周海燕[1]2002年在《氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及caspase-3、c-fos的影响》文中研究指明1．前言 细胞凋亡(apoptosis)又称程序性细胞死亡(programmed celldeath，PCD)，是一种不同于细胞坏死的主动性死亡。Caspases家族是一类促进细胞凋亡的蛋白水解酶，可调节内环境稳定、修复蛋白、裂解和杀死细胞。其中caspases-3激活后可导致多种细胞凋亡。研究发现脑室内给予caspases抑制剂可以阻止小鼠暂时性脑局灶性缺血后神经元死亡，从而对缺血神经元产生保护功能。c-fos原癌基因为即刻早期基因(Instantly Earlier Gene，IGE)，是中枢神经系统细胞最主要的快反应原癌基因之一，在对外界刺激—转录藕联的信息传递过程中起着“核内第叁信使”的重要作用。c-fos的表达与脑缺血后神经细胞中信息传递及其生存或死亡有密切关系。由于离子分布改变和胞内Ca~(2+)浓度增高而激活的谷氨酸受体亦为触发缺血性细胞死亡的主要因素。NMDA受体是控制Ca~(2+)、Na~+、K~+跨膜转运的通道，据研究在大脑中动脉阻塞模型短暂、持续缺血前或缺血后给予该受体阻滞剂有明显的神经保护作用。作为脑缺 浙江大学硕士论文 论文拘要 血后神经元死亡的一种重要形式，在全脑或局灶性脑缺血动物模 型中，缺血区，尤其是半暗带区，可见明显的神经元凋亡现象， 如神经元TUNE染色阳性、DNA梯带及胞质、胞核凝聚等。同时 闪耶阳冈基因、C－fOS原癌基因、细胞死亡抑制基因③）和触 发基因（bax、p53），在脑缺血早期和晚期均高水平表达。抑制 p家族J－fOS原癌基因，激活BC12可使缺血损伤产生耐受。 2．目的 氯胺酮为N’MDA非竞争性抑制剂，许多报道亦认为其有一定 的脑保护作用。本实验，我们观察了氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌 注损伤后细胞凋亡状态及po 3、C－fOS的影响，验证其对脑缺 血再灌注损伤的保护作用，及是否通过影响cas呷习、c－fos的途 径。 3．材料与方法 30只健康沙土鼠，随机分为叁组，分别为假手术组、缺血再 灌注组和氯胺酮组，每组各10只。叁组小鼠均腹腔注射戊巴比妥 钠忧g从g麻醉。缺血再灌注组：分离双侧颈总动脉，用无创动脉 夹阻断脑血流10lllin后松开动脉夹恢复血流。假手术纽：仅分离双 恻颈总动脉但不予阻断。氯胺酮组：血流阻断前30“n腹腔注射 氯胺酮1（hag／k。缺血后24小时将各组小鼠断头处死，完整取出全 脑，制成石蜡标本，备用。应用分子生物学方法一一脱氧核糟核’ 昔酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（ten’ll’ml心删mm北d匆豆 fena 1llcolalerl ick endM恤吨，TUNEL）原位标记缺血神经 2 浙江大学硕士论文 论文拘要 元m仇片段检测凋亡细胞，采用SP法进行删呷叨和C－fOS的免疫 组织化学染色。光镜下观察hNEL阳性细胞及0仰以－3和c4os免疫 反应的结果。计算10个高倍镜视野，每个初u吁计数100个细胞，总 计11个细胞，计算出平均阳性率，即得LI（laeling ne），计 算公式为：LI＝（阳性细胞数／计数细胞总数）X 10the。。用Excel 软件进行数据统计处理和相关性检验。 4．结果 ＊）假手术组可见少量TUN’EL阳性细胞；缺血再灌注组及氯 胺团组沙土鼠的脑组织中，TUNEL阳性细胞数目明显增多，与假 手术组比较差异具统计学意义（P＜0．01）：但氯胺酮组阳性细胞 数目明显低于缺血再灌注组叩O．01）。 o）假手术组可见极少量as呷习阳性细胞；缺血再灌注纽及 氯胺田组p 3 阳性细胞数目较假手术组均明显增加 （Ko．0且）：但氯胺酮组阳性细胞数目明显少于缺血再灌注组， 其差异具统计学意义O狈．of）。 （3）假手术组SicS蛋白表达阴性：而缺血再灌注组与氯胺酮组 可见大量c－fos蛋白表达（P＜0．01）：氯胺酮组与缺血再灌注组相 比c－fOS表达明显减少，差异具统计学意义（P＜0．of）。 5．结论 咀）沙土鼠脑缺血再蠢注槽加了神经细胞瞩亡的发生。 （2）氯胺团能够明显减轻脑缺血再蠢注后神经细胞凋亡的发 生。
周益锋, 邬伟东, 柳子明, 周海燕, 陈钢[2]2003年在《氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响》文中研究说明目的 :研究氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡状态及相关基因bax、bcl 2表达的影响。方法 :沙土鼠全脑缺血模型 ,缺血10min ,再灌注24h。分为假手术组、缺血再灌注组和氯胺酮组。采用TUNEL法原位标记DNA片段检测凋亡细胞 ,采用SP法进行bax、bcl 2的免疫组织化学染色。结果 :缺血再灌注组及氯胺酮组脑组织中TUNEL及bax阳性细胞数明显多于假手术组(P<0 .01) ;氯胺酮组阳性细胞数目明显低于缺血再灌注组(P<0 .01)。bcl 2阳性细胞数3组间比较无明显差异。结论 :氯胺酮减少沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞的凋亡 ,bax/bcl 2比值较再灌注组相对降低可能为此作用的机理之一
参考文献：
[1]. 氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及caspase-3、c-fos的影响[D]. 周海燕. 浙江大学. 2002
[2]. 氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响[J]. 周益锋, 邬伟东, 柳子明, 周海燕, 陈钢. 天津医药. 2003