜0.01)；SS-GAG(50、100、200μg／ml)各保护组细胞内GSH-PX、T-AOC活力均明显高于损伤对照组(P＜0.05，P＜0.01)。5、与正常对照组比较，H_2O_2损伤组内皮细胞的SOD活性明显降低，MDA含量明显增加(P＜0.01)；SS-GAG各保护组(50、100、200ug／ml)与损伤对照组比较，SOD活性明显增强，MDA含量明显减少(P＜0.01)。6、用SS-GAG(50、100、200ug／ml)预处理的各保护组与H_2O_2损伤对照组比较，其细胞内NO、NOS活性明显提高(P＜0.01)。7、H_2O_2损伤组与正常对照组比较，细胞培养液中的PGF_1。水平明显降低，TX B_2的含量明显增加(P＜0.01)；SS-GAG在50、100、200ug／ml浓度时可逆转H_2O_2的作用，提高PGF_1水平，降低TX B_2含量(P＜0.01)。8、H_2O_2的损伤组可使血管内皮细胞中的ET表达增强，SS-GAG(50、100、200ug／ml)保护组可显着降低受损细胞ET的表达(P＜0.01)。结论：扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)能逆转低浓度过氧化氢对内皮细胞增殖活性的抑制；并能增强受损的内皮细胞内SOD和NOS的活性；提高细胞内GSH-PX的活性和细胞的T-AOC；有效降低脂质过氧化代谢产物MDA的产生和LDH的漏出；明显增加内皮依赖性舒张因子NO和PGF_1。等舒血管物质的含量；显着降低TXB_2和ET等缩血管物质的分泌。结果表明，扇贝裙边糖胺聚糖对过氧化氢所造成的血管内皮细胞的氧化损伤均有明显的保护作用。该作用在其防治动脉粥样硬化方面具有重要意义。
张杰, 刘赛, 苏玉文, 杨曙光[4]2004年在《扇贝糖胺聚糖对氧自由基损伤血管内皮细胞的保护作用》文中研究指明目的 研究扇贝裙边提取物-糖胺聚糖(SS-GAG)体外培养应用对氧自由基所致的血管内皮细胞损伤的保护作用,探讨SS-GAG抗动脉粥样硬化(AS)的机理。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC).建立氧自由基诱导的HUVEC损伤模型,用MTT比色法观察SS-GAG对HUVEC增殖活性抑制的影响,用比色法观察SS-GAG对HUVEC损伤后乳酸脱氨酶(LDH)的漏出量的影响,应用放射免疫方法,观察SS-GAG对Fenton体系所引发的HUVEC损伤后内皮素(ET)及血管紧张素Ⅱ(AⅡ)分泌改变的影响。结果 与对照组比较.Fenton体系损伤组血管内皮细胞(VEC)的增殖活性、培养液中LDH释放、ET及AⅡ的分泌差异明显.而细胞经不同浓度的SS-GAG预先处理后,细胞增殖活性的损伤减轻,LDH释放以及ET、AⅡ的分泌均明显减少。结论 本研究结果证实,SS-GAG可减轻氧自由基对血管内皮细胞的损伤,抑制内皮细胞LDH的释放以及ET和AⅡ分泌,具有保护血管内皮细胞作用,此作用可能与其抗AS的机理有关。
王海桃[5]2007年在《牡蛎糖胺聚糖保护血管内皮细胞作用的研究》文中进行了进一步梳理目的：通过观察牡蛎糖胺聚糖(O-GAG)对过氧化氢损伤的血管内皮细胞合成及分泌功能的影响，以进一步探讨牡蛎糖胺聚糖(O-GAG)的抗动脉粥样硬化(AS)作用机理。方法：1、采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(HUVECS，ECV304)，建立过氧化氢(H_2O_2)诱导的血管内皮细胞损伤模型，应用MTT法观察分析O-GAG对损伤及正常血管内皮细胞增殖活性的影响。2、用化学比色的方法测定分析O-GAG对H_2O_2损伤的血管内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响。3、用黄嘌呤氧化酶法测定血管内皮细胞内的超氧化物歧化酶(SOD)的活性；用硫代巴比妥酸反应物(TBARS)法测定内皮细胞内氧化损伤产物丙二醛(MDA)的含量；用酶促反应的方法测定血管内皮细胞内谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)的活性；用化学比色法测定内皮细胞内的总抗氧化能力(T-AOC)，分析O-GAG对H_2O_2诱导损伤的血管内皮细胞抗氧化功能的影响。4、建立H_2O_2诱导的血管内皮细胞氧化损伤模型，用硝酸还原酶法测定血管内皮细胞的内皮舒张因子—一氧化氮(NO)含量；用化学比色法测定总一氧化氮合酶(T-NOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性，分析O-GAG对血管内皮细胞氧化损伤后合成分泌NO功能的影响。5、建立H_2O_2所致的血管内皮细胞氧化损伤模型，用放射免疫法测定血管内皮细胞合成分泌的前列环素(PGI_2)的稳定性代谢产物6酮-前列腺素F_1。(6-keto-PGF_(1α))和血栓素A_2(TXA_2)的稳定性代谢产物血栓烷素B_2(TXB_2)的含量，分析O-GAG对血管内皮细胞氧化损伤后的前列腺素代谢的影响。6、用放射免疫法测定血管内皮细胞合成分泌的缩血管生物活性多肽-内皮素(ET)的含量，分析O-GAG对H_2O_2诱导的血管内皮细胞氧化损伤后细胞合成分泌ET功能的影响。结果：1．给予H_2O_2后，VECs的增殖活性与正常对照组相比明显降低(P＜0.01)。与损伤对照组比较，除O-GAG最低剂量组(10ug／ml)外，O-GAG各浓度保护组(50、100、200、400、800ug／ml)的血管内皮细胞活性均有所增高(P＜0.05，P＜0.01)。而O-GAG在100、200ug／ml浓度时还可促进正常细胞的生长(与正常对照组相比P＜0.05)。2、H_2O_2损伤模型组血管内皮细胞释放的LDH明显高于正常对照组(P＜0.01)；与损伤模型组比较，O-GAG各保护组(50、100、200ug／ml)血管内皮细胞释放的LDH显着降低(P＜0.01)。3、与正常对照组比较，H_2O_2损伤模型组内皮细胞的SOD活性明显降低，MDA含量明显增加(P＜0.01)；O-GAG各保护组(50、100、200ug／ml)与损伤模型组比较，SOD活性明显增强，MDA含量明显减少(P＜0.01)。H_2O_2损伤模型组细胞内GSH-PX活性及T-AOC活力明显降低于正常对照组细胞(P＜0.01)；与损伤模型组比较，O-GAG各保护组(50、100、200ug／ml)细胞内GSH-PX、T-AOC活力均明显升高(P＜0.01)。4、与正常对照组相比，H_2O_2损伤模型组VECs内T-NOS活性、NO含量明显降低，iNOS活性则明显升高(P＜0.01)。与H_2O_2损伤模型组比较，O-GAG各浓度保护组(50ug／ml、100ug／ml、200ug／ml)VECs内T-NOS活性、NO含量均明显提高，而细胞内iNOS活性显着降低(P＜0.01)。5、加入H_2O_2后的模型组细胞培养液中的6-keto-PGF_1。水平明显低于正常对照组，而TXB_2的含量则显着增加(P＜0.01)；O-GAG在50、100、200ug／ml浓度时可逆转H_2O_2的氧化损伤作用，提高6-keto-PGF_(1α)水平，降低TXB_2含量(P＜0.01，P＜0.05)。6、H_2O_2损伤组与正常对照组相比，ET含量明显升高(P＜0.01)，说明过氧化氢可使血管内皮细胞中的ET表达增强，而预先加入O-GAG(50、100、200ug／ml)可显着降低受损细胞ET的表达(P＜0.01)。结论：牡蛎糖胺聚糖(O-GAG)能够减轻过氧化氢对血管内皮细胞的氧化损伤，并对正常的血管内皮细胞有促增殖作用；O-GAG可以使受损的血管内皮细胞释放的LDH减少；提高受损内皮细胞抗氧化酶SOD和GSH-PX的活性及总抗氧化能力，降低脂质过氧化代谢产物MDA的产生；O-GAG还可有效提高细胞内T-NOS活性，降低炎性产物iNOS活性；明显增加内皮依赖性舒张因子NO和6-keto-PGF_(1α)等舒张血管物质的表达；显着降低TXB_2和ET等收缩血管物质的生成。结果表明，牡蛎糖胺聚糖对过氧化氢所造成的血管内皮细胞的氧化损伤有明显保护作用。该作用在防治动脉粥样硬化、高血压、脑卒中等心血管疾病方面具有重要意义。
汪韶君[6]2006年在《扇贝裙边糖胺聚糖对巨噬细胞脂蛋白代谢及脂蛋白受体表达的影响研究》文中进行了进一步梳理目的:研究扇贝裙边提取物—糖胺聚糖(SS-GAG)对巨噬细胞脂蛋白受体及脂蛋白氧化功能的影响,探讨SS-GAG的抗动脉粥样硬化(AS)的分子机制。 方法:1.采用小鼠的单核巨噬细胞株(RAW264.7),建立氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的巨噬细胞损伤模型,运用MTT比色分析法研究SS-GAG对巨噬细胞的毒性作用及细胞氧化损伤后增殖活性的影响。 2.以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,通过黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸显色法等多种生化的方法观察SS-GAG对巨噬细胞氧化低密度脂蛋白(LDL)过程中的产物丙二醛(MDA)和共轭双烯、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD),、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响。 3.以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学的方法检测SS-GAG对OX-LDL损伤的巨噬细胞的低密度脂蛋白受体(LDL-R)蛋白表达和基因转录的影响。 4.以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化的方法检测SS-GAG对OX-LDL损伤的巨噬细胞的高密度脂蛋白受体(SR-BI)蛋白表达和基因转录的影响。 5.以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SS-GAG对OX-LDL损伤的巨噬细胞的清道夫受体CD36基因转录的影响。 结果:1.SS-GAG100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml药物组巨噬细胞的增值活性与正常对照组比较无显着差别(P>0.05),表明实验所用浓度范围内SS-GAG对细胞无明显的毒性反应。 2.OX-LDL50μg/ml与小鼠的单核巨噬细胞RAW264.7作用24小时后能明显抑制RAW264.7细胞的增值活性。与模型组比较,SS-GAG各剂量组均可提高OX-LDL损伤引起的巨噬细胞增殖活性降低,以SS-GAG400μg/ml组作用最强,药物剂量小于400μg/ml时存在量效关系。 3.LDL与巨噬细胞孵育24h后,细胞内的MPO活性升高、GSH-PX活性降低,脂质过氧化物MDA和共轭双烯的生成明显增多;与模型组比较,扇贝糖胺聚糖在100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml浓度时可明显提高GSH-PX活性,降低MPO活性,降低脂质过氧化物的生成,且存在一定的剂量效应关系。 4.OX-LDL50μg/ml与单核巨噬细胞RAW264.7作用24小时后能降低LDL—R的蛋白表
王瑞鑫, 王春波, 罗世滨, 李裕强[7]2008年在《扇贝裙边糖胺聚糖拮抗高糖对血管内皮细胞损伤机理的研究》文中提出目的探讨扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)拮抗血管内皮细胞损伤性疾病的价值。方法取体外培养生长良好的血管内皮细胞(ECV304),建立高糖诱导的细胞损伤模型。在高浓度葡萄糖(55.5 mmol/L)状态下加入不同浓度SS-GAG,继续培养至12、24、36、48 h,倒置显微镜下观察细胞形态,用3H-TdR掺入法检测细胞增殖活性。结果①高浓度葡萄糖使ECV304细胞形态发生改变,细胞增殖活性受到明显抑制,且呈浓度和时间依赖性;②SS-GAG与高浓度葡萄糖共同作用下,内皮细胞形态及增殖活性基本正常,此效果与SS-GAG浓度呈正比。结论高浓度葡萄糖对血管内皮细胞具有明显损伤作用;SS-GAG可减轻高浓度葡萄糖对血管内皮细胞的损伤,保护血管内皮细胞;SS-GAG对防治心脑血管疾病和糖尿病血管病变及动脉粥样硬化的发生、发展有积极意义。
邢军[8]2006年在《扇贝裙边糖胺聚糖抗肿瘤作用及其机制的实验研究》文中指出目的：通过体内、体外实验研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)的抗肿瘤药理活性，并初步探讨其抗肿瘤作用的机制。方法：1．体外抗肿瘤试验：采用体外细胞培养的方法，用MTT法观察不同浓度的扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对人大肠癌LOVO、宫颈癌HeLa、肝癌SMMC7721、肺癌A549等四种肿瘤细胞株增殖活性的影响，以分析SS-GAG的抗肿瘤活性。2．体内抗肿瘤试验：(1)建立小鼠移植性S180腹水癌模型，观察小鼠接种肿瘤后30d内的存活时间，并计算其生命延长率；(2)建立小鼠移植性S180实体瘤模型，观察SS-GAG的抑瘤率以及对生长曲线、脾指数、胸腺指数，肝重和白细胞计数的影响。3．SS-GAG对S180荷瘤小鼠细胞免疫活性的影响研究：用MTT法观察SS-GAG对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性、杀伤活性的影响，对脾淋巴细胞转化增殖的影响以及对NK细胞活性的影响。4．SS-GAG对荷瘤小鼠抗氧化功能的影响研究：采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)、硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)、Fe~(2+)与菲啉类物络合法测定血清总抗氧化能力(T-AOC)。观察SS-GAG对荷瘤小鼠血清总抗氧化能力、超氧化物岐化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。结果：1．体外试验：与对照组相比，扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)在500、200、100、50、25μg·ml~(-1)浓度时对离体培养的宫颈癌HeLa细胞的生长有非常明显的抑制作用(P＜0.01)，并存在浓度依赖性；扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)200、100、50、25μg·ml~(-1)对大肠癌LOVO和肺癌A549肿瘤细胞的生长有抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)，各给药组细胞的增殖活性明显低于对照组，而对离体培养的肝癌SMMC7721细胞的生长影响则较弱(P＞0.05)。2．体内试验：SS-GAG(15mg／kg、30mg／kg、60mg／kg)能显着延长S180腹水瘤小鼠的生存时间、抑制小鼠S180实体瘤的生长，对环磷酰胺所致的白细胞计数减少有对抗作用(P＜0.05)。3．SS-GAG(15mg／kg、30mg／kg、60mg／kg)能显着增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性和杀伤活性(P＜0.05，P＜0.01)，促进脾淋巴细胞转化增殖和NK细胞活性(P＜0.01)，提高小鼠的免疫功能。4．SS-GAG(15mg／kg、30mg／kg、60mg／kg)能提高小鼠的血清总抗氧化能力和超氧化物岐化酶结(SOD)的活性，降低脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量(P＜0.05，P＜0.01)，增强小鼠的抗氧化功能。结论：扇贝裙边糖胺聚糖对实验性肿瘤模型具有抑制作用。其抗肿瘤作用可能与其增强细胞免疫和提高机体的抗氧化功能有关。
王瑞鑫, 王春波, 罗世滨, 李裕强[9]2008年在《扇贝裙边糖胺聚糖对高糖致ECV-304损伤的保护作用》文中指出目的探讨扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对高糖所致ECV-304损伤的保护作用及其机理。方法体外培养生长良好的ECV-304,建立高糖诱导的细胞损伤模型,在高浓度葡萄糖(G lu55.5 mmol.L-1)状态下加入不同质量浓度SS-GAG,采用3H-TdR掺入法检测细胞增殖活性,特异性硝酸还原酶法检测细胞内NO、放射免疫法测定内皮素-1(ET-1)和血管紧张素Ⅱ(AⅡ)。结果高糖损伤组,细胞增殖活性受到明显抑制,细胞培养上清液ET-1、AⅡ的含量明显升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)),细胞内NO分泌明显降低,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。SS-GAG明显减轻高糖对细胞损伤,细胞增殖活性、ET-1、AⅡ、NO均趋于正常,且随SS-GAG浓度增高保护效果越明显。结论高糖对ECV-304细胞具有明显的损伤作用,可导致ECV-304细胞形态和功能的紊乱,引起ET-1、AⅡ产生增多,NO分泌失调;SS-GAG通过调节ET、AⅡ和NO分泌,减轻高糖对ECV-304细胞的损伤,保护ECV-304。提示SS-GAG对防治心血管疾病和糖尿病(DM)血管病变及动脉粥样硬化(AS)的发生发展具有积极的意义。
初向华[10]2004年在《扇贝裙边GAG对碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响》文中研究说明目的：研究栉孔扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用，并探讨SS-GAG抗动脉粥样硬化(AS)的作用机理。 方法：1．体外培养血管平滑肌细胞，建立由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的VSMC增殖模型，运用MTT比色分析法研究SS-GAG对VSMC增殖活性的影响。 2．采用bFGF诱导的VSMC增殖模型，通过黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸显色法等多种生化的方法观察SS-GAG对VSMC增殖过程中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和总抗氧化能力(T-AOC)的影响。 3．应用bFGF诱导的VSMC增殖模型，用硝酸还原酶法等化学的方法观察SS-GAG对VSMC增殖过程中细胞内总一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)含量的影响。 4．采用透射电镜观察SS-GAG对bFGF诱导增殖的VSMC超微结构的影响。 5．运用流式细胞仪检测SS-GAG对增殖的VSMC的细胞增殖动力学的影响。 6．采用原位杂交的方法，观察SS-GAG对bFGF诱导增殖的VSMC内的血小板源性生长因子(PDGF)A链mRNA表达的影响。 结果：1．与模型组比较，SS-GAG(50μg／ml、100μg／ml和200μg／ml)可降低bFGF所诱导的VSMC的增殖活性(P＜0.05，P＜0.01)，以100μg／ml抑制作用最强。 2．与模型组相比，SS－GAG (50μg／ml、100μg／ml和200μg／ml)可使bFGF诱导增殖的VSMC的脂质过氧化物—丙二醛(MDA)产生减少(P＜0.05，P＜0.01)：SS-GAG(100μg／ml和200μg／ml)可使bFGF诱导增殖的VSMC的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力和总抗氧化能力(T-AOC)升高(P＜0.05)。中文摘要3.与模型组相比，55一GAG(1 00林g/ml和200林g/ml)可使bFGF所诱导增殖的VSMC内的，Q， Nos活力升高(P<0.05，P<0.01);而100林g/ml的55一GAG还可使bFGF所诱导增殖的VSMC的NO释放量明显增加(P<0.01)。4.透射电镜显示，55一GAG(100林岁ml)作用后血管平滑肌细胞内肌丝较模型组增多，而粗面内质网和高尔基复合体等细胞器明显少于模型组，表明55一GAG可明显抑制VSMC由收缩表型向合成表型转化。5一与模型组比较，55一GAG(50林g/ml、100卜g/ml和200卜g/ml)可使bFGF所诱导增殖的VSMC中处于S期的细胞明显减少(P<0.01)。6.原位杂交结果显示，bFGF所诱导增殖的VSMC经55一GAG(100林g/ml和200林g/ml)作用后，细胞内PDGF一A链mRNA表达较模型组减少(P<0.05，P<0.01)，阳性细胞数量也较模型组减少。结论:55一GAG可降低bFGF所诱导的VSMC的增殖活性，减少MDA的生成，使GSH一PX活力增加，而且细胞的总抗氧化能力也升高;同时细胞内的总NOS活力和NO的分泌量均增加。表明55一GAG的抗动脉粥样硬化作用可能与其减少脂质过氧化物产生、增强抗氧化系统的活性、提高细胞内总NOS活力和增加NO释放有关。55一GAG还可通过抑制VSMC由收缩表型向合成表型转化、抑制细胞内DNA合成、减少S期细胞和减少细胞内PDGF一A链基因的转录，从而抑制VSMC增殖，达到抗动脉粥样硬化的效果。
参考文献：
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