王振强１ 崔向荣１,３ 井 宣２ 武学清１ 姜 虹１ 郑 雪１ 郑艳丽１
１．山西省妇幼保健院生殖医学中心 山西 太原 ０３００００;２．山西省人民医院检验科 山西 太原 ０３００００;３．临汾市中心医院检验科 山西 临汾 ０４１０００
【摘要】 目的 探讨不同程度少精症患者精浆中,性激素的变化程度与精浆P５３的相关性.方法 ３８９例研究对象分为正常精液组、轻度少精组、中度少精组、严重少精组,对各组患者行精液常规参数、精子DNA 完整性及精浆性激素与P５３检测.同时就精浆中P５３水平与精浆性激素之间进行相关性分析.结果中度少精组与正常组相比,精浆FSH 显著升高(P＜０．０５),且T水平下降显著(P＜０．０５),严重少精组与正常组相比,精浆FSH 及LH 均显著升高(P＜０．０５),同时T水平下降显著(P＜０．０５).轻、中及严重少精组较正常组精浆PRL均无显著差异,且轻度少精组与正常精液组相比,精浆性系列均无显著差异.严重少精组与正常组相比,精子双链DNA 百分率降低,差异具有统计学意义(P＜０．０５),其余各组与正常组相比,双链DNA 百分率无显著改变.中度少精组、严重少精组与正常组相比,精浆P５３水平显著增高(P＜０．０５),轻度少精组精浆P５３较正常组增高,但差异无显著性.精浆P５３水平与男性精浆FSH 及LH 间存在正相关(P＜０．０５),与精浆T间存在负相关(P＜０．０５),而与精浆PRL间未见相关性(P０．０５).结论 特发性少精症尤其是严重少精症患者,FSH、LH 显著高于正常组,而T 则显著低于正常组,且中、重度少精症患者中精浆P５３显著增高,与精浆FSH 及LH 呈正相关,与T呈负相关,表明精浆性激素引发睾丸生精功能异常可能与精浆P５３增高有关. 【关键词】 精浆; FSH; LH; T; P５３; 男性不育【中图分类号】R６９８【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１０－００９１－０２
１ 资料与方法１．１ 研究对象与分组选取２０１４年５~２０１５年５月于山西省妇幼保健院生殖医学中心就诊的男性患者３８９例为研究对象,男方平均年龄３１．８８４．７１(１８~４６)岁,患者平均射出的精液量为４．６１４．０２(０．８１~５．４２)ml,性功能正常,无慢性炎症、外伤及遗传性疾病家庭史,近三个月无针对精液的药物治疗,除外生活或环境因素有污染、酗酒、吸烟的患者,查体睾丸、附睾及输精管无明显异常,血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、泌乳素(PRL)检查结果正常,体格检查结合精浆果糖、α－葡萄糖苷酶及酸性磷酸酶检测排除梗阻性无精子症患者,经超声检查无精索精脉曲张. 各组患者均连续２次进行精液分析(间隔时间为７天~３个月),根据精液浓度将不孕男性分为４组:正常精液组(浓度≥１５１０６/ml)、轻度少精组(浓度１０~１５１０６/ml)、中度少精组(浓度５~１０１０６/m)、严重少精组(浓度０~５１０６/m).本研究均取得患者本人同意且签署知情同意书,经医院伦理委员会讨论通过.
１．２ 研究方法１．２．１ 精液标本的收集 患者取精前禁欲２~７d,手淫法或电动采精器采集精液于清洁容器中,用去皮称重法计算精液量,于３７℃ 水浴箱内液化３０~６０min,用Ph试纸检测Ph值,通过肉眼比对精液颜色及粘稠度,进而采用西班牙SCA 全自动精液质量分析系统对精液参数进行分析.另取部分精液以４０００r/min离心１０分钟,吸取精浆于－２０℃保存待查.１．２．２ 精液常规指标 采用计算机辅助精液分析(computer－aidedspermaＧnalysis,CASA)系统(西班牙SCA 全自动精液质量分析系统),按照第５ 版?WHO 人类精液检查与处理实验室手册?进行精液质量分析,同时采用改良的巴氏染色法对患者精子进行形态学检查.１．２．３ 吖啶橙染色法检测精子DNA 损伤 按照深圳华康生物医学工程有限公司精子核染色试剂盒的操作说明,对精子DNA 的完整性进行检测.于荧光显微镜(OLYMPUS,BX５１)高倍镜下进行观察,计数２００条精子中绿色(DNA 双链精子)、红色(DNA 单链精子)和橙色(DNA 不稳定精子)精子数.１．２．４ 精浆性激素检测 取部分精液以４０００r/min离心１０分钟,吸取精浆于自动免疫分析仪专用检测杯中,采用AIA－２０００ST 自动免疫分析仪(日本东曹株氏会社)对患者FSH、LH、T、RPL等进行检测.１．２．５ ELISA 法检测精浆P５３ 精液经４０００r/min离心１０min取精浆,按ELISA 试剂说明书进行操作.向预先包被有人P５３单克隆抗酶标孔中加入血清,３７℃温育３０分钟;洗涤后,加入HRP标记过的P５３抗体.再经温育和洗涤,去除未与待检P５３结合的酶,然后加入底物在酸的作下转化为黄色,经北京普朗新技术有限公司酶标仪(DNM－９６０２)检测患者血清中的P５３水平.
１．３ 统计学分析
２ 结果２．１ 各组间精浆性激素水平比较中度少精组与正常组相比,精浆FSH 显著升高(P＜０．０５),且T 水平下降显著(P＜０．０５),严重少精组与正常组相比,精浆FSH 及LH 均显著升高(P＜０．０５),同时T水平下降显著(P＜０．０５).轻、中及严重少精组较正常组精浆PRL均无显著差异,且轻度少精组与正常精液组相比,精浆性系列均无显著差异.
表１ 异常精液组与正常精液组精浆性系列的比较(X±s)
注:与正常体重组比较,?P＜０．０５,?? P ＜０．０１ ２．２ 各组间精子DNA 损伤程度比较严重少精组与正常组相比,精子双链DNA 百分率降低,差异具有统计学意义(P＜０．０５),其余各组与正常组相比,双链DNA 百分率无显著改变. ２．３ 各组间精浆P５３水平比较中度少精组、严重少精组与正常组相比,精浆P５３水平显著增高(P＜０．０５),轻度少精组精浆P５３较正常组增高,但差异无显著性. ２．４ 精浆P５３与精浆性系列的相关性精浆P５３水平与男性精浆FSH 及LH 间存在正相关(P＜０．０５),与精浆T 间存在负相关(P＜０．０５),而与精浆PRL间未见相关性(P０．０５).
注:与正常体重组比较,?P＜０．０５,?? P ＜０．０１ ３ 讨论引发男性不育的因素多样,其中垂体前叶嗜碱性细胞分泌的LH、FSH 对睾丸曲细精管和间质细胞起着重要的调节作用[１].有研究表明,FSH 可促进睾丸间质细胞增生,进而促进雄激素结合蛋白的生成,通过与雄激素结合对雄激素起到稳定和浓集的作用,促进精子发生与成熟[２].LH 可刺激睾丸间质细胞的发育,进而促进T 的合成及分泌,为精子发生与成熟提供所需[３].由于中重度及无精子症患者睾丸组织均存在不同程度的病理性改变,如生精细胞发育障碍、组织纤维化等,进而引发FSH、LH 及T水平出现程度不一的分泌异常,主要表现为FSH 与LH 增高,T水平出现降低[４,５].有文献报导,精浆性激素水平与血清性激素水平存在正相关性,与血清性激素相比精浆性激素更能直接反映精子生长微环境的激素水平变化.
本研究通过不同程度少精症患者及正常精液患者的精浆性激素水平检测及对P５３及双链DNA 完整性比较分析发现中度少精组、严重少精组与正常组相比,FSH 及T均显著下降,且严重少精组较正常组LH 下降显著,轻、中及严重少精组较正常组PRL均无显著差异,且轻度少精组与正常精液组相比,精浆性系列均无显著差异.中度少精组、严重少精组与正常组相比,精浆P５３水平显著增高,轻度少精组精浆P５３较正常组增高,但差异无显著性.精浆P５３水平与男性精浆FSH 及LH 间存在正相关,与精浆T 间存在负相关,而与精浆PRL间未见相关性[６]. 综上所述,精浆中P５３水平的变化与精浆性激素的相关性研究将为提示男性生育力降低的研究拓展又一新的方向.然而就P５３与精浆性激素改变的因果关系尚需进一步探讨.本研究从P５３及精浆性激素水平的相关性提示引发非梗阻性少精症的机制,从而为深入探讨引发男性精子质量降低的因素的研究有较深远的理论和临床意义,同时也为临床从精浆性激素水平来评价睾丸生精功能的应用,奠定了坚实的基础.
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论文作者:王振强１ 崔向荣１,３ 井宣２ 武学清１ 姜虹１ 郑雪１ 郑
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年9月供稿
论文发表时间:2016/2/24
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