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【摘 要】以多种层析方案对体外复性中存在的多种二硫键进行研究，以得出确实有效的融合蛋白质复性方案，成为当今主要医学课题之一。本文通过运用离子交换层析复性进行辅助体外复合性的多重影响进行详细的分析，讨论层析辅助体外复性含有多对二硫键的融合蛋白质复性过程影响因素，以供融合蛋白质的研究起到参考的作用。
【关键词】蛋白质复性；二硫键；融合蛋白质
【中图分类号】R629.7【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-1-135-01
本文通过层析辅助体外复性的多因素为基础，探讨二硫键的融合蛋白质本质。以层析复性介质为理论研究的基础，探求其过程出现的各项变化，作为理论数据为接下来融合蛋白质的深入研究构建理论基础。
1、层析辅助体外复性的多因素影响
1.1上样量
上样量的多少直接导致实验结果的差异。标准上样量的适用范围在20-40ug之间，超过范围，会引发过载现象，也就是说蛋白质的复性率会降低，无法达到实验要求。其原因在于蛋白质具有吸附特性，一旦超载就会对层析柱进行吸附，导致多肤链发生疏水吸附现象，引发蛋白质发生变化[1]。
1.2洗脱液
洗脱液一直作为复性添加剂使用，原因在于洗脱液中含有精氨酸这一蛋白质的主要组成单位，用于蛋白质进行层析介导的小分子辅助，影响辅助体的复性增减。洗脱液中的精氨酸浓度一旦增加[2]，会引起蛋白质的活性反应增强，其中溶栓的浓度也会随着增加。洗脱液的浓度达到0.6至0.9mol /L之间的时候，蛋白质的活性反应达到最强，如果洗脱液的浓度继续增加，会引发蛋白质的活性反应逐步降低的状况[3]。
1.3流速
影响辅助体外复性的因素除了包括上样量与洗脱液之外，流速也是影响融合蛋白质的重要因素之一。经过大量试验取证，只有流速达到0.6ml每分钟时，蛋白质的外复性流速才能达到最佳速度，使蛋白质复性达到标准。如果流速过低，会导致蛋白质的活性降低与吸附的时间变长等问题出现。而流速过高，会致使蛋白质进行吸附的时间变短，导致外复性不足。
2、离子交换层析复性法的优势
Hv12p-rPA蛋白质拥有多对二硫键，以离子交换层析复性法为基础方案进行蛋白质的研究与讨论。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆复性法以蛋白质活性为核心目标，拥有在适宜的蛋白质浓度下出现减少复性时间、增加溶栓与抗凝活性、纯化功能等特性，下面以离子交换层析复性主要具备的优点作为探讨，进行Hv12p-rPA蛋白质的讨论：
2.1电荷作用
变性蛋白质在一定HP条件下会产生电荷，而层析介质则带有相应的反电荷，两者相互吸引，产生吸附现象，这是一种基于特定条件产生的物理现象。与传统的稀释复性相比，离子交换层析复性法对蛋白质的改变更具有良性反应，通过减少疏水现象与改变复性过程达到提升蛋白质活性与速率的效果。
2.2疏水抑制力
脲和洗脱液作为现代的稀释复性添加剂，主要用于蛋白质进行层析介导的小分子辅助。脲具有控制蛋白质疏水现象的功能，其可形成但无法控制蛋白质的疏水现象导致的可溶性寡聚体，而具有相同功效的洗脱液中包含的精氨酸则拥有相反的功能，可以控制但无法形成可溶性寡聚体。通过两者的共同使用，达到两种作用力的相互制约与协作，加强蛋白质吸附特性的疏水抑制力。
2.3脲梯度
脲梯度作为蛋白质的复性过程中关键所在，是影响研究结果的主要因素。脲梯度进行复性层析的过程中，可以在很高浓度的蛋白质中进行复性回收，提高利用率与使用率，并且改变不同浓度的环境参数，使之达到适宜蛋白质折叠复性的标准。同时，适宜的环境参数可以抑制脲浓度的不定性，防止其发生变动，致使蛋白质复性结果出现偏差。
2.4洗脱液中的氧化还原对GSH/GSSG
使用洗脱液的原因除了其具备精氨酸外，还拥有氧化还原对GSH/GSSG。二硫键的融合蛋白质复性过程就是对分子重组的过程，如按照天然结构自行重组，就会引起配对失败与选错配体的问题存在。二硫键的配对是与融合蛋白质相关联的过程，这就需要控制分子重组过程。通过蛋白质的复性过程，进行分子重组，其中，会出现无效配对体，无效配对体会对融合过程产生不可预估的结果干扰，通过使用洗脱液，利用其中的氧化还原对GSH/GSSG，对无效配体进行氧化还原，提高复性成功率，促进配对体的正常配对，使融合蛋白质可以高速而精准的进行复性过程，得到符合试验标准的融合结果。
总结：Hv12p-rPA蛋白质拥有多对二硫键，本文以层析复性介质为基础进行蛋白质的探讨与分析，得出外复性过程中会受到多种因素的影响。通过构建基于离子交换层析复性法得出二硫键的蛋白质复性最佳过程，这种方案对融合蛋白质具有重要的科研价值，值得推广与普及，为医学发展提供有力的后盾支持。
参考文献：
[1]陈凤祥，关波，陈蕴，段作营，金坚，李华钟.共表达蛋白质折叠辅助因子对毕赤酵母分泌表达IFNβ-HSA融合蛋白质的影响[J].食品与生物技术学报，2014，（12）：1246-1250.
[2]朱甫祥，刘泽隆，王笑蕾，缪静，屈慧鸽，迟晓艳.增强的蛋白质反式剪接作用提高肝脏靶向双载体凝血第八因子转基因小鼠的血浆凝血活性[J].中国科学：生命科学，2013，（4）：298-303.
[3]杨茵，陈家良，苏循成.蛋白质顺磁标记技术与生物核磁共振中的赝接触位移[J].波谱学杂志，2014，（2）：155-171.
论文作者:郑帮超
论文发表刊物:《系统医学》2016年1期
论文发表时间:2016/3/25
标签：复性论文; 蛋白质论文; 层析论文; 疏水论文; 过程论文; 浓度论文; 流速论文; 《系统医学》2016年1期论文;