（1苏州大学附属第一医院临床检测中心 江苏 苏州 215000）
（2苏州大学附属第一医院肿瘤科 江苏 苏州 215000）
【摘要】 目的：分析基于伯乐微滴式数字PCR系统平台检测晚期肺癌患者血浆中游离肿瘤DNA中L861Q突变的检测性能。方法：收集80例晚期肺癌患者穿刺活检样本以及匹配的血浆样本，采用伯乐微滴式数字PCR系统平台检测活检样本以及血浆cfDNA中的表皮生长因子受体L861Q突变情况。结果：80例患者活检组织中伯乐微滴式数字PCR系统平台检测到8例L861Q突变阳性，72例阴性。血浆cfDNA中检测到7例表皮生长因子受体L861Q突变阳性，73例阴性。两种标本检测一致率为87.5%。结论：晚期肺癌患者可采用微滴式数字PCR平台对血液cfDNA中EGFR的L861Q突变进行检测。
【关键词】 微滴式数字PCR；L861Q突变；络氨酸激酶抑制剂
【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）32-0229-01
伯乐微滴式数字PCR系统平台由于其操作简单，检测灵敏度高，可绝对定量等优点日益在分子检测技术中扮演越来越重要的角色[1]。针对表皮生长因子受体阳性的肺癌靶向药物络氨酸激酶抑制剂由于其疗效好副作用小已经成为晚期肺癌患者的首选药物[2]。表皮生长因子的敏感阳性突变有多种变异形式包括点突变，插入缺失突变等。其中L861Q突变几乎占表皮生长因子受体的敏感突变的10%，所以对L861Q突变进行分子检测具有重大临床意义。本研究对80例晚期肺癌患者穿刺活检样本以及匹配的外周血样本在伯乐微滴式数字PCR系统平台上对EGFR的L861Q突变进行检测，并研究相关检测结果，以探讨伯乐微滴式数字PCR系统平台在血液cfDNA中检测L861Q突变的可行性。
1.样本来源及检测方法
1.1 采集病人样本
收集2017年3月—2019年4月期间在苏州大学附属第一医院病理科病理诊断为肺腺癌患者的活检石蜡组织80例，临床分期均为Ⅳ期。80例样本中女性42例，男性38例。平均年龄62岁。同时采集这80例患者的外周血标本。采用10ml的cell free DNA采血管（德国QIAGEN公司）对病人外周血进行收集，外周血在采取后半小时内进行1900g离心，离心时间为11min。小心吸取上层血浆转移至2ml离心管，1800g离心18min，再次小心吸取上层无浑浊物的血浆，并转移至新的2ml离心管，迅速放置于-80度冰箱保存。准备下一步cfDNA的提取。
1.2 提取血液中cfDNA
cfDNA的提取采用cfDNA提取试剂盒（美国Thermo Fisher Scientific公司）。使用qubit进行cfDNA浓度定量（美国Thermo Fisher Scientific公司）。
1.3 L861Q突变检测
采用微滴式数字PCR平台的 QX200 PCR仪（美国Bio-Rod公司）及伯乐公司L861Q突变检测试剂盒检测样本中L861Q突变。参照说明书判断检测结果。
2.结果
2.1 80例肺癌患者cfDNA及对应组织中L861Q突变检测结果：80例晚期肺癌病人穿刺组织样本中采用伯乐数字PCR仪检测到8例L861Q突变阳性，72例阴性。cfDNA中伯乐数字PCR仪检测到7例L861Q突变阳性，73例阴性。穿刺样本和对应的晚期肺癌患者血液中cfDNA突变检测一致率为87.5%。见表。
表 活检组织与血浆cfDNA微滴式数字PCR平台L861Q突变检测结果
3.讨论
近年来，精准医学飞速发展，特别在肿瘤的临床治疗上，随着分子生物学和基因组学的研究不断取得突破性成果，晚期肿瘤病人的治疗手段已经渐渐从单纯的化疗放疗发展到现在的精准治疗时代。而对靶点的精准检测也在精准医学上扮演越来越重要的角色[3-4]。我们使用微滴式数字PCR平台在80例病人血浆cfDNA标本检测到7例L861Q突变，73例阴性；相对应的穿刺样本中检测到8例L861Q突变，72例阴性，一致率为87.5%。这个结果证明微滴式数字PCR平台在cfDNAL861Q突变检测上已经接近了穿刺样本的检测结果，相信在以后随着对cfDNA提取工艺的改进，微滴式数字PCR平台的灵敏度提高，相关靶点检测试剂盒的优化，微滴式数字PCR平台在分子检测上会起到越来越重要的作用。
【参考文献】
[1]陈晨，张岩，李永波，等.微滴式数字PCR对肉制品中羊肉和猪肉定量分析[J].现代食品科技，2018(01).
[2]吴一龙，孙燕，廖美琳，等.EGFR突变型肺癌的处理[J].循证医学，2011(02).
[3]李海霞，王慧娟.EGFR-TKI类药物治疗晚期非小细胞肺癌的研究进展[J].中国现代应用药学，2019(02).
[4]杜丽丽，陆志伟.EGFR-TKI治疗晚期非小细胞肺癌的研究进展[J].科技视界，2018(09).
论文作者:金婕妤1,喻正源2（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2019年32期
论文发表时间:2019/12/12
标签：突变论文; 伯乐论文; 肺癌论文; 数字论文; 样本论文; 晚期论文; 血浆论文; 《医药前沿》2019年32期论文;