（1苏州大学附属儿童医院新生儿科 江苏 苏州215000）
（2徐州医学院附属医院儿科 江苏 徐州 221002）
【摘要 目的：研究神经肽Y2受体（NPY2R）在癫痫幼鼠脑组织表达及银杏叶提取物（EGb）对其学习记忆的影响。方法：选取21日龄SD大鼠80只，随机分为5组，16只/组，采用戊四氮(PTZ)进行点燃模型的建立，并腹腔注射EGb，观察大鼠学习记忆及其NPY2R的变化情况。结果：各组治疗前后大鼠电迷宫试验达标电击次数相比差异显著（P<0.05）。各组的NPY2R表达量相比，差异显著，且表达量随着治疗时间的延长出现下降(P<0.05)。结论：EGb可以明显改善癫痫幼鼠的学习记忆，但无治疗时间依赖性，可能与EGb下调反复癫痫发作后NPY2R表达有关。
【关键词】 银杏叶提取物；学习记忆；神经肽受体2
【中图分类号】R33 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）35-0118-01
癫痫是慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征，抗癫痫药可导致学习记忆的障碍。本实验选择了发育期大鼠进行研究，探讨NPY2R在癫痫幼鼠脑组织表达及EGb对其学习记忆的影响，为癫痫儿童的临床治疗提供依据。
1.材料和方法
1.1实验材料 选取80只21日龄雄性Sprague Dawley（SD）幼鼠，体重55～95g。仪器选择产自张家港生物医学仪器厂的Y型电迷宫；试剂为富伟生化制品有限公司生产的EGb及Sigma公司生产的戊四氮。
1.2方法
1.2.1动物模型的建立 采用PTZ(35mg/kg·d)对大鼠进行腹腔注射。停药7天后，采用PTZ进行测试，剂量同前。癫痫发作行为按Racine标准分为6级。
1.2.2分组及用药治疗 将大鼠随机分为生理盐水组(A组)、点燃对照7天组(B组)、点燃对照14天组(C组)、EGb治疗7天组(D组)、EGb治疗14天组(E组)，每组16只。B-E组均用PTZ（35mg/kg）进行腹腔注射，1次/d，注射28天;对照组用生理盐水，用法及剂量同B组、C组。建立模型后,治疗组予EGb加乙醇制备成10%的混悬液以300mg/L灌胃，给药7天，E组以等体积的生理盐水灌胃，1次/d，连续7天和14天。
1.2.3学习记忆功能训练并评定 ①初筛：在Y型迷宫箱中放入大鼠，3min后进行电击,取反应灵敏者进行测试。②训练及评定：训练次数及休息时间不固定，随时对大鼠足底进行电击，通电后，正确为进入安全区的时间不超过15s，学会标准为10次电击中超过9次能一次性进入安全区，大鼠学习记忆成绩为大鼠的学会标准次数，训练1日。训练次日、治疗7天后、14天后评定大鼠的认知功能。
1.2.4取材及免疫组化 大鼠用4%多聚甲醛进行灌注，进行切片，片厚5μm，每例标本不少于5张，常规处理切片后，加入一抗NPY2R4℃过夜。次日加入二抗及辣根，DAB显色，对照组用PBS缓冲液代替一抗。脑片的选取：选定海马CA1、CA3等部位，各脑区选取4个视野，测量NPY2R数量。
1.2.5统计学处理 采用SPSS16.0软件进行统计学处理，P<0.05差异有统计学意义。
2.结果
2.1 EGb治疗前后的学习记忆功能 治疗前，B组、C组与A组相比，达到学会标准所需的电击次数明显增多(P<0.05)。治疗后，A组、B组、C组治疗前后比较差异无显著性(P>0.05)，D组、E组出现显著差异，与其它组相比，达标次数明显减少(P<0.05)。（表1）。
2.2 NPY2R在EGb治疗前后的表达 如图1所示，在脑组织中，NPY2R在海马区、皮质区显示为大小不一的圆形及梭形，提示出现阳性反应突起，少量棕黄色颗粒分布于细胞间隙。表达量中，各组比较差异显著(P<0.05)；治疗后，CA3区、CA1区、齿状回及皮质的表达量增多(图1，表2)。
3.讨论
EGb能够改善β-淀粉样蛋白致阿尔茨海默病大鼠的学习记忆。本实验选用300mg/kg·d的EGb，给予7d、14d治疗，研究结果显示，大鼠的记忆能力与EGb的治疗时间有关，表明EGb能够改善大鼠的学习记忆损害。
NPY是在中枢神经系统中含量丰富，主要分布在海马、皮层等处，尤其是在海马内浓度较高。本次研究中，采用PTZ建立点燃后，NPY2R表达量的增多部位为海马CA1区、额叶皮质、CA3区、齿状层，且在海马齿状回表达最高，CA1、CA3逐渐减少。
Y2受体是突触前受体，能够调控学习记忆过程。本次实验中，经PTZ点燃后，大鼠的学习记忆出现下降的趋势，NPY2R表达量出现显著增高，可见NPY2R不仅能够对癫痫发作进行抑制，还影响发作后的学习记忆能力。而EGb能够抑制癫痫发作后NPY2R的表达量，对学习记忆能力具有保护作用。
【参考文献】
[1]Kaga T,Fujimixam,Jnui A,et a1.Emerging functions of neuropeptide Y Y(2) receptors in the brain[J].Peptides,2001,22(3):501-560.
论文作者:耿海峰, 袁宝强
论文发表刊物:《医药前沿》2015年12月第35期
论文发表时间:2016/5/3
标签：大鼠论文; 记忆论文; 癫痫论文; 受体论文; 差异论文; 生理盐水论文; 腹腔论文; 《医药前沿》2015年12月第35期论文;