刘芯宇[1]2006年在《L-选择蛋白与小鼠肝癌细胞Hepal-6淋巴道转移潜能的相关性》文中研究表明选择蛋白(Selectin)是一类和白细胞的运行密切相关的C类动物凝集素家族。包括E-、P-、L-选择蛋白叁个成员,它们是分别存在于激活的血管内皮细胞表面、血小板和白细胞表面的黏附分子,其表达有严格的细胞特异性。其中L-选择蛋白在大部分白细胞表面持续表达。L-Selectin为Ⅰ型跨膜糖蛋白,其N-末端的C型凝集素样结构域,又称糖识别域,以及表皮生长因子样结构域与其生物学功能密切相关。L-Selectin在循环系统发挥重要作用,如淋巴细胞的“归巢”,炎症反应中炎症细胞的聚集和渗出等。肿瘤的淋巴道转移和淋巴细胞的“归巢”现象有相似之处。此外,新近发现,甘露糖受体(mannose receptor, MR)作为新发现的L-Selectin受体可能与肿瘤的淋巴道转移相关。MR表达在淋巴管内皮上,它通过与淋巴细胞表面的L-Selectin相互识别而介导淋巴细胞黏附在淋巴管内皮上。可以设想,如果在肿瘤内的淋巴管内皮上有MR的表达,那么MR就可能介导肿瘤细胞黏附在淋巴内皮上。但是关于肿瘤细胞的黏附特性和转移能力之间的关系还缺乏大量的实验来检测。实验目的:本文选取小鼠肝癌细胞Hepa1-6为研究对象,通过L-选择蛋白与小鼠淋巴结体外黏附实验,分析L-选择蛋白与肿瘤淋巴道转移间的相关性;并检测L-选择蛋白与甘露糖受体(MR)的体外黏附,分析L-选择蛋白与其配体-甘露糖受体(MR)间相互作用对肿瘤细胞转移能力的影响等。实验方法:构建含有L-选择蛋白的重组载体pcDNA3后转染小鼠肝癌细胞Hepa1-6,筛选获得稳定表达L-选择蛋白的细胞株。采用免疫组化、免疫荧光、RT-PCR、流式细胞技术等,辅之以体外黏附实验分析肝癌细胞Hepa1-6表面L-选择蛋白的表达情况、L-选择蛋白与其配体-甘露糖受体(MR)间相互作用对肿瘤细胞转移能力的影响等,从而深
刘敏[2]2003年在《L-选择蛋白与小鼠肝癌细胞HCa-F淋巴道转移潜能的相关性》文中提出肿瘤、糖尿病和心脑血管疾病是威胁人类健康的叁大杀手，位列导致人类死亡疾病的前叁位，其中，又以肿瘤性疾病的治愈率最低、平均生存时间最短，严重影响病人的生存质量。而肿瘤性疾病恶性程度的高低，主要是由其转移性决定的。众所周知，良性肿瘤不发生转移。可手术切除治愈(除非其生长于特殊的部位，如神经胶质细胞瘤)；恶性肿瘤常可发生远隔转移，不易治愈，最终导致患者产生溃疡、出血、穿孔、恶病质等一系列症状，最终导致死亡。因此，有关肿瘤转移发生的机制日益引起人们的关注。 肿瘤的远隔转移是一个复杂的、受多因素影响的多步骤过程，大体可描述为肿瘤细胞从原发瘤部位脱落、分泌水解酶水解细胞外基质及基底膜、进入血循环或淋巴循环、粘附于血管或淋巴管的某一部位，最终穿透该处的管壁屏障并在原发瘤的远处定植。其中，肿瘤细胞与血管或淋巴管壁的粘附是肿瘤转移过程中的一个关键环节。而肿瘤细胞通过淋巴道的转移往往先于血道转移的发生，且转移至淋巴结的肿瘤细胞可成为后继发生血道转移的“桥头堡”，因此，对于肿瘤淋巴道转移发生机制的研究又成为重中之重。 在肿瘤转移过程中，肿瘤细胞移动速度减缓，从轴流进入边流，进而在内皮细胞表面滚动，以利于其粘附与渗出。整个过程类似于白细胞在炎症局部的聚集与滚动。在这一过程中至少存在两种类型的细胞间相互作用，有可能是由不同的细胞粘附分子介导，选择蛋白便是其中的一类粘附分子。 选择蛋白(Selectin)是一类和白细胞的运行密切相关的C类动物凝集素家族，包括E-、P-和L-选择蛋白叁个成员，它们是分别存在于激活的血管内皮细胞表面、血小板和白细胞表面的黏附分子，其表达有严格的细胞特异性，其中，L-选择蛋白在大部分白细胞表面持续表达，是淋巴细胞“归巢”(homing)的受体。2003年，Olga D.Genbacev等人的工作证实，L-选择蛋白在人类胚泡表面表达，而子宫内膜则有L-选择蛋白的配体表达，由此可见L-选择蛋白可介导人类胚泡的着床过程。 肿瘤的淋巴道转移与淋巴细胞“归巢”现象有相似之处，加之己发现的下列现象，不妨推测L一选择蛋白在肿瘤淋巴道转移中亦起到关键的作用:在T细胞杂交瘤中，那些专一性向周围淋巴结转移的肿瘤细胞表面有强的L一选择蛋白表达;在1卜何杰金淋巴瘤中，肿瘤细胞向淋巴结的扩散被认为是肿瘤细胞扩散的重要环节，而在淋巴结中定植的非何杰金淋巴瘤细胞表面经常有L一选择蛋白的表达，那些优先在周围组织中定植的淋巴瘤表面则少有L选择蛋白的表达。Fawn Qian等人证实L一选择蛋白可协助肿瘤细胞经淋巴结转移:用胰岛素启动子调控猴病毒40T抗原表达的转基因鼠可产生特异性向肝脏转移的胰岛B细胞瘤，但无淋巴结转移;而在胰岛素启动子调控之下同时表达猴病毒40T抗原(T)和L一选择蛋白(L)的转基因鼠则可产生特异性向周围淋巴结转移的胰岛B细胞瘤，且这种转移可被抗L一选择蛋白的抗体所阻断。但AviramR等人的报导指出，抗L一选择蛋白的抗体MEL一14并未阻断表达L一选择蛋白的小鼠淋巴瘤38C一13细胞向周围淋巴节的扩散。因此，L一选择蛋白在肿瘤转移中的作用还需要进一步的实验探讨。 HCa细胞是由我校凌茂英教授等从远交系Knl小鼠腹水型肝癌细胞株H二中筛选而出，具有特异性经淋巴道转移的能力，其中高转移株HCa一F细胞接种于615小鼠足热后有高于80%的淋巴道转移力，而低转移株HCa一P细胞的淋巴结转移率则低J几30%，是研究肿瘤经淋巴道转移机理的理想动物模型，其具体机制不详。 本文选取该小鼠肝癌细胞HCa为研究对象，以615小鼠为实验动物，采用免疫组化、免疫印渍、R下PCR、流式细胞术等技术，辅之以特异性抗体体外阻断冰冻淋巴结切片钻附实验，分析了小鼠肝癌高低转移株HCa一F、HCa一P细胞表面L-选择蛋白的表达情况，以及其表达水平的高低与转移潜能高低的关系，阻断L一选择蛋白与配体间相互作用对转移能力的影响等，从而深入探讨L一选择蛋白与肿瘤淋巴道转移力间的相关性。 对L一选择蛋白与肿瘤淋巴道转移力间相关性的研究，不论从理论上还是临床应用上都具有一定的意义:一方面，可以拓展人们的视野，对L一选择蛋白有一个更全面的认识一L一选择蛋白不但表达于淋巴细胞的表面，在炎症等过程中发挥重要的生理功能，而且可能参与肿瘤淋巴道转移的过程，在更多的生理或病理过程中起到相应的作用:另一方面，由于L一选择蛋白仅在特定的细胞表达，因此，可以作为检测肿瘤发生淋巴道转移倾向的指标，或者在临床治疗方面，研制针对性干扰分子，特异性阻断其与配体间的相互作用，以遏制肿瘤淋巴道转移的发生，达到荷瘤生存之目的。 本文的主要工作如下: 一腹水型小鼠肝癌HCa一F细胞的鉴定 虽然HCa细胞是由小鼠腹水型肝癌细胞株H:2中筛选而来，但其生物学性状类似淋巴瘤，为将其与淋巴瘤细胞相区别，用肝癌相关的甲胎蛋白AFP、角蛋白CK抗体及淋巴瘤相应抗体CD3、CD20以免疫组化染色技术对HCa一F细胞进行了再次鉴定，以与淋巴瘤相区分。 实验结果表明:
参考文献：
[1]. L-选择蛋白与小鼠肝癌细胞Hepal-6淋巴道转移潜能的相关性[D]. 刘芯宇. 大连医科大学. 2006
[2]. L-选择蛋白与小鼠肝癌细胞HCa-F淋巴道转移潜能的相关性[D]. 刘敏. 大连医科大学. 2003
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