黎静, 杨伟志, 王美健, 董秀月, 陈艳[1]1998年在《BUdR标记BUdR/DNA双参数流式细胞仪测定肿瘤潜在倍增时间的方法学研究》文中研究指明目的探讨溴脱氧尿嘧啶核苷（ＢＵｄＲ）标记ＢＵｄＲ／ＤＮＡ双参数流式细胞仪（ＦＣＭ）测定肿瘤潜在倍增时间Ｔｐｏｔ的方法，比较ＢＵｄＲ在体（ｉｎｖｉｖｏ）、离体（ｉｎｖｉｔｒｏ）标记结果的差异。材料与方法实验采用人鼻咽癌裸小鼠移植瘤模型分别进行ＢＵｄＲ在体、离体标记；离体标记时分别将样本制成组织块和细胞悬液在０．５ｍＭ、０．１ｍＭＢＵｄＲ的含２０％胎牛血清ＲＰＭＩ１６４０培养基、５％ＣＯ２、３７℃、ＣＯ２孵箱中开放培养不同时间后收集样本。在体标记：腹腔注射ＢＵｄＲ０．１ｍｇ／ｇ体重，６小时后处死小鼠取瘤剪碎，在７０％的冷乙醇固定冰箱保存；全部样本用ＦＩＴＣＰＩ染色后行ＦＣＭ测定。结果（１）本实验室的ＢＵｄＲ离体培养条件下，组织块标记较理想。（２）用ＢＵｄＲ在体标记法测定不同大小的肿瘤（直径０．３～１．２ｃｍ），结果表明：直径＜０．５ｃｍ的肿瘤的标记效果比较理想。（３）相同体积的肿瘤在体（ｎ＝９）、离体（ｎ＝７）标记两种不同标记方法的结果显示，相同体积的肿瘤用ＢＵｄＲ离体标记法时ＬＩ比在体标记低５３％，其它各项细胞动力学参数两者均有明显差异，但离体标记法的组内变异很小。结论本实验室成功建立了在体ＢＵｄＲ标记ＢＵ?
黎静[2]1997年在《BUdR标记BUdR/DNA双参数流式细胞仪测定肿瘤潜在倍增时间的方法学研究》文中研究说明肿瘤潜在倍增时间(potential doubling time，T_(pot))能较好反映疗中肿瘤干细胞的增殖能力。头颈部鳞癌的临床试验结果表明：疗前Tpot是影响头颈部鳞癌放疗效果的独立预后因素，是指导临床设计放疗分割模式的有用指标。因此本文应用HeLa细胞系、鼻咽鳞癌裸小鼠移植瘤模型和人体肿瘤活检及手术标本建立本实验室BUdR(bromoxyuridine，溴脱氧尿嘧啶核苷)标记BUdR／DNA双参数流式细胞仪(flow Cytometry，FCM)测定T_(pot)的方法；并试图建立适合我国国情的实体瘤离体BUdR标记的检测方法，探讨实体瘤离体标记法代替在体标记法的可能性，具体研究内容有： 1．从HeLa细胞系测定T_(pot)过程中，总结了有关BUdR配制，DNA变性、荧光染色及流式测定的步骤中的经验和需要注意的问题，并观察了BUdR标记的S期HeLa细胞的在细胞周期中的移动过程。 2．应用鼻咽癌裸小鼠移植瘤模型进行了BUdR在体标记双参数FCM测定T_(pot)的研究。比较了实体瘤标本不同的单细胞悬液制备方法，分析了在体BUdR标记时肿瘤体积及标本固定时间对测定的影响。 3 重点研究了用鼻咽癌裸小鼠移植瘤和直肠癌手术标本进行BUdR离体标记的技术，初步摸索出了在普通培养条件下BUdR离体标记的合适条件，即将标本用PBS洗净，剪成1～2mm~3组织块直接置入含有20％胎牛血清RPMI 1640培养基、5％CO_2、37℃、BUdR终浓度为的0.1mM、CO_2孵箱中开放培养。
参考文献：
[1]. BUdR标记BUdR/DNA双参数流式细胞仪测定肿瘤潜在倍增时间的方法学研究[J]. 黎静, 杨伟志, 王美健, 董秀月, 陈艳. 中华放射肿瘤学杂志. 1998
[2]. BUdR标记BUdR/DNA双参数流式细胞仪测定肿瘤潜在倍增时间的方法学研究[D]. 黎静. 中国协和医科大学. 1997