广西右江民族医学院附属医院呼吸内科 533000
摘要：目的 了解我院的产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的基因分型，进一步完善该细菌的检测手段，为临床预防和控制感染提供依据。方法 用K-B法检测肺炎克雷伯菌对17种常用抗生素的耐药情况；用DHPLC技术分析ESBLs各基因型的流行状况。结果 肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的耐药率分别为4.5％、3.1％、8.6％，对哌拉西林／三唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星的耐药率均低于14％，对其他抗生素耐药严重；产ESBLs肺炎克雷伯菌检出35株，检出率35％。ESBLs基因分型结果显示，多株同时携带2种或2种以上基因型，且多为CTX-M型与TEM 型或SHV型基因共同存在。结论 肺炎克雷伯菌临床分离株数较多，对各类抗菌药物呈现不同程度的耐药，耐药性严重，有些具有多重耐药的特点，医院应对其加强耐药性监测和控制工作；治疗肺炎克雷伯菌感染可选择碳青霉烯类、哌拉西林／三唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星，但已出现这些抗菌药物的耐药株，应引起重视。
关键词：产超广谱β内酰胺酶；肺炎克雷伯菌CTX-M型；基因分型；耐药性检测
产超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum beta-lact amases，ESBLs）是肠杆菌科细菌对β-内酰胺类抗菌药物产生耐药的主要机制之一，其预防与治疗已成为临床医生需要面对的重要问题[1]。本研究对医院2012年1月～2013年12月所分离的肺炎克雷伯菌基因分型及耐药谱进行分析，为临床抗菌药物的合理应用提供依据。
1 资料与方法
1．1菌株来源及鉴定
收集2012年1月～2013年12月右江民族医学院附属医院住院患者临床分离肺炎克雷伯菌100株（排除同一患者同一部位重复分离菌株）。采用VITEK微生物分析系统对菌株进行鉴定。以标准菌株肺炎克雷伯菌ATCC70603进行ESBLs检测阳性为质控。药敏试验按照美国临床实验室标准化研究所（CLSI）2010年标准推荐的纸片琼脂扩散法（K—B法）检测肺炎克雷伯菌中的ESBLs株对临床常用药物的敏感性。
1.2 研究方法
在本次研究中，进行产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的基因分型临床检测的过程中需要按照如下的方式进行检测：菌株MIC值的测定；质粒DNA的PCR扩增；DHPLC：分别以CTX-M-9和CTX-M-3标准株作为DHPLC分析的标准参考模板，制备标本异源双链时，分别取5～10ul的标准株质粒DNA的PCR扩增产物与相对应的待测标本PCR扩增产物等量相混合置95℃变性5 min，然后降温至55℃以形成同源和异源双链；测序：对PCR产物直接进行正反双向测序；确定其基因亚型；进行药敏试验。数据结果统计分析。
2 结果
2.1肺炎克雷伯的科室分布及标本来源
100株肺炎克雷伯菌在ICU内检出率最高，为30％（30／100），其次是呼吸内科、神经外科，分别占20％（20／100）、10％（10／100）。绝大多数来源于痰液和尿液标本，分别占36％（36／100），尿液18％（18／100），不同科室分布及标本来源见表1和表2。
通过本次研究完成后，我们能够发现，在本次研究中的100株肺炎克雷伯菌的菌株中，检出CTX-M型13株，占13%。肺炎克雷伯菌对头孢唑林的耐药率最高，为95．4％，对哌拉西林耐药率为59．40％，对一至四代头孢菌素的耐药率在30．0％～58．8％，庆大霉素、环丙沙星的的耐药率为40．2％～50．0％，肺炎克雷伯菌对头孢西丁的耐药率较其他测试的头孢菌素低，对哌拉西林／三唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星敏感率较高，分别为为83．2％、88.6％、73.0％，对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的耐药率分别为4.5％、3.1％、8.6％。见表3
3.讨论
产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌在目前极为常见，同时也会在临床上对于患者造成极为严重的危害。[2]根据质粒所携带编码基因同源性的不同，ESBLs主要有TEM、SHV、CTX—M、OXA型。还有一些少见的ESBLs型别，如PER、VEB、CMZ、TLA、SFO、GES等。[3]引起临床感染的产β-内酰胺酶细菌依次为肺炎克雷伯菌、铜绿假单孢菌等[4]。产ESBLs细菌主要在医院内引起感染和流行。
目前在临床上，基因检测的方式能够取得较好的检测效果，同时相比常规检测方式，如纸片扩散或是肉汤稀释等方法，通过使用基因检测的形式能够极大的提升准确的程度。但在实施DHPLC基因检测的过程中我们仍然能够发现，DHPLC分析时主要观察异源双链洗脱峰出现与否及其形态特征，出现异源双链峰或峰型异常，表示样本核苷酸序列中存在与标准参考模板不一致的地方，即基因变异；对于某一特定的基因变异，其异源双链洗脱峰是特异的[5]。对于已知的基因变异，只要观察到其特异的洗脱峰，即可进行诊断；对于未知的基因变异，一旦观察到异常的洗脱峰，即表明样本中存在新的基因变异，测序后即可明确突变类型。临床上可以依据特定的DHPLC洗脱峰型快速的对某一CTX-M型ESBLs的基因型做出诊断。本研究发现我院肺炎克雷伯菌产ESBLs的主要基因型为CTX-M型，其次为TEM型。
而通过本调查显示，肺炎克雷伯菌产ESBLs率平均为35.0％，与邱善敏的监测结果[6]相近，低于张婴元[7]等对上海地区细菌监测的报道结果，这种分离率的差异可能与不同医院、地区使用第三代头孢菌素的种类、数量及时间不同而造成对ESBLs的筛选及诱导不同有关。从表3可见，产ESBLs肺炎克雷伯菌对对一至四代头孢菌素的耐药率在30.0％～58.8％，肺炎克雷伯菌临床分离株数较多，对各类抗菌药物呈现不同程度的耐药，耐药性严重，有些具有多重耐药的特点，医院应对其加强耐药性监测和控制工作；根据药敏实验结果及患者病情合理选用抗菌药物对减少耐药株的产生和控制医院感染十分重要。治疗肺炎克雷伯菌感染可选择碳青霉烯类、哌拉西林／三唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星，但已出现这些抗菌药物的耐药株，应引起重视。
参考文献：
[1]邱星安．肺炎克雷伯菌的耐药趋势及耐药机制的研究进展[J].中国现代药物应用，2011，5（5）：236．
[2]周蓉，朱卫民，黄文祥，等．855株肺炎克雷伯菌感染的临床分布及耐药性分析[J]．中国抗生素杂志，2013，38（50）：363—369．
[3]朱德妹，张婴元，汪复，等．2010年上海地区细菌耐药性监测[J]．中国感染与化疗杂志，2011，1 1（6）：436—444．
论文作者:罗维贵,李毅谦,韦中盛,林建勇,蒋玉洁,黄霞,苏
论文发表刊物:《健康世界》2015年15期
论文发表时间:2016/5/27
标签：肺炎论文; 克雷论文; 基因论文; 头孢论文; 耐药性论文; 头孢菌素论文; 西林论文; 《健康世界》2015年15期论文;