（云南省丽江市古城区疾控预防控制中心检验科；云南丽江674199）
【摘要】目的：探讨ELISA法检测抗戊型肝炎病毒IgM抗体的影响因素及控制对策。方法：选取本疾控中心于2014年12月至2019年1月筛查出的抗戊型肝炎IGM抗体阳性者36例，分析ELISA法检测结果。结果：抗HEV-IgG与抗HEV-IgM同时阳性有27例（75.00%），抗HEV-IgG阳性而抗HEV-IgM阴性有8例（22.22%）。结论：ELISA法检测HEV-IgM能够提供较为准确的结果，在操作中避免各项影响因素的影响能够避免假阳性的发生。
【关键词】ELISA；抗戊型肝炎病毒；IgM抗体；影响因素；控制对策
[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2019）04-0235-01
近些年的研究结果表明，戊型肝炎病毒由于分子克隆技术的发展以及对检测研究的深入，ELISA法测该病毒抗体受到广泛重视[1]。本文对ELISA法检测的影响因素进行深入研究，并提出解决对策，达到为医护工作者提供理论基础的目的。本文首先对筛查出的戊型肝炎IGM抗体阳性者进行IgG抗体检测，之后分析检测结果，报告如下。
1资料与方法
1.1标本采集
选取本疾控中心于2014年12月至2019年1月筛查出的抗戊型肝炎IGM抗体阳性者36例，收集其血液样本。之后以1500-3000r/min的速度进行离心，将血清分离。对于无法立即进行检测的样本要严格以2-8摄氏度保存，且保存时间不宜过长（<3d）。为避免辣根过氧化物酶失活，不得在样本中添加叠氮钠。
1.2仪器与试剂
试剂盒使用戊型肝炎病毒IgG抗体检测试剂盒（国械注准20163401044）和戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒（国械注准20153401898）。
仪器使用CH80-2型离心机，ELX-800酶标仪，恒温水浴箱。
1.3检测方法
在包被板的各个孔中加入100μl的被测样品稀释液，空白孔除外。设置两个阴性和阳性对照孔，加入10μl被测样品，同时留一空白孔。之后反复进行4次水浴与洗板机洗板，进行洗涤。洗涤完毕在孔内（除空白孔）加入酶标记物，随后再次进行孵育与洗涤。之后每个孔内加入显色剂A液B液各50μl，在37摄氏度的条件下进行10分钟的显色，再在每一个孔内加入50μl终止液。最后使用ELX-800酶标仪检测各孔的OD值。
2结果
抗HEV-IgG与抗HEV-IgM同时阳性有27例（75.00%），抗HEV-IgG阳性而抗HEV-IgM阴性有8例（22.22%）。
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3讨论
根据流行病学的调查研究，HEV流行的国家多为发展中国家，并且HEV的死亡率较高，相比甲型肝炎多出10倍，在普通人群中达到1-2%，对于妊娠患者死亡率更高，达到10-20%，因此对HEV的早期检测极为关键，以帮助患者改善预后，避免死亡的发生[2]。HEV的传播方式是以肠道为主要途径，肝损伤较少出现，而多呈现急性和自限性过程[3]。
近些年的研究结果表明，戊型肝炎病毒由于分子克隆技术的发展以及对检测研究的深入，ELISA法测该病毒抗体受到广泛重视。本文以36例本疾控中心筛查出的HEV患者进行研究分析，结果显示，抗HEV-IgG与抗HEV-IgM同时阳性有27例（75.00%），抗HEV-IgG阳性而抗HEV-IgM阴性有8例（22.22%），其检测结果与相关文献无出入。提示检测方法与对检测结果的判断方法较为合理。同时可以以抗HEV-IgM与抗HEV-IgG作为HEV早期诊断的依据，以使诊断结果可靠。
对于ELISA法检测HEV抗体，其影响因素在各个检测环节中均有出现，需采取对应的控制措施。（1）标本内源性与外源性的干扰处理：由于标本采集不规范、长时间贮存等会造成外源性的干扰，应在标本采集完成后进行合理的操作，包括对样本进行立即检测，贮存时间不以过长，为避免溶血的发生加入抗凝血剂等；高浓度非特异性免疫球蛋白等可能造成内源性干扰，在检测时需进行血清的灭活。（2）试剂：对于试剂的选择需要注意选择符合要求批准注册且检验合格的产品，并在有效期内使用。试剂盒需灵敏性、特异性均较高；对试剂进行预处理，在实际操作过程种，检验人员往往容易忽略该步骤，在试剂使用前需在室温中放置到与室温相当，大约三十分钟，避免温度对检测结果造成影响；试剂盒以及对照品控需有效，保证对照在同批次试剂盒中进行。（3）仪器及操作：加样使用移液器规范操作，避免触及孔壁边缘，做到慢吸快放，且每次移液需更换吸头；ELISA法检测成功的关键之一在于温度的控制和把握，包括恒温箱温度的控制，需以箱内设置的温度及为准确温度以避免误差，抗原抗体需在37摄氏度的条件下反应，并进行足够的时间；洗板也对检测是否成功有一定影响，严格按要求进行洗涤的次数，使用蒸馏水对管道进行冲洗，防止出现堵塞，同时检验人员应注意洗涤后的拍板。（4）结果观察：注意时间的控制，保证在15分钟内完成判读，且比色需在显色反应后马上操作。（5）质控：使用即刻法，若数据有误，需找出发生该现象的原因，对试验的各个环节进行分析核查，不可忽视。
综上所述，ELISA法检测HEV-IgM能够提供较为准确的结果，在检测操作中避免各项影响因素的影响能够避免假阳性的发生，以保证检测结果的准确，为临床治疗提供可靠的参考依据。
参考文献
[1] 宋敏, 范娅涵, 王世春,等. 间接ELISA测定人血IgM型抗-A抗体方法的建立及应用[J]. 第三军医大学学报, 2018, 40(7):556-560.
[2] Norder H, Karlsson M, Mellgren Å, et al. Diagnostic Performance of Five Assays for Anti-Hepatitis E Virus IgG and IgM in a Large Cohort Study.[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2016, 54(3):549-555.
[3] Mao S, Ou X, Zhu D, et al. Development and evaluation of indirect ELISAs for the detection of IgG, IgM and IgA1 against duck hepatitis A virus 1.[J]. Journal of Virological Methods, 2016, 237:79-85.
论文作者:和婧
论文发表刊物:《医师在线》2019年2月4期
论文发表时间:2019/4/11
标签：抗体论文; 肝炎论文; 阳性论文; 病毒论文; 因素论文; 试剂论文; 阴性论文; 《医师在线》2019年2月4期论文;