（浙江大学医学院附属第四医院 浙江 义乌 322000）
摘要：目的：寻找冰冻制片的理想固定方法，以解决冰冻切片时存在的细胞收缩、胶质脱落等现象。方法：收集新鲜活体组织，取材冷冻包埋后，经恒温式冰冻切片机切片，以7种固定液分别进行短时间固定，HE染色后比较镜下观察效果。结果：经乙醚酒精固定的组织细胞收缩较小，染色质清晰，核浆色彩鲜明。结论：乙醚酒精是组织快速冰冻切片的最佳固定液之一。
美键词：甲状腺；冰冻切片；固定；乙醚酒精液
冷冻切片是快速将组织冷冻成一定的硬度，切除薄片的过程。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。优良的冷冻切片是术中冰冻的快速诊断的保证，而冷冻切片受很多因素影响，其中固定是冰冻制片的关键步骤之一。于此我们通过7种不同的固定液短时间固定HE染色的比较，探讨不同固定液对冰冻制片的影响。
1 资料与方法
1.1材料 选自浙大附属第四医院病理科手术切除的新鲜标本20例，包括甲状腺、乳腺、肺、子宫等组织。
1.2固定液 7种不同的固定液分别为：甲醇、甲醇醋酸液（甲醇50ml、冰醋酸2.5ml）、乙醚酒精（乙醚：酒精1:1）、95%酒精、95%乙醇乙酸液（97ml95%乙醇+3ml乙酸）、丙酮、10%中性福尔马林。
1.3方法
1.3.1 取材 取材大小为1.5cm*1.5cm，厚2-3mm的新鲜组织，用普通胶水包埋后，放入液氮中速冻10-15s。
1.3.2 切片 将冷冻过的组织放入恒温切片机内（温度-14 ~ -25℃）1-2min后切片，每例7张，厚度6-7um，切片后立即放入上述各固定液中固定0.5-1min。
1.3.3 HE染色 将固定过的切片用自来水水洗、苏木素3min、自来水水洗、促蓝夜蓝化30s、伊红5-10s、75%酒精15s、95%酒精Ⅰ15s、95%酒精Ⅱ15s、无水乙醇Ⅰ15s、无水乙醇Ⅱ15s、二甲苯Ⅰ15s、二甲苯Ⅱ15s，中性树胶封固。
2结果
在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情况。结果见表1。
从显微镜下观察结果显示，经乙醚酒精固定后的冰冻切片，细胞染色鲜艳，组织结构清晰，细胞基本无收缩，核浆对比鲜明。甲醇与甲醇醋酸液固定的冰冻切片结果基本上无明显差别，与乙醚酒精对比，质量上稍次之。95%乙醇乙酸液和95%酒精固定的冰冻切片，除细胞收缩比较明显之外，组织清晰度与细胞染色均尚可。丙酮固定的切片，组织清晰度稍差，细胞染色及核浆对比均较差，细胞严重收缩。10%中性福尔马林固定的冰冻切片组织清晰度、细胞核染色、核浆对比均很差，细胞收缩比丙酮固定的更为明显。
3讨论
保持组织学形态是制作冰冻切片的关键，固定是将采取的活体组织置于化学性溶媒(固定液)中，使其不发生自溶与腐败，保持被采取时的形态⑴。在本实验中，甲醇、乙醇、甲醛、丙酮对组织均有固定作用。10%中性福尔马林固定的冰冻切片组织清晰度、细胞核染色、核浆对比均很差，细胞收缩较丙酮固定更为明显。丙酮固定液可使蛋白质沉淀，渗透力强，但对核的固定差，细胞严重收缩，核浆着色差。95%乙醇渗透能力强，但组织表层固缩，组织收缩显著、变硬，并有形态学的改变；可溶解脂肪和类脂质，也可溶解红细胞；核蛋白被沉淀后仍能溶于水，因此核的着色不良⑵。95%乙醇乙酸液和95%酒精固定效果尚可，细胞染色及组织清晰度均还可以，但细胞有明显的收缩。甲醇与甲醇醋酸液固定的组织，细胞有轻度的收缩，组织清晰度、细胞核染色、核浆对比均良好。乙醚酒精固定液渗透能力强，固定效果良好，能基本保持正常的细胞形态，且组织结构清晰，细胞核染色良好，核浆对比鲜明，是一种较为理想的冰冻切片快速固定液。
参考文献:
⑴和瑞芝。病理学[M]．第4版．北京：人民卫生出版社，2001.80.
⑵高美钦，黄雄飞，肖志芸等。不同固定液对冷冻切片HE染色结果的比较[J]。福建医科大学学报，2001，35(4)：367．
论文作者:樊秋红
论文发表刊物:《医师在线》2017年7月上第13期
论文发表时间:2017/10/27
标签：切片论文; 冰冻论文; 组织论文; 细胞论文; 酒精论文; 乙醚论文; 甲醇论文; 《医师在线》2017年7月上第13期论文;