长沙市中心医院 湖南长沙 410000
【摘 要】目的：分析立体定向神经干细胞移植方法治疗大鼠脑出血后遗症的临床效果。方法：选取74例同品种的健康大鼠作为研究对象，随机分为观察组与对照组各37例后，对照组予以生理盐水注入，观察组则予以事先配置好的神经干细胞液注射，比较两组的症状改善率与临床效果。结果：观察组的衡量行走功能与肢体改善率均显著优于对照组，组间对比差异显著（=5.26，6.14；P＜0.05）；且观察组的神经功能评分为（5.43±2.10）分，显著低于对照组，组间差异具统计学意义（t=8.591，P＜0.05），组间对比差异显著。（P均＜0.05）。结论：立体定向神经干细胞移植治疗大鼠脑出血后遗症疗效确切，这一方法在人体有关疾病临床救治中的效果仍不明确，需进一步深入探讨其可行性。
【关键词】立体定向；神经干细胞移植；脑出血后遗症；临床疗效
临床经验显示，多数脑出血患者的预后不佳，普遍伴随有不同程度的后遗症，包括肢体活动障碍、语言障碍或植物人状态等，给患者及家庭带来严重负担。既往经验显示，采用康复疗法为主的治疗方案可在一定程度上改善脑出血后遗症患者的临床症状，但疗效不甚满意。本研究立足于动物实验，通过将标记后的鼠胎神经干细胞注入脑出血动物模型，研究神经干细胞移植对于脑出血后遗症的影响与，旨在为临床治疗工作提供参考，具体内容整理后汇报如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取健康、同品种大鼠74例作为研究对象，均按照文献要求经颈动脉注入VII型胶原酶，诱导其形成脑出血动物模型。随机分为观察组与对照组各37只，观察组大鼠中雌性21例，雄性16例，平均日龄（18.29±4.38）d；对照组中雌性23例，雄性14例，平均日龄（19.67±5.18）d。两组大鼠经脑CT检查均确诊为脑出血，两组的健康状况、日龄等基线资料经统计学处理后均未发现显著差异（P＞0.05），可进行观察比较。
1.2 方法
1.2.1 神经干细胞制备方法
取孕龄为13-15d的同品种胎鼠，在显微镜视野下取出其大脑皮层组织，将0.25%胰蛋白酶与0.02%EDTA按照1：1配置后，在溶液中放入大脑皮层组织，并轻敲吸管，使组织块分散形成单个细胞或较小细胞团状态；离心并对沉淀物进行洗涤后加入神经干细胞完全培养液，进行神经干细胞原代培养。
1.2.2 实验方法
观察组：术前禁食12h，禁水6h，使大鼠以俯卧位固定于动物头颅立体定位仪，固定完毕后调整仪器使前后囱维持在同一平面；头部背侧剃毛并消毒，于头皮正中行1cm切口，调整立体定向仪至恰当位置，使用微型电钻钻透颅骨但不对脑组织产生损失那个；用微量注射泵向尾状核内注入0.14U胶原酶，控制注射时间不低于5min；注射完成后缓慢出针并封闭骨孔，对刀口进行常规缝合消毒后将大鼠放入暖箱内自由活动。
对照组以生理盐水代替胶原酶，其他操作同观察组。
1.3 观察指标
根据以下项目进行效果评价：①自发性同侧旋转，以0级为无旋转，4级表示存在连续的自主旋转行为；②后肢回缩实验：将后肢置于后侧方约2cm处，后肢可立即缩回判定为0级，无缩回则为4级；③横梁行走：在经过3-4d训练后指导大鼠爬过横梁进入暗箱，以顺利通过且未掉落为0级，无法移动则为4级；④前肢抓持功能：指导大鼠用前爪抓持直径为2mm的钢杆，若能正常抓持为0级，无法使用前肢完成抓持为4级。
据此统计两组大鼠的神经功能评分（满分16分）。
同时调查两组的症状改善率。以能够顺利通过横梁且不掉落为横梁行走功能改善，以后肢缩回实验＜2级，前肢抓持实验≤2级为肢体功能改善。
1.4 统计学方法
所有数据统计无误后进行汇总并输入计算机，采用SPSS17.0作为统计学分析软件，计数资料采用构成比（%）表示，行卡方检验，计量资料以均数±标准差表示，行t检验，以P＜0.05为差异具统计学意义。
2 结果
2.1 两组的症状改善率比较
观察组的症状改善率较对照组更高，组间对比差异显著（P＜0.05），如表1：
3 讨论
脑出血会对患者的工作与生活能力产生严重不利影响，患者的病情康复主要受脑组织与血管病变能否恢复良好以及中枢神经系统可塑性的恢复等因素影响。近年来立足于动物实验，有学者指出脑内移植神经干细胞有利于提升脑出血后遗症的临床疗效[3]，其理论基础主要为：神经干细胞在体外研究中表现出神经营养因子分泌作用，能够促进神经干细胞活化与细胞轴突的增长；另一方面，神经干细胞可分化为神经细胞，并成功建立起与受体神经细胞间的突触联系，发挥替代功能。而在神经干细胞移植方式上也存在静脉注射与经脑室注射等多种方法。本研究立足于前人的动物实验基础上，分析神经干细胞移植对于脑出血后遗症的影响，结果显示，观察组大鼠在接受立体定向神经干细胞移植处理后，其症状改善率与神经功能均显著优于对照组，组间对比差异显著（P均＜0.05）。经颅直接将神经干细胞移植入脑内核团，能够使干细胞直接在功能区大量聚集[4]，并在基底节附近增殖迁移，参与到周围功能区的重建过程中，利于病情康复。该结果与周静等[5]的研究结论相一致，提示立体定向神经干细胞移植对于脑出血后遗症大鼠而言有确切效果，可改善临床症状，促进神经功能重建，对于人脑出血后遗症的临床治疗有积极指导意义。
参考文献：
[1]刘士东，宁佩佩，张庆华等.胚胎神经干细胞移植治疗脑出血后遗症疗效观察[J].医学综述，2011，17（12）：1908-1909.
[2]何芳，叶路.神经干细胞移植治疗脑出血后遗症2例分析[J].中国误诊学杂志，2011，11（36）：8979.
[3]何芳，张燕华，辜丽江等.神经干细胞移植治疗脑出血后遗症二例[J].国际移植与血液净化杂志，2010，8（3）：49.
[4]袁进国，冯斌，曹藏柱等.脐带间充质干细胞移植并康复治疗脑出血后遗症1年随访[J].中国组织工程研究，2012，16（14）：2656-2660.
[5]周静，吕文红.高压氧配合神经干细胞移植对脑出血患者功能恢复的影响[J].中国临床研究，2010，23（10）：863-864.
论文作者:周庆
论文发表刊物:《航空军医》2015年12期供稿
论文发表时间:2015/12/24
标签：干细胞论文; 脑出血论文; 神经论文; 后遗症论文; 大鼠论文; 对照组论文; 后肢论文; 《航空军医》2015年12期供稿论文;