调血脂药中胡椒碱质量标准的研究论文_杨翠仙

杨翠仙

内蒙古包头市中心医院药剂科 014040

摘要：目的：建立调血脂药中荜茇的活性成分胡椒碱的薄层色谱鉴别法及高效液相色谱（HPLC）检验方法。方法：照薄层色谱法试验，在365nm下检视；以十八烷基硅烷键合硅胶，甲醇-水（77：23）为流动相，在343nm处用HPCL测定胡椒碱的含量。结果：在上述色谱条件下，胡椒碱能很好的分离，回归方程是 Y=39380X-10514，R2 =0.9762，线性关系良好，胡椒碱的含量为1.12mg/g结论：该方法可快速、准确、高效的鉴别及检测胡椒碱的含量。

关键词：调血脂药；荜茇；胡椒碱

一、前言

随着经济的发展，人民生活水平的提高，高血压、高血脂的发病率也在逐年上升，高血脂引发的心脑血管疾病是影响人类健康的危害之一。血脂异常与动脉粥样硬化的发生、发展密切相关。高脂血症对身体的损害是隐匿、逐渐长期性和全身性的，多数患者需药物治疗。但是患者如果盲目地应用调血脂药物不仅影响疗效，还会因药物的副作用雪上加霜。因此合理应用调血脂药物至关重要，合理应用调血脂药可降低发生冠状动脉粥样硬化性心脏病的危险。故研究调血脂药中胡椒碱的含量，为更好地控制调血脂药的质量标准提供依据。药理研究发现中药荜茇中提取的有效成分胡椒碱有明显的降血脂作用，而且其价格相对低廉，属于经济实用、有开发前景的药物。因此本实验采用胡椒碱为指标对调血脂药x的质量标准进行研究。

二、正文

（一）仪器、试剂、材料、试药

仪器：高效液相色谱仪（岛津LC-20AT）；超声仪器（JP-031）；ZF-T型暗箱三用紫外线分析仪；分析天平；干燥箱。

材料：玻璃板；容量瓶；点样针；ZORBAX SB-C18（4.6×250mm，5um）色谱柱。

试剂：（1）甲苯-乙酸乙酯-丙酮；无水乙醇；浓硫酸；硅胶；羧甲基纤维素钠（2）甲醇（色谱纯）、蒸馏水。

试药：胡椒碱（中国药品生物制品检定所）；调血脂药（包头医学院药理实验室提供）；荜茇药材；模拟药。

（二）方法和结果

1．薄层鉴别的方法与结果：

（1）铺板：称取适量硅胶G，加2.8倍量0.5%羧甲基纤维素钠水溶液，研磨均匀，涂铺，板厚0.5mm，自然干燥后，于1050C活化1.5h，置干燥器中备用。

（2）溶液的制备：

对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品19.8mg，置5ml棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含3.96mg的溶液。

荜茇药材供试品液的制备：取荜茇粉末0.8g，加无水乙醇5ml，超声处理30分钟，滤过。

调血脂药供试品的制备：取本品内容物17.8g，精密称定，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过。

模拟药和阴性对照溶液的制备：制法同上。

照薄层色谱法试验，吸取上述五种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮（7：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，只紫外灯（365nm）下检视。

（3）结果：荜茇药材供试品、调血脂药、模拟药色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点；而阴性对照在同一位置没有斑点；喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。

（4）方法学考察：去调血脂药的一半8.9g，按原方法配成溶液，点样，发现与对照品在同一位置有黄色斑点，配置阴性对照溶液，对比观察。见附录1。

2.胡椒碱的含量测定

（1）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶，甲醇-水（77：23）为流动相；

测定波长343nm；流速：1ml/min；柱温：26℃。

（2）溶液的制备：

①对照品溶液的制备：精密量取1ml含3.96mg胡椒碱对照品溶液加无水乙醇稀释成1ml含19.8ug的溶液。

②荜茇药材供试品液的制备：取本品中粉约0.1g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇40ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）30分钟，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置25ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得。

③调血脂药供试品的制备：取本品内容物约2.2g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇40ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）30分钟，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置25ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得。

④模拟药溶液的制备：取九种药材分别研磨至中粉，按比例配置，混合均匀后称取粉末约2.2g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇40ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）30分钟，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置25ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得。

⑤阴性对照溶液的制备：制法同上。见附录二

（3）方法学考察：

①线性关系考察：精密吸取胡椒碱对照品溶液（39.6ug/ml）1ml，置于10 mL 棕色量瓶中，分别取胡椒碱溶液2、10、40、100、200、500ul，加无水乙醇定容，配成浓度分别为0.77、11.31、19.8、26.40、33.00ug/ml的溶液5 份，摇匀，用0.45um 微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液各10ul注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，其浓度（X）为横坐标，得胡椒碱的回归方程为：

Y=393380X-10514，结果表明，胡椒碱在0.77～33.00ug/ml范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。

②精密度试验：精密吸取胡椒碱对照品溶液（19.8ug/ml）10ul，在上述色谱条件下摇匀，用0.45um 微孔滤膜过滤，精密吸取续滤液各10ul注入液相色谱仪，重复进样5 次，测得峰面积，结果测得胡椒碱的平均峰面积为483270，RSD=1.44%，表明精密度良好。

由实验结果可知：每1ml的调血脂药中胡椒碱的含量为22.6ug，经计算可得胡椒碱在调血脂药中的平均含量为1.27mg/g。

（三）讨论

1.（1）从胡椒碱的物理性质可知，其易溶于氯仿、乙醇、丙酮、苯、醋酸中，微溶于乙醚，不溶于水和石油醚。取调血脂药加无水乙醇溶解，超声半小时，过滤。然后加氢氧化钠醇溶液，过滤，滤液中加入等量的水，抽滤得黄色晶体，干燥后得胡椒碱粗体，再加无水乙醇溶解，点样后，有蓝色斑点，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（2）本调血脂药中含九中药材分别为荜茇、决明子、大黄、何首乌、蒲黄、粉葛、黄芪、郁金、天花粉。查药典，可知九种药材的波长：荜茇343nm、决明子284nm、大黄254nm、何首乌320nm、蒲黄254nm、粉葛250nm、、黄芪260nm郁金和天花粉无紫外吸收，所以说明干扰作用的药材可能是何首乌。从图中可以看出，凡含有胡椒碱的试剂都有明显的斑点，而阴性对照则没有蓝色斑点，初步认为此调血脂药中含胡椒碱。喷以10%硫酸乙醇溶液显色剂后，斑点才逐渐清晰起来。此时可判断调血脂药中含胡椒碱。薄层法为简单、方便的鉴别胡椒碱的方法。阴性对照对实验无干扰。

2.（1）提取方法的选择：本实验对样品的提取方法进行了研究，发现胡椒碱在无水乙醇及甲醇中溶解性较好，而无水乙醇毒性小价格便宜，故可采用无水乙醇溶解胡椒碱，另外通过比较超声和回流法发现，虽回流提取率最高，但两者无太大的区别，因此可采用相对较简单的超声方法提取胡椒碱。

（2）波长的选择：通过查阅文献可知，胡椒碱的波长应在343nm处有最大的吸收，通过上述配置溶液的方法，制得胡椒碱对照品溶液，用0.45um 微孔滤膜过滤后，进样，得高效液相色谱峰，在343nm有最大吸收，所以本试验采用波长343 nm 进行含量测定。

（3）流动相的选择：通过查阅药典得知，流动相可用甲醇和水，将可用于实验的色谱纯和哇哈哈纯净水超声过滤之后，用作流动相进行实验，同时，通过进样可知甲醇-水（77：23）能使样品达到很好的分离。

（4）本实验采用高效液相色谱仪进行测定，通过各方法的考察，提高分析的准确度，实验中考察了胡椒碱样品测定的重复性，结果表明胡椒碱保留时间合适，无内源性杂质干扰，重复性好。同时也考察了精密度，也在实验允许范围内，由实验得出高效液相色谱图可知：胡椒碱对照品溶液模拟药溶液、调血脂药供试品、荜茇药材供试品液、在同一保留时间处均有峰，且单一，而阴性对照、溶剂峰在胡椒碱出现处均无吸收，表明此处是胡椒碱的特征峰。确定胡椒碱的特征峰，经过各浓度胡椒碱的配制，进样，得出一系列的色谱峰。

（5）综上所述，本法实验为研究调血脂药调血脂药中胡椒碱的含量测定质量标准提供可靠的方法，可准确的测量出胡椒碱的含量，以及含胡椒碱的调血脂药的合理用药，提供实验数据，为进一步临床研究提供参考。该法测得的胡椒碱的峰面积的参数较多，其结果表明，本法操作简便、准确、重复性好，空白对照无干扰，可用于胡椒碱的质量标准检测。

附录1