秦建伟[1]2001年在《FK506对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响》文中指出肝移植过程中，供肝会受到缺血、保存、再灌注、去神经、药 物等因素的影响而发生程度不同的损伤，移植后肝脏会发生再生作 用。供肝的再生能力对于肝移植，尤其是肝部分移植术的成功有着 重要的意义。近年来的研究发现CyA、FK506等免疫抑制剂与肝再 生之间存在着密切的关系，但对于其促肝再生的作用机理以及作用 与药物剂量之间的关系了解很少。本实验目的是通过大鼠减体积肝 移植模型观察不同剂量的FK506(0.1mg/kg．day及0.05mg/kg．day) 对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响作用。 主要实验结论： 1．建立了稳定实用的大鼠减体积肝移植模型(减体积35％)。 2．FK506显着提高了大鼠减体积肝移植术后第二天的肝细胞有 丝分裂指数和增殖细胞核抗原标记指数，提示FK506对于肝再生有 明显的促进作用。 3．FK506剂量为 0．1mg／kg．day的实验组术后第二天肝细胞增殖 细胞核抗原标记指数显着大于剂量为0.05mg/kg．day的实验组，提示 FK506促进肝再生作用存在剂量依赖性。4．本实验采用的两种剂量的FK506未表现出明显的肝脏毒性。 上述实验结果表明：FK506是一种具有明显促进肝再生作用， 同时肝脏毒性较小的强有力的免疫抑制剂。是临床肝移植术后，尤 －二． — — 其实肝部分移植术后理想的免疫抑制剂。
秦建伟, 杨广顺, 杨宁, 李齐根[2]2004年在《他克莫司对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响》文中认为目的:观察他克莫司对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响。方法:建立大鼠部分肝(65％)移植模型,并随机分为对照组、他克莫司大剂量组(0.1 mg·kg-1·d-1)和他克莫司小剂量组(0.05mg·kg-1·d-1),每组各24只。受体于术前3 d起肌注给药,每天1次,直至术后。观察术后第1、2、3、5天肝细胞有丝分裂指数(MI)、增殖细胞核抗原标记指数(PCNA LI),速率法检测血清胆红素(TB)、谷丙转氨酶(ALT)等指标。结果:肝移植术后的肝细胞有丝分裂的高峰期出现在术后48 h,他克莫司显着提高了大鼠减体积肝移植术后48 h MI及PCNA LI(P<0.05,P<0.01);大剂量实验组术后48 h PCNA LI高于小剂量组(P<0.05);两种剂量组的TB、ALT没有明显改变。结论:他克莫司对大鼠减体积肝移植后肝再生有促进作用,且该作用有剂量依赖性,同时肝脏毒性较小。
牛英[3]2008年在《缺血后处理对大鼠减体积肝移植术后移植肝保护作用的实验研究》文中研究指明第一章大鼠60%减体积肝移植(RSLT)模型的建立目的:探讨大鼠60%减体积肝移植(RSLT)模型的建立方法,为减体积肝移植的相关后续研究奠定基础。方法:参照Omura等的报道,在Kamada“二袖套法”基础上建立大鼠60%RSLT模型,移除供肝左外侧叶及尾状叶修整为60%减体积供肝,共施行50例大鼠60%减体积肝移植手术。结果:前22例主要用于手术方法及技巧练习,在28例定型手术中,供体手术时间约为25±5min,供肝热缺血时间为0-1min,供肝修整时间约为15±3min,无肝期平均为20±2min,手术成功率为85.7%(24/28)。结论:该模型稳定可靠,可为减体积肝移植的基础及临床相关研究提供较为理想的研究手段。第二章缺血后处理对大鼠减体积肝移植术后移植肝缺血-再灌注损伤的保护作用目的:验证缺血后处理对大鼠减体积肝移植术后移植肝缺血-再灌注损伤的保护作用及初步探讨其可能机制。方法:雄性SD大鼠分别用作供、受体,按照第一部分的方法建立60%减体积肝移植模型,根据供肝开放门静脉灌注时是否采取缺血后处理及缺血后处理方式将受体大鼠分为单纯缺血.再灌注损伤组(IRI组)、缺血后处理1组(IPO 1组)、缺血后处理2组(IPO 2组)、缺血后处理3组(IPO 3组),另设假手术组(SO组)。分别于供肝再灌注后2h、6h处死各组动物,取外周血检测血清ALT、AST,取新鲜肝组织检测髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物岐化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的含量,HE染色作组织病理学检查,免疫组织化学染色观察细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达。结果:供肝再灌注后2h、6h各时点,IPO 2组及IPO 3组的大鼠血清ALT、AST水平及肝组织MPO、MDA水平明显低于IRI组和IPO1组(p＜0.05),肝组织SOD水平明显高于IRI组和IPO 1组(p＜0.05),再灌注6h点IRI组及IPO 1组的供肝ICAM-1表达水平较IPO2组及IPO 3组明显增高(p＜0.05),但IPO 2组和IPO 3组、IRI组和IPO 1组间各指标无明显差异(p＞0.05)。光镜下HE染色见IPO 2组和IPO 3组肝组织损伤较IRI组和IPO 1组为轻。结论:缺血后处理可以对大鼠减体积肝移植术后供肝缺血-再灌注损伤提供保护作用。其机制可能与激活再灌注损伤后机体内源性抗氧化系统,抑制氧自由基生成及中性粒细胞活化粘附等有关。缺血后处理对移植肝再灌注损伤的保护作用有“节奏”的限制,只有一定的开放-阻断持续时间才能起到抗缺血-再灌注损伤的作用。第叁章缺血后处理对大鼠减体积肝移植术后肝细胞增殖的影响及其机制的初步探讨目的:观察缺血后处理对大鼠减体积肝移植术后肝细胞增殖的影响作用并初步探讨其机制。方法:雄性SD大鼠分别用作供、受体,按照第一部分的方法建立60%减体积肝移植模型,根据供肝开放门静脉灌注时是否采取30秒开放-30秒阻断反复3个循环的缺血后处理将受体大鼠分为单纯缺血.再灌注损伤组(IRI组)及缺血后处理组(IPO组),另设假手术组(SO组)。分别于供肝再灌注后2h、6h及24h处死各组动物,取新鲜肝组织检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、信号转导及转录活化因子3(STAT-3)及细胞周期蛋白D_1(CyclinD_1)的含量,免疫组织化学染色观察肝内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:供肝再灌注6h后,肝内PCNA表达明显增多,与IRI组相比,IPO组复灌后6h、24h时肝内PCNA表达强度明显增高(p＜0.05);供肝再灌注再灌注2h、6h时,IPO组肝组织TNF-αmRNA的表达明显低于IRI组(p＜0.05),到再灌注24h时,二组间肝组织TNF-αmRNA的表达无明显统计学差异(p＞0.05);再灌注2h时,IRI组及IPO组肝组织IL-6、STAT3 mRNA的表达无明显统计学差异(p＞0.05),再灌注6h、24h时,IPO组肝组织IL-6、STAT3 mRNA的表达均明显高于IRI组(p＜0.05);Cyclin D1 mRNA的表达高峰出现较晚,为再灌注后24h时点,在再灌注2h时,二组间肝组织CyclinD1 mRNA的表达无明显统计学差异(p＞0.05),但在再灌注6h、24h时,IPO组肝组织Cyclin D1 mRNA的表达均明显高于IRI组(p＜0.05)。结论:IPO可降低缺血再灌注损伤后早期细胞因子TNF—α水平的过高表达,减轻缺血再灌注损伤。IPO对大鼠减体积肝移植术后移植肝细胞的增殖有一定的促进作用,其机制可能与激活信号通路TNF-α/IL-6/STAT3进而上调IL-6及STAT3的表达有关。第四章缺血后处理对大鼠减体积肝移植术后移植肝细胞凋亡的影响目的:观察缺血后处理对大鼠减体积肝移植术后移植肝细胞凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠分别用作供、受体,按照第一部分的方法建立60%减体积肝移植模型,根据供肝开放门静脉灌注时是否采取30秒开放-30秒阻断反复3个循环的缺血后处理将受体大鼠分为单纯缺血.再灌注损伤组(IRI组)及缺血后处理组(IPO组),另设假手术组(SO组)。分别于供肝再灌注后2h、6h及24h处死各组动物,取新鲜肝组织以流式细胞仪检测肝细胞凋亡指数(AI)。结果:SO组再灌注后各时点仅见极少量肝细胞发生凋亡,IRI组及IPO组再灌注后AI值上升明显。与IRI组相比,IPO组复灌后各时点肝内AI值均明显减低(p＜0.05)。结论:IPO能够明显抑制大鼠减体积肝移植术后移植肝细胞凋亡,该机制也是IPO保护大鼠减体积移植肝缺血-再灌注损伤的重要机制之一。
刘静[4]2010年在《大鼠减体积肝移植术后肝脏再生差异蛋白及再生诱导免疫低反应性的实验研究》文中认为目的:探讨改良后的大鼠减体积肝移植模型的效果;为进一步进行大鼠减体积肝移植术后肝脏再生及免疫的研究提供重要的技术平台和前提条件。方法:1.实验大鼠均为健康的SD大鼠,体重260-280 g,供体为雌性,受体为雄性,供、受体体重相差10 g左右,一般为供体体重比受体体重轻。2.供体采用单人裸眼操作,在取肝的过程中即进行减体积操作;修肝时将套管柄置于门静脉和肝下下腔静脉的正前方,将幽门静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的左侧,即肝脏的左侧;将右肾上腺静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的右侧,即肝脏的右侧;供肝套管完成后用灌注液对门静脉和肝下下腔静脉进行冲洗;然后以左膈静脉为标识点进行7-0无损伤血管缝线吊线。3.受体切肝前采用单人裸眼操作,从新肝移植开始采用双人裸眼配合操作;供体完成胆道支撑架安置以后,受体即开始手术;肝上下腔静脉吻合时,左右固定位点采用“8”字形外翻缝合,后壁和前壁分别采用连续吻合,门静脉和肝下下腔静脉采用改良的双袖套法,胆道支撑管法建立大鼠减体积的稳定模型。4.改良的的大鼠减体积肝移植采用文献报道的方法进行,供肝在修肝盆中进行相应的肝叶切除。5.改良前和改良后两组术中和术后均观察大鼠的症状和体征、各种并发症的发生情况、术后生存情况、肝功能的变化等等。结果:1.改良后的减体积肝移植模型供体手术时间为32±2 min,修肝时间为6±2 min,受体手术时间为40±3 min,无肝期时间为14±3 min,供肝的冷保存时间为51±3min;手术的成功率为92%,术后3 d的存活率为85%,术后2周存活率为83%;术后并发症较改良前明显减少,差异有显着性(P<0.05)。2.术后1 d、3 d和7 d的肝功能ALT变化为改良后较改良前低,改良后血清ALT与同期的改良前组比较差异有显着性(P<0.05);术后第14 d和21 d,改良后血清ALT与同期的改良前组比较差异无显着性(P>0.05)。3.术后1 d、3 d和7 d的肝功能TBIL变化为改良后较改良前低,改良后血清TBIL与同期的改良前组比较差异有显着性(P<0.05);术后第14 d和21 d,改良后血清TBIL与同期的改良前组比较差异无显着性(P>0.05)。4.术后1 d、3 d和7 d的胆碱酯酶变化为改良后较改良前升高,改良后血清胆碱酯酶与同期的改良前组比较差异有显着性(P<0.05);术后第14 d和21 d,改良后血清胆碱酯酶与同期的改良前组比较差异无显着性(P>0.05)。5.术后1 d和3 d的血氨变化为改良后较改良前降低,改良后血清血氨与同期的改良前组比较差异有显着性(P<0.05);术后第7 d、14 d和21 d,改良后血清血氨与同期的改良前组比较差异无显着性(P>0.05)。结论:1.改良大鼠减体积模型采用供体灌注完成后,在切取供肝的过程中进行相应肝叶的切除;可获得高质量、满意的减体积供肝;供受体手术配合,尽量的缩短供肝的冷保存时间;改进的血管吻合技术缩短无肝期、减少术后出血;对诸多细节操作的改进等;这些可以尽量的减少大鼠减体积肝移植术中和术后的并发症,提高大鼠减体积肝移植模型的成功率和长期生存率。是一种值得推广的大鼠减体积肝移植模型。2.成功的改良大鼠减体积肝移植模型为我们下一步进行大鼠减体积肝移植术后肝脏的再生和免疫的研究提供了研究的基础和前提。目的:探讨在成功建立大鼠减体积肝移植模型的基础上;利用蛋白质组学的技术研究大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的蛋白质组学的变化,找到与肝脏再生有关的差异蛋白质。方法:1.实验大鼠供体均为健康的Lewis雌性大鼠,体重200-230 g左右;受体为均为健康的Wistar雄性大鼠,体重220-250 g左右。2.采用改良法建立Lewis-Wistar的大鼠减体积肝移植模型,供肝与受体肝之比大约50%左右。术后使用FK506抗免疫排斥药物,按照0.1 mg/kg·d服用。在肝移植术后1 d、3 d和7 d获取移植后的肝脏组织标本,供体和受体的正常肝脏组织标本在进行移植手术时获取,将标本放置在-70℃冰箱保存。3.将获取的标本进行大鼠减体积肝移植术后的蛋白质组学的检测分析。对移植后的肝脏组织与供体和受体正常肝脏组织进行比较蛋白质组学的研究,即在双向电泳的基础上进行MS-MS串联质谱分析,从而鉴定表达差异在10倍以上的蛋白质点,分析差异表达的蛋白质的功能,以及与大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的相关性等。结果:1.得到了分辨率较高、重复性较好的双向凝胶电泳图谱,以差异10倍以上为标准,共找到了72个差异蛋白质点。2.对72个差异表达的蛋白质点进行MS-MS串联质谱鉴定和肽谱指纹图分析,72个点全部鉴定出,共鉴定到40种蛋白。3.这些蛋白主要参与细胞信号转导、应激反应、氧化还原、碳水化合物代谢、能量代谢、氨基酸代谢和细胞骨架等生理过程。有些蛋白直接或者间接参与肝移植术后肝脏再生的过程。结论:1.成功建立Lewis-Wistar大鼠减体积肝移植模型。2.采用比较蛋白质组学的方法成功鉴定了72个差异蛋白质点40种蛋白。3.找到与大鼠减体积肝移植术后肝脏组织细胞再生有关的差异蛋白,这些蛋白质对大鼠减体积肝移植术后肝脏组织细胞的再生作用可能主要通过两个方面完成:一是直接促进肝脏组织细胞的再生:一是间接的促进肝脏组织细胞的再生。4.为下一步深入研究大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的机理等相关问题提供了一定的基础研究成果。目的:在成功建立大鼠减体积肝移植模型的基础上,研究减体积肝移植术后肝脏再生的一般情况,受体骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞;在肝脏再生基本完全后(大约在减体积肝移植术后第9 d),撤除抗免疫排斥药物以后观察各组排斥反应发生的情况,最终得出:减体积肝移植术后,肝脏再生诱导免疫低反应并探讨可能的机理。方法:1.实验大鼠供体均为健康的Lewis雌性大鼠,体重200-230 g左右,受体均为健康的Wistar雄性大鼠,体重240-380 g左右。2.采用改良法建立Lewis-Wistar的大鼠减体积肝移植模型,详细见第一部分模型的建立。3.实验分组(1)实验一组(A组):全肝移植组。供体和受体体重相差在10 g以内。(2)实验二组(B组):50%肝移植组。供体与受体肝脏质量比大约为50%。(3)实验叁组(C组):30%肝移植组。供体与受体肝脏质量比大约为30%。4.实验分为两个小部分(1)第一小部分:观察不同体积的大鼠肝移植术后肝脏的再生情况。术后使用FK506抗免疫排斥药物,按照0.1 mg/kg·d服用。在肝移植术后1 d、2 d和7 d获取血和移植后的肝脏组织标本,留待作相关指标的检测。(2)第二小部分:观察肝脏再生诱导免疫低反应。不同减体积肝移植术后,待肝脏再生基本完全后,同时撤除FK506,观察其叁组的排斥反应的发生情况。在撤除FK506后的0 d、3 d、7 d和11 d取血和肝脏组织标本,留待作相关指标的检测。5.移植大鼠生存状态观察和移植排斥反应的判断:大鼠术后3 d内死亡,则弃之不用,并给与补充。观察每组的生存时间,根据国际公认的Banff评分系统判断排斥反应程度。6.血清生化检测ALT、AST、TBIL;血清细胞因子检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10、TGF-β_1的水平。7.肝脏组织的ELISA检测:观察肝脏再生的IL-6和TNF-α水平;观察排斥反应TGF-β_1水平。8.肝脏组织免疫组化检测:观察肝脏再生的IL-6、TNF-α、PCNA和Ki-67。观察肝脏排斥反应的ICAM-1、NFκB/p65和TGF-β_1。9.应用原位杂交技术检测肝脏组织的Y染色体,以证实受体骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞。10.肝脏组织的HE染色、电镜和凋亡检测。观察肝脏织形态结构和排斥反应。结果:1.大鼠减体积肝移植术后肝脏再生先增快(在减体积肝移植术后第2 d最明显),后减慢,在术后第7 d,肝脏基本达到移植前受体的肝脏体积和质量。2.肝脏再生的过程中,C组中Y染色体的阳性率最高,B组次之,而A组的Y染色体的阳性率最低。3.大鼠减体积肝移植肝脏再生过程中,肝脏组织中的IL-6和TNF-α水平表现为先升高,后减低,即在术后第2 d,肝脏组织中的IL-6和TNF-α水平最高,而后降低。4.观察排斥反应时,血清中的IL-2和IFN-γ水平,A组最高,B组次之,C组最低;相反,IL-4和IL-10的水平,C组最高,B组次之,而A组最低。5.血清中的TGF-β_1表现为先升高,后降低。升高时,A组升高最快、最高,B组次之,C组升高得最慢、最低;降低时,A组降低的速度最快、降低最明显,B组次之,而A组下降最慢、减低的程度最小。肝脏组织中的TGF-β_1则表现为持续升高,以A组最为明显,B组次之,C组最低。6.肝脏组织的免疫组化ICAM-1、NFκB/p65、TGF-β_1,肝细胞凋亡以及HE染色等进一步证实了A组的组织局部的炎症反应最重,B组次之,而C组最轻。结论:1.成功建立Lewis-Wistar大鼠减体积肝移植模型。2.大鼠减体积肝移植术后肝脏再生过程中,有骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞。3.在大鼠减体积肝移植肝脏再生基本完全的基础上,撤除FK506后,C组发生的排斥反应程度最低,B组次之,而A组的排斥反应程度最重。4.大鼠减体积肝移植术后肝脏再生诱导免疫低反应的原理可能与受体骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞以及机体的多因素共同参与了肝脏的再生过程有关系。
郑梁, 杨甲梅[5]2000年在《来氟米特对减体积性肝移植后肝再生及功能的影响》文中进行了进一步梳理目的 研究新型免疫抑制剂来氟米特对大鼠减体积性肝移植后肝再生及功能的影响。方法 动物分 A,B,C3组 ,来氟米特的剂量分别为 0、2 .5、5 .0 mg·kg- 1· d- 1。动物于术后 1、3、5、7d处死。每克肝组织中蛋白质含量 ,血清 AL T及总胆红素水平 ,肝细胞分裂指数 ,肝细胞增殖细胞核抗原标记指数作为肝再生的指标。结果 B组术后 3d的每克肝组织蛋白质含量 ,肝细胞分裂指数 ,肝细胞增殖细胞核抗原标记指数均高于 A,C组 (P<0 .0 5 )。A、B、C3组 AL T,总胆红素水平无显着差异。结论 2 .5 mg·kg- 1 · d- 1 来氟米特能促进大鼠减体积性肝移植后肝再生 ,对肝功能无负面影响。
参考文献：
[1]. FK506对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响[D]. 秦建伟. 第二军医大学. 2001
[2]. 他克莫司对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响[J]. 秦建伟, 杨广顺, 杨宁, 李齐根. 第二军医大学学报. 2004
[3]. 缺血后处理对大鼠减体积肝移植术后移植肝保护作用的实验研究[D]. 牛英. 中南大学. 2008
[4]. 大鼠减体积肝移植术后肝脏再生差异蛋白及再生诱导免疫低反应性的实验研究[D]. 刘静. 昆明医学院. 2010
[5]. 来氟米特对减体积性肝移植后肝再生及功能的影响[J]. 郑梁, 杨甲梅. 肝胆外科杂志. 2000