（1.遵义医学院 贵州省基础药理重点实验室 贵州遵义 563003；
2.中国科学院 西北高原生物研究所 青海省藏药药理学和安全性评价研究重点实验室 青海西宁 810001
【摘 要】目的：佐太（β-HgS）和朱砂（α-HgS）配伍民族药，其安全性备受关注，本实验对其量效作用进行了研究。方法：小鼠口服给予不同剂量佐太或HgS（10，30，100，300 mg/kg），HgCl2（33.6 mg/kg），连续7天，检测肝毒性和相关基因的表达。结果：佐太和HgS对小鼠体重和血生化无明显影响，HgCl2则毒性明显，佐太和HgS（除HgS 300 mg/kg外）对肝毒性和应激相关的基因MT-1、MIP-2、Egr1和GST-mu mRNA的表达无明显影响，HgCl2则明显增加其表达。结论：佐太和HgS对肝脏的毒性作用不明显，HgS 300 mg/kg有一定肝毒性，但远小于HgCl2 33.6 mg/kg。因此，参照HgCl2来评价佐太和HgS的安全性是不科学的。
【关键词】佐太；朱砂；HgCl2；量效；肝脏毒性
【中图分类号】R888.72+8【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-07-411-02
藏药是中国的民族药之一。“佐太”是珍宝类藏成药中的核心成分，也称甘露精王[1-2]。佐太至今仍是生产七十味珍珠丸和蒙药等珍宝类药物的必需原料[2，3]，因佐太的主要成分为β-HgS[4-5]，所以佐太在民族药中的安全性一直备受质疑。
朱砂，又称丹砂，是硫化汞的天然矿石，主要成分为α-HgS[5]。据《中国药典》记载，朱砂具有安神、明目、解毒的功效，主要用于失眠多梦、疮疡肿毒等[6]。同样，朱砂的安全性也是关注的焦点[5]。
佐太主要含β-HgS，为黑色粉末，而传统中药朱砂主要含α-HgS，为红色粉末，两者之间的毒性是否相同？剂量决定药物的毒性，佐太和朱砂的临床用量均为10 mg/kg左右，若将佐太和朱砂的剂量增加至其临床用量的30倍，两者是否会出现肝毒性反应？现药品管理对于佐太和朱砂的安全评价基于HgCl2。在等汞条件下，佐太和朱砂的毒性是否能与HgCl2相提并论[7]？
为了回答上述问题，本实验设计了较广范围（10、30、100和300 mg/kg）的佐太和HgS用量，连续给药7天，并与HgCl2进行了比较。
1材料
1.1实验动物
雄性昆明小鼠，20±2 g体重，在SPF级动物房适应性饲养1周后用于实验。
1.2实验药物和试剂
佐太（主要含β-HgS）由中国科学院西北高原生物研究所，藏药研究重点实验室提供；硫化汞（HgS）和氯化汞（HgCl2）购自Sigma；Trizol，PCR引物（大连宝生物工程有限公司）。
High Capacity cDNA Reverse Transcription Kits（美国Applied Biosystems公司）；iQTM SYBR ® Green SuperMix（美国BIO-RAD公司）。
2方法
2.1 动物分组及给药
动物随机分为10组：空白组、藏药佐太和HgS（10，30，100，300 mg/kg）组、氯化汞组33.6 mg/kg，按体重每日口服给药7天。
2.2 一般毒性检测
记录动物体重和肝重，血生化（ALT，AST）和病理检测。
2.3 实时荧光定量RT-PCR法检测
用Trizol提取肝总RNA。NanoDrop检测RNA浓度和纯度，A260/A280均在1.8~2.0，用High Capacity RT 逆转录为cDNA，用IQTM SYBR Green Supermix进行PCR扩增。用Primer3来设计探针，以β-actin做内参基因。用2^^Ct值法计算其扩增效率，比较不同组之间的基因表达差异。
2.4 统计学分析
实验所有结果均以均数±标准差（ ）表示，全部数据采用SPSS17.0软件以单因素方差分析及t检验进行统计学处理，以P＜0.05为有统计学意义。
3 结果
3.1 小鼠灌胃给予不同量的朱砂和佐太，其体重与对照组小鼠无显著差异。佐太组、HgS组血清ALT（谷丙转氨酶）、AST（谷草转氨酶）值与对照组无显著差异，而HgCl2组体重增加迟滞，血清转氨酶有所增高，如表1。病理显示佐太和HgS对肝脏无明显影响，而HgCl2损伤严重，如我们近期的报导一致[8]。
3.2 实时定量RT-PCR法（肝脏损伤基因的表达）
图1 小鼠给予佐太或HgS（10、30、100、300 mg/kg）、HgCl2（33.6 mg/kg）后对金属硫蛋白（MT-1）、炎症基因（MIP-2）、早期应激蛋白（Egr1）、谷胱甘肽转移酶（GST-mu）的表达。*P <0.05，有统计学意义。
如图2所示，与对照组相比，佐太组和HgS组对金属硫蛋白MT-1 mRNA的表达无明显影响，但HgS组100 mg/kg诱导MT-1 mRNA约9倍，HgS组300 mg/kg诱导MT-1 mRNA约15倍，而HgCl2组33.6 mg/kg则明显升高MT-1 mRNA达28倍。
佐太组和HgS组对巨噬细胞炎症蛋白MIP-2 mRNA的表达与对照组相近，HgS组100 mg/kg增加MIP-2 mRNA表达至2.2倍，而300 mg/kg增加至3.5倍，而HgCl2 33.6 mg/kg则增加至5.5倍。
佐太组和HgS组对早期生长应激蛋白Egr1的表达无明显影响，除HgS组300 mg/kg增加Egr1 mRNA的表达约3.9倍，而HgCl2组增加7倍。
佐太组和HgS组对谷胱甘肽转移酶GST-mu mRNA的表达无明显影响，HgS组300 mg/kg对于GST-mu mRNA的表达增高2.2倍，而HgCl2增加4.2倍。
4讨论
本实验表明佐太在较广剂量范围内（高于临床用量30倍）对肝脏无明显毒性，HgS高于临床用量的10倍对肝脏也无明显毒性，但
论文作者:张斌斌,李,欢1,徐尚福1,魏立新2,刘,杰
论文发表刊物:《系统医学》2016年第2卷第7期
论文发表时间:2016/6/24
标签：太和论文; 毒性论文; 朱砂论文; 小鼠论文; 肝脏论文; 基因论文; 用量论文; 《系统医学》2016年第2卷第7期论文;