长沙市第三医院泌尿外科 湖南长沙 410015
【摘 要】目的：在通过免疫组化的方法分析Aurora A基因膀胱中的表达情况，以探索其在膀胱癌发生发展中的作用和机制。方法：收集膀胱癌标本40例，以20例无瘤膀胱组织作为对照组。通过免疫组化的方法分析Aurora A基因的表达情况。结果：膀胱癌组织与正常膀胱组织之间Aurora-A的表达水平存在显著差异。非肌层浸润性膀胱癌组织与肌层浸润性膀胱癌组织之间Aurora-A的表达水平存在显著差异。结论：Aurora A在膀胱癌组织中与正常膀胱组织中的表达率差异有显著性，可见膀胱癌的发生可能与Aurora A的增殖有密切关系。Aurora A在膀胱癌组织中存在高表达，并且其表达与膀胱癌的分化程度和浸润程度相关。
【关键词】Aurora A 膀胱癌；免疫组化
在我国，男性膀胱癌发病率位居全身肿瘤的第八位，女性排在第十二位以后[1]。Aurora蛋白激酶家族，在细胞的有丝分裂期发挥着重要作用。目前分为3种即Aurora A、Aurora B、Aurora C[2]。其中Aurora A定位于中心体和纺锤体，主要参与中心体的复制、成熟、分离和纺锤体形成。此外Aurora A可以参与p53通路的调节，细胞凋亡和分裂之间平衡的调节等。本试验的目的在通过免疫组化的方法分析Aurora A基因的表达情况，以及与病理分型、分化程度、临床进展的关系，以探索其在膀胱癌发生发展中的作用和机制。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2009年12月-2014年12月长沙市三医院手术治疗的膀胱癌标本40例，经病理检查证实为膀胱移行细胞癌组织。以20例无瘤膀胱组织作为对照组，亦经病理证实为无瘤膀胱组织。40例患者中男35例，女5例，年龄19-85 岁，平均59岁。临床分期按国际抗癌协TNM 标准：Ta-T1期20例，T2-T4期20例。
1.2 方法
免疫法是将带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的显色反应。抗体和靶抗原结合之后，形成抗原抗体复合物，如将抗体与某种显色剂偶联，抗原抗体复合物即可成为在显微镜下可见的图像，从而可以确定组织中是否存在某种抗原。本实验中应用辣根过氧化物酶标记己知抗体，然后与组织标本在一定条件下反应，如果组织中含有相应抗原，则抗原抗体相互结合，形成的复合物中所带酶分子遇到底物时，能催化底物水解、氧化或还原，产生显色反应，这样就可以识别出标本中抗原分布的位置和性质，在光镜或电镜下进行定性、定位或定量观察。以胞浆中棕黄色颗粒为阳性信号。随机选取4个高倍视野，每个视野计数200个细胞，阳性细胞≤0为-，<25%为±，25%-50%为+，>50%为++。实验结果采用SPSS11.5软件中的卡方检验进行分析。
2 结果
2.1. 收集了20例正常膀胱组织标本和40例膀胱癌组织的临床病理标本，用免疫组化的方法检测各个标本中Aurora-A的表达。在40例膀胱癌组织病理标本中，+和++着色标本共计29例，占72.5%。在正常的膀胱组织标本中仅有1例出现+着色，其余均为-和±。经卡方检验膀胱癌组织与正常膀胱组织之间Aurora-A的表达水平存在显著差异（P＜0.01）。
2.2. 在20例非肌层浸润性膀胱癌组织中-和±着色标本为9例，+和++着色标本11例；而在肌层浸润性膀胱癌组织中-和±着色标本为2例，+和++着色标本18例。两者之间经卡方检验非肌层浸润性膀胱癌组织与肌层浸润性膀胱癌组织之间Aurora-A的表达水平存在显著差异（P＜0.05）。
3 讨论
众所周知，在有丝分裂过程中，中心体是确保纺锤体两极形成，染色体平均分配到子细胞的主要细胞器，其正常复制对于维持基因组的稳定起着至关重要的作用。因此，中心体相关蛋白的研究是继细胞周期、信号传导、细胞凋亡之后的又一个研究热点。
Aurora A是近年发现调节细胞周期的丝/苏氨酸激酶家族成员之一，在人类多种肿瘤中表现为扩增和过表达，已被确认是一种新的癌基因[3]。为了解Aurora A基因在膀胱癌中的表达情况以及Aurora A基因与肿瘤发生发展的关系。本实验采用免疫组化方法观察Aurora A基因在正常膀胱组织和膀胱癌组织中蛋白水平的表达。结果发现在40例膀胱癌组织病理标本中，阳性表达（+和++着色标本）共计29例，占72.5%。在正常的膀胱组织标本中仅有1例出现+着色，其余均为-和±。经过卡方检验证明Aurora-A的表达水平存在显著差异（P<0.01）。20例非肌层浸润性膀胱癌组织中-和±着色标本为9例，+和++着色标本11例；而在肌层浸润性膀胱癌组织中-和±着色标本为2例，+和++着色标本18例。经卡方检验证明Aurora-A的表达水平也存在显著差异（P＜0.05）。表明Aurora A基因可能参与膀胱癌的发生和发展。
出现这种情况可能是多种原因导致，Aurora A基因功能的异常或者失控都有可能导致细胞恶变的出现。Aurora A的过度表达并不能直接激活中心体的扩增，它是通过扰乱纺锤体组装的检验点，引起胞质分裂的失败，出现中心体扩增形成非整倍体细胞。Aurora A过表达导致中心体过度复制，会形成多极纺锤体，中心体复制或分裂异常形成单极或多极纺锤体，从而引起染色体分离异常，导致细胞分裂阻滞。在上述情况下，子细胞都会得到异常数目的染色体而形成异倍体。异倍体可引起抑癌基因的缺失或癌基因的获得或激活，从而导致细胞恶性转化，促进肿瘤的发生。
Aurora A与p53的相互作用认为可能是肿瘤发生和发展中重要的因素。Katay2ama 等[4]研究显示，Aurora A 激酶可直接磷酸化p53的Ser315位点，从而在肿瘤细胞系中促进由MDM-2所介导的p53降解；应用RNAi技术封闭Aurora A使得Ser315位点无法磷酸化，导致P53稳定不被降解及细胞G2/M期阻滞。Aurora A激酶还可磷酸化p53的Ser215位点，从而破坏p53的DNA 结合并使其转录激活功能丧失。本研究通过检测膀胱癌中Aurora A的表达，发现Aurora A在人膀胱癌中存在过表达现象，分析Aurora A的表达与临床病理参数，发现Aurora A的表达与膀胱癌的分化程度和浸润程度相关。然而Aurora A高表达通过何种途径促进膀胱癌的发生和发展，这个过程中有哪些蛋白的参与，尚需进一步研究。阐明其分子生物学功能以及在膀胱癌中的作用机制，将为今后探讨膀胱癌机理以及寻找有效的分子治疗靶点提供有益的帮助，为膀胱癌分子病理诊断、临床预后判断和治疗方案选择奠定理论基础。
参考文献：
[1] 虞颂庭，臧美孚，夏溟.尿路上皮肿瘤概论.见：吴阶平，主编.吴阶平泌尿外科学. 济南：山东科学技术出版社，2004.919-942.
[2] Castro A，Vigneron S，Bemis C，et a1．The D-Box-activating domain（DAD）is a new proteolysis signal that stimulates the silent D-Box sequence of Aurora-A．EMBO Rep，2O02，3（12）：1209-1214
[3] Yamamoto Y，Matsuyama H，Furuya T，et al. Centrosome hyperamplification predicts progression and tumor recurrence in bladder cancer. Clin Cancer Res，2004，10（19）：6449-6455
[4] Katayama H，Sasai K，Kawai H，et al. Phosphorylation by aurora kinase A induces Mdm2-mediated destabilization and inhibition of p53[J] . Nature Genet，2004，36（1）：55-62.
论文作者:谭硕
论文发表刊物:《航空军医》2015年17期
论文发表时间:2016/4/25
标签：膀胱癌论文; 组织论文; 标本论文; 膀胱论文; 抗原论文; 细胞论文; 基因论文; 《航空军医》2015年17期论文;