HSP70在人胃癌中的表达及其对胃癌形成与发展的作用

郭建成^[1]1998年在《HSP70在人胃癌中的表达及其对胃癌形成与发展的作用》文中认为胃癌在我国的发病率及死亡率居各种恶性肿瘤之首。研究胃癌形成与发展的机制对胃癌防治具有重要意义。业已发现，在胃癌中存在原癌基因如C-myc、C-erb B_2、H-ras、C-met等的突变、扩增、活化以及抑癌基因如P16、P53等的缺失、突变、失活；还有细胞周期相关蛋白如PCNA的异常等。但这些发现尚难以完全解释胃癌的发生与发展。 热休克蛋白(Heat shock proteins，HSPs)最早在热应激的细胞中发现，以分子量大小分成6个家族，其中以HSP70在细胞中含量最多，研究也较广泛。HSP70在正常细胞中少量表达，在应激细胞中大量表达。HSP70具有细胞保护及分子伴侣作用。一些学者发现，HSP70在快速增殖的细胞中呈高水平表达；在细胞内出现结构改变的自身蛋白质可诱导HSP70表达。肿瘤细胞具有无限增殖的特点，在肿瘤细胞中存在多种基因改变，如基因的突变、缺失、扩增、活化或失活等，这些异常基因编码的异常蛋白质可诱导HSP70表达。业已证明，HSP70在乳腺癌、肾癌、子宫癌、卵巢癌等肿瘤中表达增加，可能对肿瘤产生与发展具有意义。HSP70在人胃癌中的研究尚未见报道。HSP70是否参与胃癌的产生与发展，目前尚不清楚。 为探讨HSP70在人胃癌中的表达水平、临床意义、对胃癌产生与发展的

郝英杰^[2]2014年在《siRNA-ZNF139胃癌细胞对化疗药物敏感性及ZNF139相关蛋白质组学的研究》文中进行了进一步梳理胃癌是严重威胁人类生命健康的主要疾病之一，当前已经成为全球重大的公共卫生问题。在我国胃癌发病率和死亡率均占消化系统恶性肿瘤的第一位。由于胃癌的早期症状不典型，当患者出现明显不适症状时，病情往往已经发展的较晚，失去了行根治性手术的机会，对于这部分患者，化疗成为其治疗的主要手段。虽然近年来不断研究出新的化疗药物及改进的联合化疗方案，但胃癌患者的化疗效果仍然不尽如人意。胃癌的多药耐药（multidrug resistance，MDR）往往是导致化疗治疗效果欠佳的主要原因之一。MDR发生的机制较为复杂，而且受到多种因素影响，研究逆转MDR的有效方法已经成为提高化疗疗效的关键。因此，如何逆转胃癌的MDR，提高胃癌化疗疗效，成为当前胃癌研究中的热点，也是临床胃癌治疗中急待解决的问题。蛋白质组学（Proteomics）是以基因编码的所有蛋白质组为研究对象，从整体水平上分析细胞内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，进而揭示蛋白质功能及其与细胞生命活动规律的关系。蛋白质组学的技术体系是以双相凝胶电泳（two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis，2-DE）为主的蛋白质分离技术和以质谱（mass spectrometry，MS）、生物信息学（Bioinformatics）为主的蛋白质鉴定技术。本实验共分为四部分，第一部分应用siRNA抑制人胃癌SGC7901细胞中ZNF139表达及并研究其对化疗药物敏感性影响；第二部分应用siRNA抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤中ZNF139表达及并研究其对化疗药物敏感性影响。通过第一、二部分的研究，得出应用siRNA能够抑制人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中ZNF139的表达，抑制ZNF139的表达后能够提高胃癌细胞对于化疗药物的敏感性。第三部分应用蛋白质组学技术对siRNA抑制人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中前后的差异蛋白进行分离鉴定，寻找与ZNF139参与胃癌发生、发展及多药耐药有可能相关的蛋白。通过第三部分的研究，得出ZNF139有可能通过PDXK、ANXA2及Fascin而参与胃癌的发生、发展及多药耐药。第四部分应用qRT-PCR及Western blot法检测各实验组人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中PDXK、ANXA2及Fascin的表达情况。通过第四部分的研究，得出ZNF139有可能通过促进ANXA2、Fascin的表达及抑制PDXK的表达来参与胃癌的发生、发展及多药耐药等过程。本课题四部分的具体内容如下：第一部分：siRNA抑制人胃癌SGC7901细胞中ZNF139表达及其对化疗药物敏感性影响的研究目的：以人胃癌SGC7901细胞为研究对象，检测siRNA抑制人胃癌SGC7901细胞前后ZNF139的表达情况，并研究其对化疗药物敏感性的影响。方法：1设计合成针对ZNF139的小干扰RNA，构建siRNA-ZNF139表达质粒。培养人胃癌SGC7901细胞，应用siRNA-ZNF139质粒转染人胃癌SGC7901细胞。2qRT-PCR检测各实验组人胃癌SGC7901细胞中ZNF139mRNA表达水平的变化。3Western blot法检测各实验组人胃癌SGC7901细胞中ZNF139蛋白表达水平的变化。4MTT法检测各实验组人胃癌SGC7901细胞对于化疗药物敏感性的变化。结果：1各实验组人胃癌SGC7901细胞中ZNF139mRNA表达水平的变化。分别用3个阳性质粒及阴性对照质粒以浓度为0.8μg/μl转染人胃癌SGC7901细胞48小时，依据结果可以发现空白对照组与阴性对照组中ZNF139mRNA的相对表达量最高，且二者之间表达差异无统计学意义（P>0.05）；1号阳性质粒组中ZNF139mRNA的相对表达量为最低，且其与空白对照组ZNF139mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。各实验组中以1号阳性质粒组ZNF139的抑制效率最高，为84.41%。选用1号阳性质粒，以0.4μg/μl、0.6μg/μl、0.8μg/μl、1.0μg/μl的浓度梯度转染人胃癌SGC7901细胞48小时，依据结果发现空白对照组ZNF139mRNA的相对表达量最高；浓度为0.8μg/μl组的ZNF139mRNA的相对表达量最低，且其与空白对照组ZNF139mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P <0.05）。各实验组中以浓度0.8μg/μl组ZNF139的抑制效率最高，为84.42%。选用浓度为0.8μg/μl的1号阳性质粒，分别转染胃癌细胞24小时、48小时、72小时，依据结果发现空白对照组ZNF139mRNA的相对表达量最高；转染48小时实验组的ZNF139mRNA表达量最低，且其与空白对照组ZNF139mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P <0.05）。各实验组中以转染48小时实验组ZNF139的抑制效率最高，为84.36%。2各实验组人胃癌SGC7901细胞中ZNF139蛋白表达水平的变化。应用Western blot法检测各实验组ZNF139蛋白表达水平的变化。实验结果与qRT-PCR结果一致。3各实验组人胃癌SGC7901细胞对于化疗药物敏感性的变化依据前面实验部分得到结果，选用0.8μg/μl浓度的1号阳性质粒及阴性对照质粒，转染人胃癌SGC7901细胞48小时后，应用MTT法检测各实验组人胃癌SGC7901细胞对于5-FU、ADR、CDDP、L-OHP、MMC、MTX、VP-16这7种化疗药物敏感性的变化。依据结果发现空白对照组与阴性对照组中相互之间各自比较细胞平均抑制率，差异无统计学意义（P>0.05）。siRNA-ZNF139组中各自较空白对照组细胞平均抑制率明显升高，且二者之间比较差异有统计学意义（P <0.05）。结论：1siRNA能够抑制人胃癌SGC7901细胞中ZNF139mRNA的表达。2siRNA能够抑制人胃癌SGC7901细胞中ZNF139蛋白的表达。3siRNA抑制人胃癌SGC7901细胞中ZNF139的表达能够提高胃癌细胞对于5-FU、ADR、CDDP、L-OHP、MMC、MTX、VP-16这7种化疗药物的敏感性。第二部分：siRNA抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤中ZNF139表达及其对化疗药物敏感性影响的研究目的：以人胃癌SGC7901细胞裸鼠原位移植瘤为研究对象，检测siRNA抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤前后ZNF139的表达情况，并研究其对化疗药物敏感性的影响。方法：1人胃癌裸鼠原位移植瘤模型的建立及干预收集体外培养的人胃癌SGC7901细胞，建立裸鼠皮下移植瘤模型，传代5次，获取生长旺盛的第6代皮下移植瘤，将第6代皮下移植瘤应用OB生物胶粘贴法进行原位移植。术后每日观察裸鼠腹部切口、进食及腹腔原位移植瘤生长情况。待原位移植瘤长至直径约10mm左右时，分别随机按照空白对照组、siRNA-ZNF139组、siRNA-ZNF139+奥沙利铂组、奥沙利铂组及阴性对照组进行干预。干预期间，隔日测量一次瘤体长、短径，并按照V=ab2/2（a为瘤体长径，b为瘤体短径）计算原位移植瘤体积。干预处理两周后，取出原位移植瘤。2qRT-PCR检测各实验组人胃癌裸鼠原位移植瘤中ZNF139mRNA表达水平的变化。3Western blot法检测各实验组人胃癌裸鼠原位移植瘤中ZNF139蛋白表达水平的变化。4MTT法检测各实验组人胃癌裸鼠原位移植瘤对于化疗药物敏感性的变化。结果：1人胃癌裸鼠原位移植瘤模型干预后的形态观察干预处理两周后，统计各实验组原位移植瘤体积（V=ab2/2，a为瘤体长径，b为瘤体短径）。依据结果可以发现空白对照组与阴性对照组中原位移植瘤的体积最大，且二者之间差异无统计学意义（P>0.05）；siRNA-ZNF139+奥沙利铂组中原位移植瘤的体积最小，且其与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）；siRNA-ZNF139组与空白对照组原位移植瘤的体积比较差异有统计学意义（P<0.05）；siRNA-ZNF139组与siRNA-ZNF139+奥沙利铂组原位移植瘤的体积比较差异有统计学意义（P<0.05）；奥沙利铂组与空白对照组原位移植瘤的体积比较差异有统计学意义（P<0.05）；奥沙利铂组与siRNA-ZNF139+奥沙利铂组原位移植瘤的体积比较差异有统计学意义（P<0.05）；siRNA-ZNF139组与奥沙利铂组原位移植瘤的体积比较差异无统计学意义（P>0.05）。2各实验组人胃癌裸鼠原位移植瘤中ZNF139mRNA表达水平的变化依据结果可以发现空白对照组与阴性对照组中ZNF139mRNA的相对表达量最高，且二者之间表达差异无统计学意义（P>0.05）；siRNA-ZNF139组中ZNF139mRNA的相对表达量为最低，且其与空白对照组ZNF139mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。siRNA-ZNF139组ZNF139的抑制效率为81.05%。3各实验组人胃癌裸鼠原位移植瘤中ZNF139蛋白表达水平的变化应用Western blot法检测各实验组ZNF139蛋白表达水平的变化。实验结果与qRT-PCR结果一致。4各实验组人胃癌裸鼠原位移植瘤组织对于化疗药物敏感性的变化应用MTT法检测各实验组人胃癌裸鼠原位移植瘤组织细胞对于5-FU、ADR、 CDDP、L-OHP、MMC、MTX、VP-16这7种化疗药物敏感性的变化。依据结果发现空白对照组与阴性对照组中相互之间各自比较细胞平均抑制率，差异无统计学意义（P>0.05）。siRNA-ZNF139组中各自较空白对照组细胞平均抑制率明显升高，且二者之间比较差异有统计学意义（P <0.05）。结论：1siRNA-ZNF139能够抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤的生长。2siRNA能够抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤中ZNF139mRNA的表达。3siRNA能够抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤中ZNF139蛋白的表达。4siRNA抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤中ZNF139的表达能够提高原位移植瘤组织对于5-FU、ADR、 CDDP、L-OHP、MMC、MTX、VP-16这7种化疗药物的敏感性。第三部分：siRNA抑制人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中ZNF139表达的蛋白质组学研究目的：以人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤为研究对象，通过双向荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）和液相色谱-质谱联用（LC-MS）等蛋白质组学技术研究各实验组人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中差异蛋白的表达情况。方法：应用双向荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）技术分别分离各实验组人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤蛋白质，选择差异点，并用Ettan spot picker挖取，挖取点行胶内酶解，应用液相色谱-质谱联用（LC-MS）鉴定技术对挖取的蛋白质点鉴定，并对鉴定出的蛋白质进行分析。结果：人胃癌SGC7901细胞双向荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）图谱上蛋白质点为1958±67个，匹配率为90.5%，人胃癌裸鼠原位移植瘤2D-DIGE图谱上蛋白质点为5227±59，匹配率为88.7%。在人胃癌SGC7901细胞中选取8个差异明显的蛋白点，经由LC-MS鉴定出6种蛋白质：吡哆醛激酶（pyridoxal kinase，PDXK）、结蛋白（Desmin）、核磷蛋白（nucleophosmin，NPM）、热休克蛋白70（heat shockprotein70，HSP70）、膜联蛋白A2（annexin A2，ANXA2）、和Fascin。在siRNA-ZNF139转染后的人胃癌SGC7901细胞中PDXK、Desmin、NPM表达上调，HSP70、ANXA2、Fascin表达下调。在人胃癌裸鼠原位移植瘤中选取6个差异明显的蛋白点，经由LC-MS鉴定出5种蛋白质：ANXA1、PDXK、Fascin、ANXA2、不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein，hnRNP）。在siRNA-ZNF139转染后的人胃癌裸鼠原位移植瘤中ANXA1、PDXK表达上调，Fascin、ANXA2、hnRNP表达下调。结论：1在siRNA-ZNF139转染后的人胃癌SGC7901细胞中PDXK、Desmin、NPM表达上调，HSP70、ANXA2、Fascin表达下调。2在siRNA-ZNF139转染后的人胃癌裸鼠原位移植瘤中ANXA1、PDXK表达上调，Fascin、ANXA2、hnRNP表达下调。3ZNF139可能通过调节PDXK、ANXA2及Fascin而参与胃癌的发生、发展及多药耐药。第四部分：siRNA-ZNF139对人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中PDXK、ANXA2及Fascin表达影响的研究目的：以人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤为研究对象，检测各实验组人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中PDXK、ANXA2及Fascin的表达情况。方法：1培养人胃癌SGC7901细胞，应用siRNA-ZNF139质粒转染人胃癌SGC7901细胞。2人胃癌裸鼠原位移植瘤模型的建立及干预3qRT-PCR检测各实验组人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中PDXK、ANXA2及Fascin mRNA表达水平的变化。4Western blot法检测各实验组人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中PDXK、ANXA2及Fascin蛋白表达水平的变化。结果：1各实验组人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中PDXK、ANXA2及Fascin mRNA表达水平的变化应用qRT-PCR检测空白对照组、siRNA-ZNF139组及阴性对照组中人胃癌SGC7901细胞中PDXK mRNA表达水平的变化。依据结果可以发现空白对照组与阴性对照组中PDXK mRNA的相对表达量较低，且二者之间表达差异无统计学意义（P>0.05）；siRNA-ZNF139组中PDXK mRNA的相对表达量为最高，且其与空白对照组PDXK mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。应用qRT-PCR检测空白对照组、siRNA-ZNF139组及阴性对照组中人胃癌SGC7901细胞中ANXA2mRNA表达水平的变化。依据结果可以发现空白对照组与阴性对照组中ANXA2mRNA的相对表达量最高，且二者之间表达差异无统计学意义（P>0.05）；siRNA-ZNF139组中ANXA2mRNA的相对表达量为最低，且其与空白对照组ANXA2mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。应用qRT-PCR检测空白对照组、siRNA-ZNF139组及阴性对照组中人胃癌SGC7901细胞中Fascin mRNA表达水平的变化。依据结果可以发现空白对照组与阴性对照组中Fascin mRNA的相对表达量最高，且二者之间表达差异无统计学意义（P>0.05）；siRNA-ZNF139组中Fascin mRNA的相对表达量为最低，且其与空白对照组Fascin mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。应用qRT-PCR检测空白对照组、siRNA-ZNF139组及阴性对照组中人胃癌裸鼠原位移植瘤中PDXK mRNA表达水平的变化。依据结果可以发现空白对照组与阴性对照组中PDXK mRNA的相对表达量较低，且二者之间表达差异无统计学意义（P>0.05）；siRNA-ZNF139组中PDXKmRNA的相对表达量为最高，且其与空白对照组PDXK mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。应用qRT-PCR检测空白对照组、siRNA-ZNF139组及阴性对照组中人胃癌裸鼠原位移植瘤中ANXA2mRNA表达水平的变化。依据结果可以发现空白对照组与阴性对照组中ANXA2mRNA的相对表达量最高，且二者之间表达差异无统计学意义（P>0.05）；siRNA-ZNF139组中ANXA2mRNA的相对表达量为最低，且其与空白对照组ANXA2mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。应用qRT-PCR检测空白对照组、siRNA-ZNF139组及阴性对照组中人胃癌裸鼠原位移植瘤中Fascin mRNA表达水平的变化。依据结果可以发现空白对照组与阴性对照组中Fascin mRNA的相对表达量最高，且二者之间表达差异无统计学意义（P>0.05）；siRNA-ZNF139组中FascinmRNA的相对表达量为最低，且其与空白对照组Fascin mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。2各实验组人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中PDXK、ANXA2及Fascin蛋白表达水平的变化。应用Western blot法检测各实验组PDXK、ANXA2及Fascin蛋白表达水平的变化。实验结果与qRT-PCR结果一致。结论：1siRNA-ZNF139转染人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤后，PDXK mRNA的表达水平上升，ANXA2mRNA及Fascin mRNA的表达水平降低。2siRNA-ZNF139转染人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤后，PDXK蛋白的表达水平上升，ANXA2蛋白及Fascin蛋白的表达水平降低。3ZNF139有可能通过促进ANXA2、Fascin的表达及抑制PDXK的表达来参与胃癌的发生、发展及多药耐药等过程。综合上述四部分实验内容，本研究小结如下：1siRNA能够抑制人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中ZNF139mRNA的表达。2siRNA能够抑制人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中ZNF139蛋白的表达3siRNA抑制人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中ZNF139的表达能够提高胃癌细胞对于化疗药物的敏感性。4siRNA-ZNF139能够抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤的生长。5在siRNA-ZNF139转染后的人胃癌SGC7901细胞中PDXK、Desmin、 NPM表达上调， HSP70、 ANXA2、 Fascin表达下调。在siRNA-ZNF139转染后的人胃癌裸鼠原位移植瘤中ANXA1、PDXK表达上调，Fascin、ANXA2、hnRNP表达下调。6siRNA-ZNF139转染人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤后，PDXK mRNA的表达水平上升，ANXA2mRNA及Fascin mRNA的表达水平降低。7siRNA-ZNF139转染人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤后，PDXK蛋白的表达水平上升，ANXA2蛋白及Fascin蛋白的表达水平降低。8ZNF139有可能通过促进ANXA2、Fascin的表达及抑制PDXK的表达来参与胃癌的发生、发展及多药耐药等过程。

佚名^[3]2003年在《作者索引》文中提出第四军医大学学报(J Fourth Milit Med Unsv)2003年24卷索引AAdrian T.TINGB细胞成熟抗原BCMA在细胞内诱导NF-KB的活化(19):1729一1732CClaus H.Schroder慢性乙肝病毒感染的诊断和治疗

李莉娟^[4]2017年在《CCT3基因调控胃癌细胞增殖及机制研究》文中研究表明背景胃癌是全球癌症死亡的第二大原因,且发病率逐年升高。2016年全球每年新发胃癌病例近100万,41%发生在中国。国内大部分患者首次诊断时已为进展期,然而目前可能的干预手段如手术、化疗、放疗及其他辅助治疗效果欠佳。因此,临床亟需新型干预治疗方法,靶向治疗晚期胃癌有很大的前景。CCT(Chaperonin Containing TCP1)家族的CCT3有报道在肝癌、胆管癌等消化系统的恶性肿瘤中有着重要的作用,然而它在胃癌中的作用尚未报道。本研究的目的是探讨CCT3在人胃癌组织及癌旁组织中表达量,并揭示CCT3在胃癌发生发展中的重要生物学功能,以及该基因对胃癌发生发展影响的机制探索,为新的个体化治疗策略提供实验理论依据。方法首先分析在线TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库中RNA测序(RNA-seq)数据并筛选出一个CCT3的基因,同正常样本相比其在胃癌组织显著高表达。通过免疫组织化学染色检测CCT3在癌组织及癌旁组织的表达情况,通过实时定量PCR反应(qRT-PCR)检测CCT3的表达情况。应用RNA干扰技术(RNAi)靶向沉默胃癌细胞株CCT3基因的表达,通过Cellomic细胞计数、MTT实验、克隆形成及凋亡检测对CCT3在胃癌细胞株(AGS、MGC-803、BGC-823)的生物学功能进行分析。在胃癌细胞株BGC-823中沉默CCT3基因的表达,检测裸鼠体内成瘤能力。应用Affymetrix人类全基因表达谱芯片检测CCT3基因沉默前后胃癌细胞株BGC-823中全基因组mRNA表达丰度。用Ingenuity通路分析(Ingenuity?pathway analysis,IPA)差异表达基因,利用差异基因寻找下游潜在的候选基因。应用qRT-PCR和Western blot检测CCT3基因沉默后,部分候选下游通路基因mRNA和蛋白表达量。应用抗体芯片技术检测比较实验组和对照组两组样本中关键信号通路分子的变化,从分子水平揭示CCT3基因影响胃癌发生发展的作用机制。结果CCT3基因在胃癌组织和细胞株中高表达并且其主要定位于细胞核中。应用CCT3-shRNA靶向沉默胃癌AGS、BGC-823和MGC-803细胞中CCT3基因显著抑制胃癌细胞系的增殖能力。同样,抑制CCT3导致细胞凋亡明显增加。为了探讨CCT3在胃癌中可能的功能,本实验使用体外及体内肿瘤模型。体外实验,观察到在CCT3沉默的情况下胃癌细胞的克隆形成能力显著受到抑制;体内模型中,沉默CCT3的BGC-823细胞在裸鼠成瘤体积显著小于对照组。通过CCT3-shRNA沉默CCT3后,859个基因表达量上调,887个基因表达量下调。CCT3的沉默导致蛋白激酶A(PKA)、Wnt/β-catenin、PPAR及cAMP介导的信号通路发生改变。使用qRT-PCR及蛋白印迹实验验证沉默BGC-823细胞中的CCT3,导致细胞应激及凋亡相关的基因发生改变,其中MAP3K7、CDC42、CCND3的表达水平显著下调,CDK2、CDK6表达水平显著上调。结论综上所述,CCT3基因很可能是一个重要的分子,其过表达与胃癌的发生有关系。因此CCT3基因可能是新的胃癌相关的原癌基因,并在之后胃癌靶向治疗中有潜在的价值。进一步的研究(如过表达CCT3的胃癌稳定株及相关的动物模型)能够帮助我们探究及确定CCT3基因的致癌能力。

林雨冬^[5]2006年在《多种癌组织芯片中BAG-1的表达及其在乳腺癌中的临床意义》文中指出研究认为肿瘤的发生、发展与细胞的凋亡有着密切的关系。肿瘤细胞抗凋亡机制的形成，是肿瘤组织生长速度增加的重要因素之一。有关调节凋亡的因子现已发现很多，其中抗凋亡基因bag—1的表达蛋白BAG—1是一种已经被确认的多功能结合蛋白，研究也发现BAG-1在许多肿瘤中均有表达，与细胞凋亡调节有一定的关系，而且其表达与与肿瘤病人愈后和生存时间及生存率相关联。但BAG-1在各种肿瘤发生过程中的作用以及它与肿瘤生物学特性、预后的相关性，是否可以作为诊断肿瘤的一种生物学指标，及其对肿瘤预后的评估是否有意义，对这些问题的认识，已有的研究仍有争议，因此有必要对这些问题进行进一步的研究。 目的：为了进一步了解BAG-1在多种癌组织中的表达及其与乳腺癌多种临床预后相关因素的关系。 方法：1、利用组织芯片技术、用DAKO EnVision免疫组织化学方法对食管癌、乳腺癌、胃癌、直肠癌、宫颈癌及它们对应的癌旁组织和正常组织中BAG-1进行检测。 2、检测BAG-1在乳腺癌中的表达，研究BAG-1与乳腺癌多种临床预后相关因素的关系。

刘用金^[6]2009年在《特异核基质蛋白在人食管癌EC9706细胞凋亡中作用的初步研究》文中认为本论文以姜黄素(curcumin,Cur)处理人食管癌EC9706细胞,在鉴定姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡诱导效果的基础上,综合应用亚细胞蛋白质组学分析、免疫细胞化学、细胞分子生物学等技术,对EC9706细胞凋亡过程中核基质蛋白的变化进行了较为系统的研究。分析鉴定和确证与EC9706细胞凋亡相关的特异核基质蛋白,并研究特异核基质蛋白与人食管癌EC9706细胞凋亡相关基因在细胞内的共定位关系与变化,探索它们在人食管癌细胞凋亡诱导过程中的调控作用,以期能够在较为整体水平上进一步认识人食管癌细胞癌变与凋亡机理问题,从而找出人食管癌细胞凋亡相关的靶向性蛋白和深入探索的研究方向。实验结果表明,经30μmol/L姜黄素处理之后,EC9706细胞增殖受到明显抑制,细胞生长抑制率达83.88%,细胞发生G_0/G_1期阻滞。光镜观察结果显示,经姜黄素诱导处理后的EC9706细胞出现了细胞体积缩小、核质比例减小、细胞核固缩、核内染色质凝聚等显著的细胞凋亡特征。琼脂糖凝胶电泳显示EC9706细胞出现凋亡典型的DNA梯状条带。Hoechst染色显示细胞核内出现浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光。免疫细胞化学检测结果显示,经姜黄素处理后,EC9706细胞内的抑凋亡基因bcl-2表达下调,促凋亡基因bax、p53、fas等表达上调。双向凝胶电泳与质谱分析共鉴定12种蛋白,其中在凋亡的EC9706细胞中表达上调的有:Transcription elongation factor A(SII)-like 4(TCEAL4)、CCT8protein、Tara等3种核基质蛋白;表达下调的有:Prohibitin、Spindling-2B、Nucleophosmin、Translation initiation factor eIF-2B subunit beta等9种核基质蛋白。并进一步通过蛋白免疫印迹确证了Nucleophosmin、Prohibitin、HSP70、Spindling-2B、Vimentin等核基质蛋白的变化。激光共聚焦显微镜观察显示特异核基质蛋白Nucleophosmin、Prohibitin、HSP70、Spindling-2B等与抑凋亡基因bcl-2和促凋亡基因bax表达产物在细胞内均存在一定的共定位关系,并且它们的表达水平和细胞定位在细胞凋亡诱导前后均发生了改变。研究结果表明,30μmol/L姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡具有显著诱导作用,并上调促凋亡基因bax、p53、fas的表达和下调抑凋亡基因bcl-2的表达。在EC9706细胞凋亡过程中,其核基质蛋白组成产生了TCEAL4、CCT8 protein、Tara等3种蛋白表达上调和Prohibitin、Spindling-2B、Nucleophosmin等9种蛋白表达下调的明显变化。其中,差异表达核基质蛋白Nucleophosmin、Prohibitin、HSP70、Spindling-2B与EC9706细胞中Bcl-2和Bax蛋白均存在共定位关系,并在细胞凋亡过程中出现移位和分布的改变。由此证实了与人食管癌细胞凋亡相关的特异核基质蛋白的存在和特异核基质蛋白在肿瘤细胞凋亡中的重要作用。研究结果表明姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导与其改变食管癌细胞核基质蛋白的表达,从而调控细胞凋亡相关基因活性,诱导细胞凋亡具有重要的关系。这为在较为整体的水平上深入研究肿瘤细胞凋亡诱导的调控机制以及阐明细胞癌变与凋亡机理提供了科学依据和深入探索研究的新方向,并为食管癌的防治和进一步研究提供新的靶向性蛋白。

参考文献：

[1]. HSP70在人胃癌中的表达及其对胃癌形成与发展的作用[D]. 郭建成. 第四军医大学. 1998

[2]. siRNA-ZNF139胃癌细胞对化疗药物敏感性及ZNF139相关蛋白质组学的研究[D]. 郝英杰. 河北医科大学. 2014

[3]. 作者索引[J]. 佚名. 第四军医大学学报. 2003

[4]. CCT3基因调控胃癌细胞增殖及机制研究[D]. 李莉娟. 兰州大学. 2017

[5]. 多种癌组织芯片中BAG-1的表达及其在乳腺癌中的临床意义[D]. 林雨冬. 第四军医大学. 2006

[6]. 特异核基质蛋白在人食管癌EC9706细胞凋亡中作用的初步研究[D]. 刘用金. 厦门大学. 2009

标签：肿瘤学论文;  胃癌论文;  细胞凋亡论文;  对照组论文;  化疗药物论文;  基因合成论文;  蛋白质合成论文;  细胞转染论文;  放化疗论文;  癌症治疗论文;  hsp70论文;