（中国药科大学药剂学教研室；江苏南京210009）
【摘要】目的：研制丹参素磷脂复合物速释微丸，提高丹参素的口服生物利用度。方法：首先将丹参素和大豆磷脂制备成复合物，接着采用挤出滚圆法制备丹参素和磷脂复合物速释微丸。以家兔为研究对象，随机分为实验组和对照组。实验组给予磷脂复合物速释微丸，对照组给予丹参素速释微丸。给药剂量均为40 mg/kg。结果：家兔体内药动学研究表明丹参素制成磷脂复合物后，Cmax和AUC0-t分别提高了100.62%和79.25%。结论：DSS-PC可以显著提高丹参素的口服生物利用度，有较好的应用价值。
【关键词】：丹参素；磷脂复合物；速释微丸；药动学
[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2019）04-0254-02
丹参是治疗心绞痛的一线中药，具有增强心肌收缩力，扩张血管，抗血栓形成等药理活性。临床上，常与其他药材配伍使用，实现多靶点协同治疗的优势。丹参素 (DSS) 是丹参的主要活性成分之一，能够有效减少心肌梗死的范围；减少心肌酶的释放；清除自由基保护心肌细胞。研究表明DSS难以通过细胞膜的脂质双分子层，口服生物利用度只有11%左右，影响了药效发挥。为了提高DSS口服生物利用度，可将其制成磷脂复合物（DSS-PC）。同时，为了提高给药顺应性，我们将其制成微丸。
1.仪器与材料
DSS（98.0%，南通飞宇生物）；大豆磷脂（上海太伟药业）；微晶纤维素（ph101）；LC-10A高效液相（日本岛津）；溶出仪（天大天发）；紫外分光光度计（上海尤尼柯）；挤出滚圆机（辽宁沈阳）。
2.实验方法与结果
2.1DSS含量的紫外分光光度分析法建立
DSS检测波长280 nm,辅料不干扰DSS含量测定。在20-70 mg/L的浓度范围内，DSS的浓度-吸光度回归方程为A = 0.01111C + 0.01247（R2 = 0.9997）。精密度与回收率的RSD%均在2%以内。
2.2DSS含量的体内HPLC分析法建立
色谱条件：Agilent XDB-C8（5μm, 250 mm×4.6 mm, Agilent, USA）；流动相：甲醇：1 % 冰醋酸水溶液（12 : 88，v/v），检测波长：280 nm。
结果表明，血浆内源性物质不干扰DSS含量测定。以DSS浓度倒数为加权系数，DSS和内标原儿茶醛峰面积比Y对DSS浓度X进行线性回归，得方程y=0.205x+0.044（r=0.995），DSS在0.04-4 μg/mL内线性关系良好。精密度和回收率的RSD%均在10%以内，符合生物样品含量测定要求。
2.3磷脂复合物制备工艺优化
DSS不溶于氯仿，而DSS-PC在氯仿中有很好的溶解性，因此可以利用溶解度差异测定药物的复合率。将一定量的DSS和磷脂用合适的溶剂溶解后，在45℃水浴振荡器中反应一段时间，旋蒸蒸发除尽反应溶剂，加入适量氯仿，充分溶解磷脂及复合物，3000 r/min离心10min，收集沉淀，干燥至恒重，称重，即为未复合的DSS。复合率计算公式为：
C= C : 复合率，A1：DSS的初始投药量，A2：沉淀量。
2.3.1反应溶剂考察
固定反应时间2 h，DSS质量浓度40mg/100mL，投料比磷脂/丹参素为2（质量比），，考察四氢呋喃、氯仿、乙醇和甲醇作为反应溶剂对复合率的影响。结果见表1，甲醇为最佳反应溶剂，复合率高达89.17%。
2.3.1正交试验
根据单因素考察的实验结果，选择最佳反应溶剂为甲醇，以复合率为考察指标，采用L9（34）表考察反应时间（A）、药物/磷脂质量比（B）和药物反应浓度（C）对DSS-PC复合率的影响。因素A水平为2,2.5,3h，因素B水平为1:2, 1:2.5,1:3，因素C水平为40,45,50 mg/100 mL。由表2可知，DSS-PC最佳制备工艺组合是A3B3C2，反应时间3h，DSS与磷脂投料比为1:3，DSS反应浓度为45 mg/100 mL。由极差值可以看出，以上三个因素对于DSS-PC结合率的影响次序依次为反应时间＞投料比＞药物反应浓度。
2.4溶出度
根据中国药典（2015年版）附录中有关浆法规定进行，转速为(75±1) r·min-1，温度为（37±0.5）℃，溶出介质为900 mL pH 6.8 PBS。分别于10,20,30,45,60,90,120 min取样5 mL，过0.45 μm滤膜，同时补充等体积同温新鲜介质。取续滤液于280 nm检测波长处测定吸光度，代入相应标准曲线方程，计算累积溶出度。
2.5速释微丸制备工艺
采用挤出滚圆法将DSS-PC制备成速释微丸。将DSS-PC和辅料按一定比例过80目筛混匀，加入润湿剂制成软材。将软材置于挤出机内，在一定的挤出速度下挤出物料，再将挤出物在一定速度下滚圆适当时间，最后将微丸在烘箱中40℃干燥至恒重，过筛网，收取20-30目微丸。
2.5.1润湿剂的考察
首先固定DSS-PC和微晶纤维素质量分数分别为20%、80%，考察纯水和一系列浓度乙醇（乙醇/水，v/v）作为润湿剂时，对挤出物以及微丸收率的影响。结果表明，纯水制备的软材粘度过大，无法滚圆成微丸。10%体积分数的乙醇做润湿剂，制备的微丸收率最高，制备过程中细粉较少。
2.5.2 最佳处方筛选
为了改善微丸的崩解时限，促进DSS从微丸中快速溶出，筛选了多个制备处方，确保微丸收率和溶出度都符合要求。结果见表4和图1，使用5% 的羧甲基淀粉钠和5 % kollidon? CL-SF作为混合崩解剂时，微丸的溶出速度最快，30min时，溶出度超过85%。并且使用该处方（F5）制备的微丸收率较高，为64%。因此，选定F5为最佳制备处方。
图1. 不同处方制备的速释微丸溶出度曲线（n=3）
2.6 血浆样品前处理
精密吸取血浆样品200 μL于离心管中，加入20 μL原儿茶醛内标（0.16 μg/mL），涡旋30s混匀。加入100 μL的3 mol/L的HCl溶液，再加入800 μL乙酸乙酯，涡旋3 min，6000 r/min离心10 min，吸取上清液至另一干燥离心管中,35℃氮气吹干，加入200 μL的甲醇溶液振荡10 min，12000 r/min离心10 min，取上清液直接进行HPLC分析。
2.7 药动学研究
健康雄性家兔（体重2.0±0.5 kg）12只，随机均分两组。对照组和实验组分别口服给予实验室先前研制的DSS微丸[5]和上述DSS-PC微丸，剂量为40 mg/kg。 家兔给药前禁食12 h，耳缘静脉取血1mL保存于润过肝素钠的EP管中，取样时间点分别为0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8、10 和12 h。血样6000 r/min离心10 min，吸取上层血浆至另一干燥离心管中，按照2.6方法处理，测定每个时间点血药浓度，以时间t 为横坐标，以血药浓度均值C为纵坐标，绘制血药浓度-时间曲线。由图2和表5可知，相比DSS微丸，家兔口服DSS-PC微丸后的Cmax和AUC0-t分别提高了100.62%和79.25%。说明DSS制备成DSS-PC后生物利用度显著提高。
参考文献
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论文作者:唐瀚 刘建平通讯作者
论文发表刊物:《医师在线》2019年2月4期
论文发表时间:2019/4/11
标签：丹参论文; 磷脂论文; 复合物论文; 浓度论文; 家兔论文; 收率论文; 时间论文; 《医师在线》2019年2月4期论文;