何艳 李俊军
（中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院<湖南省肿瘤医院> 湖南长沙 410000)
【摘要】目的：分析组织切片免疫组化定量受到苏木素复染的影响，以期为组织切片免疫组化定量分析的质量控制提供参考依据。方法：选取肺癌组织40例，分为苏木素复染组与未复染组，应用免疫组织化学法检测切片中CK、Ki-67的表达，在阳性区域随机截取样品显色反应细胞图像，分析测试两组组织切片中CK、Ki-67蛋白表达的PU值。结果：两组的CK蛋白在肺癌组织中均表达于癌细胞胞浆中，Ki-67蛋白均表达于癌细胞核中；苏木素复染组的显色反应均呈棕黄色或棕褐色，未复染组均呈黄色、棕黄色或棕褐色；苏木素复染组的CK、Ki-67显色反应均较深。对比两组CK蛋白在肺癌细胞胞浆中表达的FU值，差异显著，有统计学意义（P<0.05），相对偏差为19.1%；对比两组Ki-67蛋白在肺癌细胞核中表达的FU值，差异显著，有统计学意义（P<0.05），相对偏差为30.3%。结论：经苏木素复染后，CK、Ki- 67的PU值均明显增大，对组织切片免疫组化定量的分析结果造成了一定的影响，因此，进行组织切片免疫组化定量分析时，不可进行苏木素复染。
【关键词】组织切片；免疫组化定量分析；苏木素复染；影响
【中图分类号】R394 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）13-0096-02
医学界中对免疫组化定量分析的重视度逐渐提升，大量临床实践与理论研究表明，免疫组化定量分析的结果与组织切片中含有的抗原浓度有密切关联，但因为染色与分析标准的差异性，在不同的实验室进行免疫组化定量分析，其结果也会有一定的差异[1]。免疫组化定量分析理论明确表示，在进行免疫组化定量分析时，组织切片不可进行苏木素复染。基于此，为了进一步探讨组织切片免疫组化定量受到苏木素复染的影响，本研究应用CK、Ki-67对肺癌组织切片进行免疫组化定量分析，分别测试苏木素复染及不复染时CK、Ki-67蛋白表达的PU值。现在将对比结果进行如下详细报告。
1.资料与方法
1.1 临床资料
选取肺癌组织40例，分为苏木素复染组与未复染组。
1.2 方法[2]
鼠抗人广谱细胞角蛋白CK单克隆抗体，鼠抗人Ki-67单克隆抗体，即用型二步法免疫组化广谱检测试剂盒与DAB显色试剂盒都由北京中衫金桥生物技术有限公司生产。对肺癌组织进行常规石蜡包埋，连续切片4张，其中2张进行CK免疫组化染色，另外2张进行Ki-67免疫组化染色。所有组织切片均放于65℃温箱中2～3h；石蜡切片脱蜡后水化；用柠檬酸钠修复液高压修复3min；用过氧化物酶阻断液室温下孵育10min；滴加CK、Ki-67并湿盒内4℃冰箱过夜；生物素标记的二抗室温下孵育30min；新配制的DAB溶液显色3～5min。苏木素复染组进行苏木素复染1min；未复染组不进行复染。梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片。
1.3 结果观察与定量测试[3]
用Nikon 显微镜通过Canon 数码像机与Zoom Browser Ex采图软件于40倍物镜下免疫组化反应阳性区域随机截取组织切片图像，各组组织切片选择6个显色反应细胞视野，各个视野随机测试20个显色反应细胞，各组组织切片共测试120个显色反应细胞。用Image-pro Plus图像分析软件依次测试各个显色反应细胞的灰度值Gα，并在对应的细胞旁测试其背景灰度值Gβ，取平均值，按照公式：PU=100x（Gα-Gβ）/Gmax测算各个显色反应视野的PU值，取平均值作为组织切片的PU值；本研究测试软件的Gmax为256。按照公式：相对偏差=100×（复染后PU值-复染前PU值）/复染前PU值。
1.4 统计学方法
运用SPSS11.0统计软件进行数据分析，计量资料用(x-±s)表示，组间比较采用t检验，计数资料采用χ?检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
2.结果
2.1 免疫组化结果
苏木素复染组：CK在肺癌组织中表达于癌细胞胞浆中，Ki-67在肺癌组织中表达于癌细胞核中，均呈棕黄色或棕褐色。未复染组：CK在肺癌组织中表达于癌细胞胞浆中，Ki-67在肺癌组织中表达于癌细胞核中，均呈黄色、棕黄色或棕褐色。相比于未复染组，苏木素复染组的CK、Ki-67显色反应均较深。详见表1所示。
表1 两组的免疫组化结果对比(x-±s)
3.讨论
免疫组化结果的分析方法有三种，分别是定量分析、定性分析、半定量分析[4]。阳性单位（FU值）是免疫组化染色强度定量分析的评价指标，可有效预防定性分析中的主观性，它不受限于图形分析软件中灰度的设置与分级。免疫组化染色的显色部位有核、胞浆、包膜三种。苏木素复染的显色部位主要集中于细胞核与细胞胞浆中。对组织切片免疫组化染色进行过苏木素复染，能在很多程度上提高结果的定性观察。但在免疫组化结果显色强度的定量分析过程中，免疫组化定量分析理论指出，苏木素复染会对免疫组化结果的准确度造成一定的影响。国外也有研究学者认为，苏木素复染会到免疫组化定量分析结果产生影响，甚至会出现与实际相反的结果[5]。
本研究应用阳性单位作为评价指标，对苏木素复染组与未复染组的免疫组化定量测试结果进行对比，结果显示：苏木素复染组CK蛋白在肺癌细胞胞浆中表达的FU值明显大于未复染组；苏木素复染组Ki-67蛋白在肺癌细胞核中表达的FU值明显大于未复染组，复染后相对偏差分别为19.1%、30.3%。另外，本研究结果还显示：相比于未复染组，苏木素复染组的CK、Ki-67显色反应均较深。由此表明，在组织切片免疫组化定量分析中，苏木素复染会对增加显色反应强度，且相对偏差较大，会对免疫组化结果的准确度造成一定的影响。
综上所述，苏木素复染会对组织切片免疫组化定量的分析结果造成影响，不宜复染。
【参考文献】
[1]郭林芝，李灵敏.大鼠脑组织石蜡切片免疫组化的体会[J].山西医科大学学报，2013(4):311-312.
[2]雷斌，徐小艳，申洪.苏木素复染对组织切片免疫组化定量分析的影响[J].中国体视学与图像分析，2012(3):215-218.
[3]李玉梅，万里燕，申洪.苏木素复染对免疫组化显色强度定量分析的影响[J].热带医学杂志，2011(5):553-555.
[4]窦东伟，李裕波，苏卡.肝组织石蜡切片8-OHdG免疫组化方法的研究[J].广西医科大学学报，2011(3):352-354.
[5]Brey E M，Lalani Z，Johnston C，et al.Automated selection of DAB-labeled tissue for immunohistochemical quantification[J].Journal of Histochem Cytochem， 2003，51(5):575-584.
论文作者:何艳,李俊军
论文发表刊物:《心理医生》2015年13期供稿
论文发表时间:2016/4/29
标签：苏木论文; 免疫论文; 切片论文; 显色论文; 定量分析论文; 组织论文; 肺癌论文; 《心理医生》2015年13期供稿论文;