（遵义市第一人民医院 贵州遵义 563002）
【摘要】目的：探讨辅助性T细胞17（Th17）和白细胞介素17（IL-17）在非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中的表达意义。方法：选取原发性NSCLC患者37例为观察组，健康对照组10例为对照组，采用流式细胞仪检测两组外周血Th17细胞水平。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清IL-17水平。比较两组外周血Th17细胞及IL-17水平，分析观察组患者外周围血Th17细胞及IL-17水平与肺癌的关系。结果：观察组外周血中Th17细胞和IL-17水平明显高于对照组（P<0.05）。结论：在NSCLC的发生发展的过程中，Th17细胞及细胞因子IL-17可能发挥一定作用。
【关键词】非小细胞肺癌；辅助性T细胞17；白细胞介素17
【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）03-0190-02
恶性肿瘤发病率已位于十大死亡疾病之首，肺癌在我国大中城市已成为癌症死亡的第一位原因，其中非小细胞肺癌（NSCLC）约占80％。Th17细胞是新发现的一种CD4+T细胞亚群，在多种肿瘤患者的外周血及肿瘤组织，均发现Th17细胞及其细胞因子（IL-17、IL-21和IL-22）的高表达，并有许多临床研究证实，Th17细胞及其细胞因子（IL-17、IL-21和IL-22）可通过介导肿瘤血管的形成，诱导肿瘤细胞的生长和转移。本研究通过检测非小细胞肺癌患者外周Th17细胞及白细胞介素17表达变化，探讨其在非小细胞肺癌发生发展中的作用。
1.资料与方法
1.1 一般资料
选择2015年2月—2016年2月贵州省遵义市第一人民医院收治的NSCLC患者37例为观察组，人组标准：经细胞学、病理学或影像学确诊的原发性NSCLC患者（无手术、放化疗等治疗史），其中男23例，女17例；年龄37～78岁，平均（65.3±6.7）岁；有吸烟史20例，无吸烟史20例；根据美国癌症联合委员会制定的TNM分期标准进行临床分期：I期5例，Ⅱ期12期，Ⅲ期15例，IV期8例。以同期来本院体检的健康志愿者10例为对照组，其中男6例，女4例；年龄20～52岁，平均（30.5±3.9）岁。所有患者及志愿者均知情同意，两组一般资料具有可比性。
1.2 方法
1.2.1标本采集
1.2.1.1收集患者清晨空腹静脉血3mL，以EDTA抗凝，以等体积的Hank’s液稀释后转移至装有2ml人淋巴细胞分离液管，密度梯度2000rpm离心15min，吸取单个核细胞层，用1640液洗涤3次后重新调整细胞浓度为2×106/mＬ用于流式检测。
1.2.1.2收集患者清晨空腹静脉血3ml，静置30min后，以2000rpm离心20min，用毛细吸管吸取上清（血清）于eppendorf管中保存，-20℃冰箱贮存备用。
1.2.2流式细胞术检测Th17细胞
1.2.2.1取细胞浓度为2×106/mL的单细胞悬液，200μL/管，转移至专用流式管中，分别加入流式抗体：抗人CD3-PerCP，CD4-FITC 5ul，冰上避光孵育30mins；然后用PBS液洗涤2遍，1200rpm，10mins；弃上清，弹匀细胞后，分别加入100μl的IC Permeabilization buffer，冰上避光孵育40mins，PBS缓冲液洗涤1遍，1200rpm，10mins，弃去上清，弹匀剩余液体，每管分别加入Anti-RORγ（t）-APC、Anti-IL-17-PE混匀，置于冰上避光孵育30mins，然后用PBS液洗涤2遍，1200rpm，10mins；弃上清，弹匀细胞后，加入300μl PBS重悬细胞，上流式细胞仪进行检测。同时做同型对照以排除干扰和单染以调电压。
1.2.2.2上机检测 用Beckman Coulter公司流式细胞仪进行检测，采用Gallios软件获取与分析数据，建立FSC/SSC散点图，每管获取30000～50000个细胞，根据同型对照设置十字门分析Th17细胞比例变化，CD3+CD4+IL-17+T表示Th17细胞。
1.3 观察指标
比较2组外周血Thl7细胞及IL-17水平，分析观察组患者外周围血Thl7细胞及IL-17水平与临床病理特征的关系。
1.4 统计学处理
采用SPSS 19.0统计学软件包对本研究相关数据进行处理与分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 NSCLC 组与对照组外周血Th17细胞的比较
NSCLC组Th17细胞（CD3+CD4+IL-17+RORγ（t）+细胞）的比例［（14.55 ±12.79）%］与对照组［（0.24 ±0.84）%］之间差异有统计学意义（P＜0.01），（见表1，图1）。
3.讨论
细胞免疫和体液免疫是机体抗肿瘤免疫的效应机制，细胞免疫是抗肿瘤免疫的主要方式。CD4+T细胞在肿瘤免疫应答过程中起重要辅助作用。Th17是CD4+T细胞的1个新亚型，能产生IL-17等细胞因子，据研究报道在人类多种肿瘤患者血清及肿瘤组织中，如结肠癌、肝癌、胃癌及乳腺癌等，存在异常表达的Th17细胞，且Th17细胞水平与肿瘤病理特征成正比。Li等[1]发现结肠癌患者的外周血中Th17细胞的比例较健康者明显升高，并与肿瘤的进展有关。He等[2]用流式细胞术检测了46例胰腺癌患者外周血中Th17细胞，发现Th17细胞的比例与健康对照组对比明显增高，胰腺癌患者血清中IL-17和IL-23的水平也明显升高，且Ⅲ/Ⅳ期肿瘤患者血清中IL-17和IL-23的水平高于Ⅰ/Ⅱ期肿瘤患者。因此，Th17细胞的比例及其相关细胞因子的水平上调可能促进了胰腺癌的侵袭和转移。Su等[3]则发现胃癌患者，特别是转移性胃癌患者的肿瘤组织及PBMC中IL-17和ＲOＲγt的水平都明显上调。这些结果提示Th17可浸润到肿瘤组织并促进肿瘤的发展和转移。
本研究结果表明，与对照组相比，观察组患者外周血中Th17细胞水平及IL-17明显升高，此外，有研究结果亦证实，Th17细胞水平在其他肿瘤中也有显著升高，如胃癌患者外周血中，Th17细胞水平较健康志愿者高，且与早期患者比较，Th17水平在进展期胃癌患者中更高。同样，Th17细胞在晚期肝癌患者外周血中也存在高水平表达。
综上所述，Th17细胞及IL-17水平在NSCLC患者外周血中有显著升高现象，且与患者临床分期密切相关，提示在NSCLC的发生发展中，Th17细胞可能发挥一定的作用。为肺癌的治疗寻找新靶点提供可能的理论依据，有望改善肺癌的预后和提高生存率。
【参考文献】
[1] Li X，Wang Y，Han C，et al．Colorectal cancer progression is asso-ciated with accumulation of Th17 lymphocytes in tumor tissues and increased serum levels of interleukin-6［J］.Tohoku J Exp Med，2014，233(3):175-182.
[2] He S，Fei M，Wu Y，et al．Distribution and clinical significance of Th17 cells in the tumor microenvironment and peripheral blood of pancreatic cancer patients［J］．Int J Mol Sci，2011，12 (11):7424-7437.
[3] Z Su，Y Sun，H Zhu，et al． Th17 cell expansion in gastric cancer
may contribute to cancer development and metastasis［J］．Immu-nol Ｒes，2014，58(1):118-124.
基金项目：遵市科合字（2011）12号.
论文作者:邱丹,林江（通讯作者）,杨华军,吴傲兰
论文发表刊物:《心理医生》2018年3期
论文发表时间:2018/2/11
标签：细胞论文; 患者论文; 肿瘤论文; 水平论文; 肺癌论文; 外周血论文; 细胞因子论文; 《心理医生》2018年3期论文;