鲍志坚, 向旭东, 邓军卫, 闫淑珍, 陈平[1]2004年在《过氧化物酶体增殖活化受体γ对支气管哮喘豚鼠气道炎症的影响》文中提出目的 探讨过氧化物酶体增殖活化受体γ (PPAR γ)和PPAR γ配体激动剂罗格列酮对支气管哮喘 (简称哮喘 )豚鼠气道炎症的影响及机制。方法 35只豚鼠按随机数字表法分为对照组(A组 )、哮喘组 (B组 )、地塞米松 (DXM)组 (C组 )、罗格列酮组 (D组 )、罗格列酮 +1/ 2DXM用量组 (E组 ) ,每组各 7只。并测定各组豚鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞计数及分类 ,观察各组豚鼠支气管肺组织病理的改变 ;采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测豚鼠肺组织中PPAR γ、还氧化酶2 (COX 2 )等的表达。结果 D组豚鼠BALF中的嗜酸粒细胞数为 0 0 5 0± 0 0 2 0 ,B组为 0 110± 0 0 2 0 ,两组比较差异有显着性 (t=5 6 1,P <0 0 0 1) ,D组豚鼠BALF中的细胞总数、中性粒细胞数分别为(15 5± 3 9)× 10 8/L、0 0 6 9± 0 0 2 0 ,B组分别为 (19 9± 4 3)× 10 8/L、0 0 76± 0 0 2 0 ,两组比较差异无显着性 (t值分别 =2 0 2、0 6 6 ,P均 >0 0 5 ) ;D组豚鼠气道壁厚度为 (2 2 0± 5 0 ) μm ,B组为 (2 8 0± 5 0 )μm ,两组比较差异有显着性 (t=2 6 1,P <0 0 5 ) ,但D组黏膜及黏膜下层厚度 [(12 2± 2 9) μm]与B组[(14 9± 3 3) μm]比较差异无显着性 (t =1 6 3,P >0 0 5 ) ;D组PPAR γmRNA的表
鲍志坚[2]2003年在《过氧化物酶体增殖活化受体—γ（PPAR—γ）对哮喘豚鼠气道炎症的影响》文中提出背景与目的 支气管哮喘是一种气道慢性非特异性炎症性疾病，许多细胞因子和炎症介质参与了这个病理生理过程，COX-2、NF-κB在其中发挥了重要的作用。糖皮质激素则可以通过多种途径减轻气道炎症。过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)是一类核激素受体，主要在T淋巴细胞、肥大细胞、巨噬细胞和支气管上皮细胞中表达，与其激动剂如罗格列酮(Rosiglitazone)结合后发挥生物学效应，如抑制或反馈抑制COX-2的活性，并抑制NF-κB、粘附分子(ICAM-1)的表达，增强糖皮质激素的靶细胞效应，从而具有抗炎效应。也有人认为PPAR-γ是一个损伤因子，与哮喘气道重塑有关。通过本实验，我们探讨PPAR-γ在哮喘豚鼠气道炎症中的表达及意义；PPAR-γ和PPAR-γ配体激动剂罗格列酮对哮喘豚鼠气道炎症的影响；了解地塞米松对PPAR-γ在气道炎症中表达的影响以及PPAR-γ配体激动剂罗格列酮能否增强地塞米松的抗哮喘气道炎症的作用。 方法31只豚鼠随机分为5组：对照组5只，哮喘组7只，罗格列酮组7只，地塞米松组(DXM组)5只，罗格列酮+1／2地塞米松组(1／2DXM组)7只。测定各组豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数及分类，观察各组豚鼠支气管肺组织病理的改变。采用RT-PCR方法检测豚鼠肺组织中PPAR-γmRNA、COX-2mRNA的表达。 结果 一、各组豚鼠BALF中的细胞总数、中性粒细胞数及嗜酸粒细胞数的变化 1)哮喘组豚鼠BALF中的细胞总数、中性粒细胞数及嗜酸粒细胞数均高于除罗格列酮组以外的其它各组(均P＜0.05)； 2）罗格列酮组豚鼠BALF中的细胞总数、中性粒细胞数均高于除哮喘组外的其它各组（均P叼．05人 嗜酸粒细胞数较哮喘组显着减低u功刀1），但较其它各组无显着性差异（P＞ 0刀5）； 3）D删组与10 组比较豚鼠B从F中细胞总数、中性粒细胞数和嗜酸粒细胞数无显着性差异（均P＞0刀5人 且上述两组各细胞数虽均高于对照组，但无显着性差异（均P＞0刀5）； 二、病理检查 1）哮喘组气道粘膜和粘膜下有大量炎症细胞浸润，粘膜充血水肿，气道壁和粘膜及粘膜下层明显增厚，且气道壁、粘膜及粘膜下层较其他各组明显增厚（均P叼刀5人 2）罗格列酮组气道壁厚度低于哮喘组u叱刀5人 与其他各组无显性着差异（均P＞0刀5人 粘膜及粘膜下层增厚高于DXM组、1o 组、对照组（均P功．05）； 3）D删组和 1亿 组气道壁和粘膜及粘膜下层厚度增厚不明显，与对照组比较无显着性差异（均P＞0刀5人 叁、豚鼠支气管肺组织 PPAR＊ W的表达 1）罗格列酮组、哮喘组豚鼠支气管肺组织 PPAR＊ IntvA的表达较低，与对照组比较无显着性差异（均P＞0刀5）； 2）DXM组和 l／ZDXM组豚鼠支气管肺组织 PPARY mRNA的表达均显着高于其它各组（均P＜0刀1人1o＊XM组豚鼠支气管肺组织＊PAR Y mxrymxvA的表达仍较＊XM组为低（P＜o．05入 3）对照组豚鼠支气管肺组织仍有少量 PPARY mRNA的表达； 四、豚鼠支气管肺组织COX《 InRNA的表达 1）哮喘组豚鼠支气管肺组织 COX上 mRNA的表达较其他各组明显升高（均P＜0刀5人 2）罗格列酮组豚鼠支气管肺组织 COX上 InRNA的表达，较哮 二I 喘组有减低r叼．05），但较 D删组和 1o 组明显升高（均 P＜O刀1）； 3）D删组和 1o 组豚鼠支气管肺组织 COX2 InRNA的 表达较哮喘组明显减低（均P＜O．01人 而两组之间＊＊＊毛 的 表达无显着性差异（P＞0刀5）； 4）对照组豚鼠支气管肺组织 COX上 mRNA无表达。 ·结论 1．罗格列酮有减轻哮喘豚鼠气道炎症效应，且与地塞米松合用 后抗炎效应更明显； 2．罗格列酮减少哮喘豚鼠气道中的嗜酸粒细胞数，这可能为其 抗炎效应的机制之一； 3．罗格列酮抑制哮喘豚鼠肺组织中 COX上 tnRNA的表达； 4．DXM明显抑制哮喘豚鼠肺组织中 COX上 InRNA的表达； 5．罗格列酮与地塞米松具有协同作用，可使地塞米松用量减半； 6．DXM能诱导PPAR寸InRNA在豚鼠肺组织中的表达； 7．PPAR1抗炎效应与激动剂和／或糖皮质激素的使用有关。
夏俊杰[3]2012年在《罗格列酮对哮喘大鼠气道平滑肌收缩的影响》文中提出目的：支气管哮喘(以下简称哮喘)是以气道高反应性为特征的慢性炎症性疾病，被世界医学界公认为四大顽症之一。其病理学改变以气道内嗜酸性粒细胞、肥大细胞、淋巴细胞和巨噬细胞浸润为主。尽管近年来对哮喘发病机制和治疗的研究取得了一定进展，但其发病率在世界范围内仍有增高的趋势，并且部分病例常规治疗效果不理想。因此，对哮喘发病机理的深入研究和寻找其他有效的治疗方法具有非常重要的意义。本文旨在通过在体和离体气管环实验探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ（Peroxiso-ome proliferator activated receptorγ，PPARγ）配体激动剂罗格列酮（Rosiglita-zone，RSG）对气道平滑肌收缩作用的影响，为其是否能应用于哮喘的临床治疗提供新的理论依据。方法：1、雄性SD大鼠75只，采用随机数字表法将其分为正常组（A组）、哮喘组（B组）、RSG组（C组），每组25只，制备各组大鼠的离体去上皮气管环分别为a、b、c组。2、哮喘大鼠模型的建立：第1d、第7d，B、C组大鼠腹腔注射10%的卵蛋白（ovalbumin，OVA）（10mg卵蛋白和100mg Al(OH)3溶解于1ml蒸馏水中）1ml致敏，A组给予等量蒸馏水腹腔注射。第14d-30d，B、C组大鼠用50ul的2mg ml-1浓度OVA滴鼻，C组大鼠在滴鼻前用4mg kg-1的盐酸罗格列酮片稀释于5ml生理盐水中灌胃治疗，B组大鼠用等量生理盐水灌胃，A组大鼠用等量生理盐水滴鼻和灌胃。3、末次激发后，每组取出5只大鼠肺组织HE染色，比较支气管粘膜和粘膜下嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润情况。4、末次激发后，测定叁组大鼠的引喘潜伏期。5、将大鼠离体气管环置于37℃装有Krebs-Henseleit液和95%O2、5%CO2的浴槽中，通过张力换能器、生物放大器与生理记录仪相连，采用Chart软件采集记录气管环张力变化（。1）比较0.05mmol L-1、0.5mmol L-1、5mmol L-1浓度梯度乙酰胆碱（Acetycho-line， ACh）激发下，叁组大鼠离体气管环收缩张力大小。（2）比较0.01mmol L-1（低浓度）、0.1mmol L-1（中浓度）、1mmol L-1（高浓度）叁种浓度RSG对ACh预收缩的a、b组离体气管环的舒张作用。（3）观察吲哚美辛、亚甲基蓝、普萘洛尔、左旋硝基精氨酸甲酯（NG-Nitro-LarginineMethyl Ester Hydrochloride， L-NAME）、伊比蝎毒素（Iberiotoxin IbTX）对RSG舒张a、b组气管环作用的影响。（4）观察0.01mmol L-1、0.1mmol L-1、1mmol L-1叁种浓度RSG对a、b组离体气管环的ACh量效曲线的影响。结果：1、肺组织HE染色：b组支气管粘膜和粘膜下嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润较其余两组增高，差异有统计学意义（均P<0.05，n=20）。2、叁组大鼠引喘潜伏期：B组＜C组＜A组，差异有统计学意义（P<0.05，n=20）。3、离体气管环试验：（1）b组大鼠离体气管环对叁种浓度ACh的反应率高于a组和c组，c组高于a组，差异均有统计学意义，（均P<0.05，n=20）。（2）叁种浓度RSG对ACh预收缩的a、b组大鼠离体气管环均有舒张作用，且呈浓度依赖性，差异有统计学意义（均P<0.05，n=20）；但a组和b组相比，叁种浓度RSG对气管环的舒张作用的差异无统计学意义（均P>0.05，n=20）。（3）吲哚美辛、L-NAME、亚甲基蓝、普萘洛尔不能阻断a组大鼠气管环RSG引起的舒张，差异无统计学意义，（均P>0.05，n=20）；L-NAME能阻断b组RSG引起的舒张，IbTX对a组和b组RSG引起的舒张均有阻断作用，且对a组的阻断作用更强，其差异有统计学意义，（均P<0.05，n=20）。（4）叁种浓度RSG使a、b组大鼠立体气管环ACh量效曲线明显右移。结论：RSG能减轻哮喘大鼠气道炎症细胞浸润；RSG能延长哮喘潜伏期；RSG能降低气道收缩张力；RSG对ACh预收缩的大鼠气管环可产生舒张作用，此作用可能与前列环素、胞浆可溶性鸟苷酸环化酶、β肾上腺素受体无关，而可能与大电导钙激活钾通道（Large-conductancecalcium-activated potassium channels，BKCa）、一氧化氮（Nitric Oxide，NO）有关；RSG使ACh收缩气道平滑肌量效曲线右移。
杨海华[4]2007年在《PPAR-γ配体激动剂对哮喘患者T淋巴细胞IL-4/STAT6信号通路的影响及机制》文中指出目的：探讨过氧化物酶体增殖活化体受体-γ(PPAR-γ)配体激动剂对哮喘患者T淋巴细胞白介素4／信号转导子和转录激活6(IL—4／STAT6)信号通路的影响及可能机制。方法：选取哮喘患者和健康对照者各10名，抽取哮喘患者外周血30mL，健康者外周10mL，分离出的PBMC，加含RPMI-1640培养基、10％胎牛血清、万分之叁谷氨酰胺、100U／mL青霉素、100U／mL链霉素和50μg／mL的PHA(简称完全培养基)，用完全培养基制成PBMC细胞悬液，贴壁培养4h(于饱和湿度、37℃、含5％CO2培养箱中培养)。然后从贴壁后的PBMC中取出悬浮的T淋巴细胞如下分组(调整细胞浓度为1×106／mL、2mL／孔)：A组：健康对照者组；B组：哮喘原液组；C组：哮喘IL-4RAb(终浓度为2.5μg／mL)组；D组：哮喘Rosiglitazone(终浓度为100mmol／ml)组；E组：哮喘IL-4 RAb(终浓度为2.5μg／mL)+Rosiglitazone(终浓度为100mmol／ml)组。其中，C组和E组先加IL-4RAb培养1小时(让IL-4RAb与IL-4R充分结合而阻断IL-4与IL-4R结合)；再将Rosiglitazone加入D组和E组培养。然后上述各组细胞在培养箱中再培养48h。每组分别同时都用完全培养基作空白对照。培养结束后用ELISA法测定T淋巴细胞培养上清液IL-4浓度，用Western blot法检测T淋巴细胞内STAT6磷酸化表达水平。用SPSS12.0统计软件进行统计分析，测定值采用均数±标准差((?)±s)表示。在方差齐性基础上，α=0.05，双侧P≤0.05有统计学意义。结果：1 ELISA结果：(1)空白对照完全培养基未检出IL-4；(2)A组与B组T淋巴细胞培养上清液中的IL-4水平比较：A组＜B组(P＜0.01)；(3)哮喘组内T淋巴细胞培养上清液中的IL-4水平比较：B组＞C组＞D组＞E组(P均＜0.01)。2 Western blot检验结果：(1)A组与B组T淋巴细胞STAT6磷酸化水平比较：A组＜B组(P＜0.01)；(2)哮喘组内T淋巴细胞STAT6磷酸化水平比较：B组＞C组＞D组＞E组(P均＜0.01)。3直线相关分析：哮喘对照组(B组)T淋巴细胞培养上清液中的IL-4水平与T淋巴细胞STAT6磷酸化水平成正相关(r=0.86，P＜0.01)。结论1哮喘患者T淋巴细胞分泌的IL-4水平及T淋巴细胞的STAT6磷酸化表达平均高于健康者；2哮喘T淋巴细胞通过增加分泌的IL-4而促进T淋巴细胞STAT6磷酸化的表达；3 Rosiglitazone和IL-4R Ab均能降低哮喘患者T淋巴细胞分泌IL-4和T淋巴细胞STAT6磷酸化的表达；4 Rosiglitazon除了可以通过减少T淋巴细胞分泌IL-4途径而降低T淋巴细胞STAT6磷酸化表达水平外，还可通过其它方式降低T淋巴细胞STAT6磷酸化的表达水平。
杜芳宇[5]2014年在《吡格列酮对哮喘小鼠肺组织GABAARα及MUC5AC表达的影响》文中指出背景及目的近年来随着环境的日益恶化，支气管哮喘的发病率以每10年增加50%的速度持续上升，每年因哮喘死亡的人数达到250000以上。哮喘的发病原因众多且相互联系，主要涉及个人因素及环境因素，例如：基因、性别、感染、环境污染、饮食及肥胖等。其发病机制并未完全阐明，现认为炎症、重构及黏液高分泌是支气管哮喘的重要病理表现。目前糖皮质激素是治疗哮喘最有效的药物，但糖皮质激素的副作用限制了其广泛使用。吡格列酮是过氧化物酶体增殖物活化受体γ（peroxisome proliferators–activated receptors γ,PPARγ）激动剂，PPARγ作为调节糖代谢及脂类的转录因子与2型糖尿病、脂肪肝、动脉粥样硬化及肿瘤等慢性疾病的发生密切相关，其还具有显着地免疫调节、广泛的抗炎及调节缺血反应的作用。研究表明PPARγ激动剂除可以显著的减少促炎细胞因子（IL－6及IL-1β等）的产生外，还可抑制哮喘模型小鼠肺嗜酸粒细胞及气道高反应性。提示吡格列酮对哮喘治疗有一定作用，但其作用机制有待进一步研究。A型γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid receptor, GABAAR）属受体门控离子受体超家族，α亚单位在GABAAR形成和功能中起重要作用。大量实验显示GABA合成酶和GABAAR能够表达于气道上皮细胞，进而组成了一个GABA系统，且哮喘时表达增强伴有黏液过度分泌。MUC5AC由气道杯状细胞分泌，反应了气道黏液分泌的情况。本实验通过观察哮喘小鼠肺组织中的GABAARα、MUC5AC的表达水平及吡格列酮干预后的改变，初步探讨吡格列酮、GABAARα、MUC5AC之间的关系并藉此希望为哮喘的早期干预治疗提供理论依据。材料方法按随机数字表法，把30只（6~8周龄）清洁级雌性BALB/C小鼠分为3组：正常对照组、哮喘模型组和吡格列酮干预组，各组均10只。实验的第1天、第8天，哮喘组及吡格列酮干预组小鼠腹腔注射(OVA)/Al(OH)3(含Al(OH)35mg和OVA50ug)混合液0.2ml致敏，从实验第21天起以20g/L OVA超声雾化吸入30min/d激发，连续7d。吡格列酮干预组于雾化OVA前30min雾化吸入吡格列酮（5×10-5mol/L）。正常对照组小鼠的致敏液以及雾化激发均以0.9%的氯化钠代替OVA。末次激发后24h，体积分数5%的水合氯醛400mg/kg麻醉小鼠，打开胸腔，结扎右肺门根部，生理盐水0.3ml行左肺支气管肺泡灌洗，共3次，合并得支气管肺泡灌洗液（BALF）。灌洗液离心后行肺泡灌洗液细胞分类计数，取右肺组织浸入体积分数10%中性甲醛中固定，经脱水、包埋制成蜡块，切片后部分行HE染色，部分用于免疫组化检测MUC5AC、GABAARα蛋白的表达水平。切取左肺叶迅速放入液氮中，速冻后转移至－80℃冰箱中用于RT-PCR（逆转录-聚合酶链反应法）检测MUC5AC、GABAARα mRNA的表达水平。所有实验数据使用SPSS20.0软件进行统计分析。实验结果1各组小鼠症状比较：哮喘组小鼠在激发过程中出现打喷嚏、搔鼻、安静少动、点头样喘息等典型的哮喘症状：吡格列酮干预组上述症状与哮喘组相比较，症状稍轻；正常对照组未见明显异常症状。2各组小鼠BALF细胞总数和嗜酸性粒细胞数：正常对照组小鼠、哮喘组小鼠、吡格列酮干预组的BALF中细胞总数分别为：(6.50±0.04)×109/L、（12.48±0.09）×109/L、（6.69±0.04）×109/L；各组哮喘小鼠模型中BALF中嗜酸性粒细胞数为：（0.05±0.01）×109/L、（1.32±0.09）×109/L、（0.08±0.01）×109/L。3各组小鼠肺组织病理观察：肺组织HE染色显示对照组小鼠气道黏膜上皮正常，气道周围未见炎性细胞浸润，肺泡壁结构未见破坏；哮喘组模型小鼠结构破坏明显，气道黏膜不完整，可见上皮局部脱落，黏膜下可见充血水肿，黏膜层较正常对照组小鼠增厚，支气管壁及血管壁周围有较多炎症细胞浸润；吡格列酮干预组黏膜上皮相对完整，黏膜下充血水肿、气道壁增厚及炎症细胞浸润较哮喘组减轻。4各组小鼠肺组织中GABAARα、MUC5AC蛋白的表达：免疫组化法检测肺组织中MUC5AC阳性染色仅见于支气管上皮细胞，表现为胞浆内棕褐色颗粒，GABAARα蛋白大都表达于气道上皮，阳性表达产物定位于细胞膜。3组小鼠肺组织均有一定程度的GABAARα、MUC5AC表达。哮喘组肺组织中GABAARα、MUC5AC蛋白表达强于吡格列酮干预组(P均<0.05)，且二者都高于对照组(P均<0.05)。5各组小鼠肺组织中GABAARα mRNA、MUC5AC mRNA的表达：RT-RCR（逆转录-聚合酶链反应）结果显示哮喘组小鼠肺组织GABAARα mRNA、MUC5ACmRNA表达量均强于吡格列酮干预组(P均<0.05)，且两者都高于对照组(P均<0.05)。结论1哮喘模型小鼠肺组织中GABAARα、MUC5AC表达增加，提示GABAARα可能与哮喘密切相关且可能与黏液过度分泌有关。2吡格列酮干预组可以降低哮喘小鼠肺组织中GABAARα、MUC5AC表达，提示吡格列酮可能通过下调GABAARα的表达在哮喘气道黏液过度分泌中起治疗作用。
黄玲, 夏俊杰, 熊瑛, 王开绿, 邱宇[6]2013年在《罗格列酮对哮喘大鼠引哮喘发作潜伏期的影响》文中指出目的观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(RSG)对支气管哮喘(哮喘)大鼠气道哮喘发作潜伏期的影响。方法 SD大鼠75只,分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、RSG治疗组(C组),每组25只。制备各组大鼠体外去上皮气管环,比较在0.05mmol·L-1、0.5mmol·L-1、5.0mmol·L-1浓度梯度乙酰胆碱(ACh)激发下,各组大鼠体外气管环收缩张力大小。观察叁种浓度0.01mmol·L-1、0.1mmol·L-1、1.0mmol·L-1RSG对A、B两组大鼠体外气管环的ACh量效曲线的影响,比较各组大鼠引喘潜伏期差异。结果叁组大鼠引喘潜伏期分别为A组(121.50±17.44)s,B组(61.50±17.68)s,C组(94.40±21.17)s,差异有统计学意义(P<0.05,n=20)。叁组大鼠气管环对叁种浓度ACh的反应率,B>C>A组,差异有统计学意义(P<0.05,n=20)。RSG可引起A、B两组大鼠体外气管环ACh量效曲线右移。结论 RSG可延长哮喘发作潜伏期,降低气道收缩张力,可能具有减轻气道高反应性、减少哮喘发作的作用。
参考文献：
[1]. 过氧化物酶体增殖活化受体γ对支气管哮喘豚鼠气道炎症的影响[J]. 鲍志坚, 向旭东, 邓军卫, 闫淑珍, 陈平. 中华结核和呼吸杂志. 2004
[2]. 过氧化物酶体增殖活化受体—γ（PPAR—γ）对哮喘豚鼠气道炎症的影响[D]. 鲍志坚. 中南大学. 2003
[3]. 罗格列酮对哮喘大鼠气道平滑肌收缩的影响[D]. 夏俊杰. 泸州医学院. 2012
[4]. PPAR-γ配体激动剂对哮喘患者T淋巴细胞IL-4/STAT6信号通路的影响及机制[D]. 杨海华. 中南大学. 2007
[5]. 吡格列酮对哮喘小鼠肺组织GABAARα及MUC5AC表达的影响[D]. 杜芳宇. 郑州大学. 2014
[6]. 罗格列酮对哮喘大鼠引哮喘发作潜伏期的影响[J]. 黄玲, 夏俊杰, 熊瑛, 王开绿, 邱宇. 中华肺部疾病杂志(电子版). 2013
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