浏阳市疾病预防控制中心 湖南浏阳 410300
【摘 要】目的：建立一种应用高效液相色谱法结合固相萃取测定尿液中苯酚含量的方法。方法：待测尿液经酸热解后用Waters Oasis HLB固相萃取柱纯化富集，以甲醇洗脱定容，采用SymmetryShield RP18为分析柱，荧光检测器（λ激发=270nm，λ发射=295nm）进样检测，保留时间定性，外标工作曲线定量。结果：实验表明，苯酚在SymmetryShield RP18分析柱上能得到很好分离，在0~250μg/L线性范围内，相关系数R2>0.9999，检出限0.4μg/L，当样品添加浓度在30~120μg/L时，方法回收率在91.17~100.33%。结论：本法样品前处理自动化程度高，具有理想的线性范围、灵敏度、准确度和精密度，是一种有效可行的尿酚测定方法。
【关键词】高效液相色谱法；固相萃取；荧光；尿酚
苯酚是苯在人体内的代谢产物之一，随尿液排出体外，尿中苯酚的排出量反映出接触苯的程度，可作为监测苯接触者的常用指标。目前尿中苯酚的卫生推荐标准检测方法为分光光度法、气相色谱法，其中分光光度法需蒸馏、气相色谱液晶柱法柱子不易平衡，耗时，不适用于大批样品分析，气相色谱FFAP柱法，TMax=195℃，而柱温要求165℃，很容易造成柱流失，影响分析结果[1]。因此，研究建立利用高效液相色谱适用于检测分子量较大、沸点高、热稳定性差的有机物［2］，荧光检测器的高灵敏度，结合固相萃取法相对传统液-液萃取法不发生乳化现象、自动化程度高、萃取效率高等优势，对尿中苯酚进行分析的方法，具有一定的现实意义。
1、材料与方法
1.1试剂
甲醇（HPLC纯，默克）、乙酸按（优级纯、国药集团）、盐酸（优级纯，衡阳凯信）、苯酚/邻甲酚/间甲酚/对甲酚标准溶液（单标，100μg/mL，甲醇介质，北京坛墨质检科技有限公司），临用前用甲醇稀释所需浓度、超纯水、苯接触人群混合尿、无苯接触人群混合尿等。
1.2仪器
高效液相色谱仪（e2695，荧光检测器2475，SymmetryShield RP18分析柱，Waters）、固相萃取仪（ASPEC GX-271/406，吉尔森）、Waters Oasis HLB 固相萃取柱、明澈超纯水系统（美国密理博）、1000μL移液器（德国VitLab）、微孔滤膜过滤器（津腾）、各类玻璃容器（用前120℃烘烤1小时，冷却至室温）等。
1.3样品前处理
取适8mL待测尿液（取样前需混匀尿液，使所有沉淀物物混悬）置于25mL比色管中，加入2mL盐酸，混匀，加塞，于90℃水浴恒温1h后取出冷却至室温[3 ]，加纯水至10.0mL，混匀后转置于固相萃取仪专用样品管中，放于仪器指定样品位，设置好固相萃取仪工作参数，执行自动萃取程序，收集洗脱液于5mL玻璃容量瓶中，甲醇定容。工作参数如下：
活化上样淋洗洗脱
甲醇5mL，超纯水5mL，流速5mL/min根据样品中苯酚含量而定，一般5mL，流速5mL/min10%甲醇溶液，10mL，流速5mL/min甲醇溶液，4.5mL，收集洗脱液于5mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，流速5mL/min
1.4色谱条件
色谱柱：SymmetryShield RP18（5μm）；流动相：纯甲醇/乙酸铵（30mmol/L），体积比：75/25；流速：0.8mL/min；荧光检测器：激发波长270nm，发射波长295nm；柱温35℃，定量方式：峰面积。
此外放置色谱叠加图谱
3、结论
本文采用高效液相色谱结合固相萃取测定尿液中苯酚的含量，通过对方法线性范围、检出限、精密度、准确度、加标回收率、干扰试验等进行研究，结果证明该方法是有效可行的，其样品前处理自动化程度高，具有理想的灵敏度、准确度和精密度，适合尿样中苯酚含量的检测。
参考文献
[1]李玉琴．尿中苯酚的气相色谱测定方法[J].职业与健康，2002，18（2）：49-49
[2]孙剑辉，冯精兰，孙瑞霞． 水体有机污染物的研究进展［J］． 中国环境监测，2003，19（6）：58-61．
[3]WS/T49-1996. 尿中酚的气相色谱测定法（一）液晶柱法[S] .
论文作者:赵少华,马丽蓉
论文发表刊物:《航空军医》2017年第7期
论文发表时间:2017/6/21
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