[ 摘 要] 目的：研究天花粉蛋白对人宫颈癌细胞增殖与细胞调亡的临床疗效与意义，以期发现抑制宫颈癌发展的有效新药物， 为推广天花粉蛋白对宫颈癌治疗奠定科学基础。方法：取若干处于对数生长期的人宫颈癌细胞，使用天花粉蛋白进行处理，通过观察 其形态、测定MTT 细胞的活力及使用DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞分析仪分析等方法，检测人宫颈癌细胞的增殖及凋亡情 况。结果：天花粉蛋白在体外作用48小时后即对人宫颈癌细胞增殖产生抑制作用，且在20-120ug/ml的浓度范围里，天花粉蛋白对人 宫颈癌细胞增殖的抑制率随药物浓度及作用时间的增加而逐渐增大。结论：天花粉蛋白对人宫颈癌细胞的生长具有明显的抑制作用。
[ 关键词] 天花粉蛋白；人宫颈癌；细胞增殖；细胞凋亡
[ 中图分类号] R329.2+1 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1004-1620（2015）10-034-02
近年来，有研究表明天花粉蛋白对麻疹、HIV 等病毒具有 明显抑制作用，在体外作用也对肝癌、胃癌等具有不同程度的 抑制效果。本文研究天花粉蛋白对人宫颈癌细胞增殖的抑制作 用及诱导细胞凋亡效应，为使用天花粉蛋白治疗宫颈癌提供科 学依据。
1. 材料及方法
1.1 实验材料、试剂及设备
1.1.1 材料与试剂
人宫颈癌细胞株（上海通派生物科技有限公司），天花粉 蛋白（上海金山制药厂），胎牛血清（FBS）及MEM 培养基 （均为美国Gibcol 公司生产），台盼蓝（北京化工厂），琼脂糖 （北京普瑞因生物色谱技术有限公司），噻唑蓝（MTT）（上海 源叶生物产品），二甲基亚砜（DMSO）（无锡优利森化工产品 有限公司）。
1.1.2 主要设备
恒温孵箱：北京福意电器有限公司提供；尼康EclipseTi 倒 置显微镜；贝克曼CytoFLEX 流式细胞仪；电泳仪：铂悦仪器 （上海）有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 细胞培养
将人宫颈癌细胞由液氮中取出，立刻放入到37℃的水中， 解冻后离心处理，将上清弃置，加入新鲜培养基，放入CO2 含 量5%、温度37℃的恒温孵箱。
1.2.2 细胞形态观察 以不同浓度（0、10、20、40、60、80、100、120ug/ml） 的天花粉蛋白对上述培养获得的人宫颈癌细胞进行处理，使用 倒置显微镜观察细胞形态的变化，并观察细胞膜、细胞液和细 胞核的变化情况。
1.2.3 天花粉蛋白对人宫颈癌细胞增殖的影响 将处于对数生长期的人宫颈癌细胞铺于培养板，分别加入 不同天花粉蛋白浓度的培养基中，分别在24 小时、48 小时、72 小时后取各培养基中的细胞，用0.5% 的台盼蓝进行染色，使用 计数板在倒置显微镜下计活细胞数。
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1.2.4 噻唑蓝（MTT）法检测天花粉蛋白对人宫颈癌细胞增 殖的抑制作用 取处于对数生长期的人宫颈癌细胞制成单细胞悬液，以 3×104/ 孔的浓度铺于96 孔培养板，分别加入不同天花粉蛋白 浓度的培养基中，各个浓度均6 个复孔，放入CO2 含量5%、温 度37℃的恒温孵箱培养，分别在24 小时、48 小时、72 小时后 取各培养基中的细胞，弃置孔内培养基后每孔加入浓度为6mg/ ml 的噻唑蓝（MTT）30μl，继续于37℃的恒温孵箱中培养4 小 时，弃培养基后每孔加入300μl 的二甲基亚砜（DMSO），即刻 用微量搅拌器震荡5min，使用酶标仪测定其OD 值。
1.2.5 DNA 琼脂糖凝胶电泳分析 取0ug/ml（空白对照）、20ug/ml、40ug/ml和80ug/ml天花粉 蛋白浓度培养48小时的人宫颈癌细胞，分别提取DNA进行1.5% 琼脂糖凝胶上样，75V电压电泳两小时，使用紫外灯观察结果。
1.2.6 流式细胞仪分析 取0ug/ml（空白对照）、20ug/ml、40ug/ml 和80ug/ml 天花粉 蛋白浓度培养48 小时的人宫颈癌细胞，用4℃、75% 浓度酒精 固定，加入PI 进行荧光染色，尼龙网过滤后使用流式细胞仪进 行检测。
2. 结果
2.1 人宫颈癌细胞的形态变化
天花粉蛋白浓度为0（即正常培养）的人宫颈癌细胞呈现 为多角形或者梭形，牢固贴壁生长。经天花粉蛋白处理的细胞 则逐渐变圆滑，细胞体积逐步缩小，细胞液凝缩，细胞膜仍完 整但有起泡现象；天花粉蛋白的浓度达到20ug/ml 以上、作用 时间48 小时后，有部分细胞缩成悬浮细胞，随着天花粉蛋白浓 度升高、作用时间增长，悬浮细胞逐渐增多；当天花粉蛋白浓 度超过120ug/ml 时，出现死亡细胞。
2.2 噻唑蓝（MTT）检测结果
经过不同浓度的天花粉蛋白处理的人宫颈癌细胞，使用 MTT法测定其OD 值，结果显示人宫颈癌细胞OD 值随着天花粉 蛋白浓度升高而逐步减小，说明了随着药物浓度升高，天花粉 蛋白对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用增强。
2.3 DNA 琼脂糖凝胶电泳结果
琼脂糖凝胶电泳结果显示，天花粉蛋白浓度为0ug/ml（空 白对照）的人宫颈癌细胞DNA 未出现断裂现象，使用20ug/ml、 40ug/ml 和80ug/ml 天花粉蛋白浓度培养的人宫颈癌细胞DNA 均 断裂成长度等差的片段。
2.4 流式细胞仪分析结果
细胞流式分析结果显示，使用20ug/ml、40ug/ml 和80ug/ml 天花粉蛋白浓度培养的人宫颈癌细胞均出现不同比例的凋亡， 且随着天花粉蛋白浓度升高、作用时间增长，细胞凋亡比例越 大；相比之下，天花粉蛋白浓度为0ug/ml（空白对照）的人宫 颈癌细胞未出现明显凋亡，表明天花粉蛋白对人宫颈癌细胞有 诱导凋亡作用。
3. 结果
综上所述，天花粉蛋白可以诱导人宫颈癌细胞凋亡，从 而抑制细胞的生长。天花粉蛋白浓度在20-120ug/ml 范围内时， 作用达48小时即对人宫颈癌细胞生长具有明显抑制作用，且随 着天花粉蛋白浓度的升高和作用时间的延长，其抑制生长及诱 导凋亡作用逐渐增强。
参考文献：
［1］庄静，孙伟国，汪丛丛等. 天花粉蛋白对肺癌A549细 胞JNK、Bcl-2 蛋白表达的影响[J]. 中医杂志，2014，55（21）： 1864-1866.
［2］黄益玲，黄利鸣，惠燕等. 天花粉蛋白抑制HeLa细胞 增殖的实验研究［J］. 时珍国医国药，2007，18（2）：280.
论文作者:谢淑敏
论文发表刊物:《健康文摘》2015年第9卷第10期供稿
论文发表时间:2015/11/23
标签：天花粉论文; 癌细胞论文; 蛋白论文; 宫颈论文; 浓度论文; 细胞论文; 的人论文; 《健康文摘》2015年第9卷第10期供稿论文;