（广西壮族自治区贵港市人民医院广西贵港537100）
基金项目：贵港市科技局科研项目：贵科攻关1105024，业字（2011）5号文【摘要】目的：探讨微柱凝胶技术在ABO血型不合新生儿溶血病（Hemolytic disease newbom,HDN）相关实验中与传统试管法的比较研究。方法：对339例母婴血型不合疑似ABO-HDN的新生儿用传统试管法和微柱凝胶法进行直接抗球蛋白试验、游离试验和放散试验。结果微柱凝胶法、试管法检测结果分别为直接抗球蛋白实验结果阳性82例、118例，阳性率24.2%、阳性率34.8%两法有显著性差异（P<0.05）；游离试验阳性239例、202例，阳性率70.5%，阳性率59.6%，两法有显著性差异（P<0.05）；释放试验阳性260例、205例，阳性率76.6%、阳性率61.4%，两法有显著性差异（P<0.05）。结论：直接抗球蛋白实验，传统试管法比微柱凝胶法阳性率更高，灵敏度更高；但在游离试验及释放试验中，微柱凝胶法比传统试管法阳性率更高、灵敏度也更高。微柱法试验操作简便、易于标准化,耗时短,标本用量少,结果直观明了等优点,阳性率高，与临床诊断符合率高，在临床新生儿溶血性疾病的诊断与治疗中有重要意义。
【关键词】新生儿溶血；ABO血型不合直接抗球蛋白试验放散试验游离试验
【中图分类号】R272.1【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2013)10-0497-01
新生儿溶血病（hemolytie diease of the newborn）指母婴血型不合引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病，主要见于O型母亲、A型或B型胎儿，也可见于Rh等血型系统。胎儿或新生儿红细胞被来自母亲的免疫性lgG抗体包被，并在婴儿的单核-巨噬细胞系统内受到免疫性破坏，病情严重程度不同，严重者可胎死宫内，临床上轻微溶血的患儿由血清学试验能检出［1］。本文研究的是，对临床上疑似新生儿溶血病的患儿血样本，分别用微柱凝胶卡式法和传统试管法进行三项试验，并进行对应比较。现将检测结果分析如下：
1材料与方法
1.1研究对象:2010年4月至2012年12月在贵港市人民医院住院因高胆红素血症疑为ABOHDN的患儿共339例，母婴血型为OA者为150例,OB者为177例，AB者为5例，OAB者为7例。
1.2仪器与试剂达亚美恒温空气孵育器，达亚美专用离心机，达亚美微柱凝胶血型卡，低离子抗人球蛋白卡，上海血液生物医药有限公司的ABO标准红细胞，长春博讯生物技术有限公司的酸放散试剂。
1.3方法
1.3.1微柱凝胶法:ABO标准红细胞配制成0.8%～1.0%红细胞悬液待用，取母婴EDTA抗凝全血，1000g离心5分钟，分别进行ABO血型及RhD血型鉴定。（1）直接抗球蛋白试验：①取新生儿离心后压积红细胞，用稀释液配0.8%的红细胞悬液。②将50ul上述红细胞悬液加入微柱凝胶孔，离心10分钟判读结果。（2）游离试验：①取与新生儿同型的A型或B型和O型0.8%的标准红细胞各50ul加入抗人球蛋白卡中，然后各孔加入25ul新生儿血浆。③放孵育器孵育15分钟，机离心10分钟，观察结果。（3）释放试验：①取患儿离心后压积红细胞洗涤4次。②最后一次倾去洗涤液，保留部分上清液，检测是否存在不规则抗体。③在洗涤的细胞中，加入等量的酸放散液，混匀，室温静置1～2，1000g离心2分钟，立即将上清放散液液移入另一干净试管，④在上述放散液中按100ul加入10~16ul的中和液，边加入边观察，至呈现粉红色或肉色，表示PH约（6.5~7.5）。1000g离心1分钟⑤分别取0.8%A或B型和O型红细胞悬液50ul加入抗人球蛋白卡中，各个孔再加入放散液50ul。⑥放孵育器孵育15分钟，离心10分钟，观察结果。
1.3.2试管法:（1）直接抗球蛋白试验：患儿压积红细胞用生理盐水洗涤3次，配成2%红细胞悬液，取小试管两支分别标记：“直抗”、“盐水”，在直抗管中加入50ul的抗球蛋白试剂，然后在两管中各加50ul受检红细胞悬液，混匀后立即以3400转/分1000g离心15秒，判读结果。同时做阴、阳性对照。（2）游离抗体试验：取小试管三支，分别标记“Ac”“Bc”“Oc”,每管加患儿血清100ul,分别加入3%A、B、O型酶处理红细胞悬液50ul，37℃水浴1小时后取出，若凝集，证明存在抗体。若不凝集，生理盐水洗涤3次，在各管中加入抗球蛋白试剂50ul，以3400转/分离心15秒，观察结果。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆（3）放散试验（热放散法）取压积红细胞1ml，用生理盐水洗涤3次，加入等量的生理盐水，置56℃水浴箱中9分钟，期间不断振摇以充分混匀，取出放入置有56℃热水的离心套管中，迅速以3400转/分1000g离心1分钟，取上清放散液分成三份于3个标有“A”、“B”、“O”小试管中，加入相应的A、B、O红细胞各50ul，置37℃水浴30分钟，用生理盐水洗涤3次，每管加入抗球蛋白试剂50ul，以3400转/分1000g离心15秒，观察结果。
2结果
新生儿溶血病血清学检查结果分析（ABO－HDN）
直抗试验游离试验释放试验抗体筛选结果判定意义
+/- + + -/+ 证实 ABO－HDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体
+/- - + -/+ 证实 ABO－HDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体
+/- - + -/+ 证实 ABO－HDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体
+ - - - 可疑可疑ABO－HDN
－ + - - 可疑可疑ABO－HDN
－ - - - 无法证实血清学试验未能证实可疑ABO－HDN
339例新生儿溶血三项检测微柱法和试管法的结果比较
试验项目微柱凝胶法试管法
阳性（例）百分率（%）阳性（例）百分率（%） 直接抗球蛋白试验8224.211834.8 游离试验23970.520259.6 放散试验26076.620861.42.1微柱凝胶法与传统试管法的直接抗球蛋白实验结果：微柱凝胶法进行直接抗球蛋白试验结果阳性82例。试管法进行直接抗球蛋白试验结果阳性118例。阳性率分别为24.2%和34.8%，两种方法试验结果阳性率采用卡方检验进行比较，经计算P=0.0024,（小于0.05）两种方法差异具有显著性意义。
2.2微柱凝胶法与传统试管法的游离试验实验结果：微柱凝胶法进行游离试验结果阳性239例，阳性率70.5%。试管法进行游离试验结果阳性202例,阳性率59.6%。两种方法试验结果阳性率采用卡方检验进行比较，经计算P=0.0029，（小于0.05）实验结果表明，微柱凝胶法敏感度高于传统试管法，阳性率高于传统试管法，两种方法差异具有显著性意义。
2.3微柱凝胶法与传统试管法的放散试验实验结果：微柱凝胶法进行放散试验结果阳性260例，阳性率76.6%。试管法进行放散试验结果阳性208例，阳性率61.4%。经计算P=0.000016（小于0.05）.实验结果表明，在具有确诊意义的放散试验中，微柱凝胶法敏感度高于传统试管法，阳性率高于传统试管法。两种方法差异具有显著性意义。
3讨论
母亲对异己性抗原产生免疫反应，产生相应的IgG类抗体，与已被致敏的胎儿红细胞结合，引起胎儿溶血。大量溶血造成贫血，甚至导致心力衰竭；因胎儿严重贫血、低蛋白血症和心力衰竭而导致全身水肿；贫血使髓外造血组织代偿性增生、出现肝脾肿大；娩出时黄疸往往不明显，但很快出现并迅速加重。溶血产生的大量未结合胆红素可通过血脑屏障使脑神经核黄染，产生神经系统症状，出现胆红素脑病。根据实验结果的综合情况可以做出新生儿是否存在溶血的判断［2］。在母婴ABO或RhD血型不合引起的新生儿溶血病时，微柱凝胶检测方法更有利于临床及时对患儿的诊断和治疗。
婴儿红细胞表面A、B抗原发育不完全，到出生时仍然较弱，抗原数量为成人的25%~50%，因此，结合的免疫性抗体相对少［3］。而对于多特异性和单特异性抗球蛋白，每个细胞至少要包被200~500分子才能被检测出来［4］。在339有临床症状而临床怀疑为新生儿溶血病患儿标本。用微柱凝胶法和传统试管法进行试验，试验结果表明直接抗球蛋白试验阳性率最低，但是试管法的抗人球蛋白试验阳性率（34.8%）比微柱凝胶卡的要高（24.2%），经分析认为试管法中对婴儿的红细胞洗涤，红细胞表面抗原充分暴露，去除其他成分的干扰。使得反应更充分。而在游离试验和放散试验时，微柱凝胶卡阳性率远高于试管法试验的阳性率。两种方法差异有统计学意义。但是试管法操作复杂繁琐，耗时长，受干扰因素较多，酶处理反应过程中易出现假阴性，假阳性结果，56℃水浴时温度不易控制，试验结果判断时受个人主观因素影响，不能及时给临床提供诊疗结果。而微柱凝胶法整个操作过程简便，耗时短，易于标准化，试验结果直观明了易于判断，并且试验结果可以图像的形式保存于电脑系统中，便于日后查阅对比。微柱凝胶法在新生儿溶血病检测中阳性率高，并且阳性结果与患儿临床表现符合率高，简便快捷，能够及时的配合临床医生做出准确的诊断，及时的对患儿进行相应的治疗。在临床新生儿溶血病的诊断治疗中有重要的意义，适用于临床推广应用。
参考文献
［1］叶应妩，王毓三，申子瑜. 全国临床检验操作规程（第3版）［M］.南京：东南大学出版社，2006:266.
［2］李勇,马学严主编.实用血液免疫学(血型理论和实验技术)［M］.北京：科学技术出版社,2006: 419420.
［3］高峰.临床输血与检验(第2版)［M］.北京：人民卫生出版社，2007:68.
［4］徐树良，田爱民，陈军浩,等.流式细胞术检测抗体致敏红细胞方法的建立及初步应用［J］.中国输血杂志，2002,15（2）：98101.
论文作者:马吉联林就孟黄向华梁金凤黄敏菁姜设初赖春征
论文发表刊物:《河南中医》2013年10月第2期供稿
论文发表时间:2014-3-19
标签：试管论文; 凝胶论文; 红细胞论文; 球蛋白论文; 新生儿论文; 阳性论文; 阳性率论文; 《河南中医》2013年10月第2期供稿论文;