常州市中医医院 江苏常州 213003
摘要：目的 建立一种快速、高效、准确测定黄栀子中栀子苷含量的UPLC方法。方法 采用UPLC方法，通过对线性范围、精密度、稳定性、重复性及加样回收试验进行考察。结果 栀子苷含量的线性关系、精密度及稳定性等指标均符合药典要求，建立了黄栀子UPLC含量测定方法，且相比于现有测定方法有更为高效便捷。结论 黄栀子中栀子苷含量的UPLC测定方法准确、便捷高效。
关键词：黄栀子；UPLC；栀子苷
黄栀子（Gardenia sootepensis Hutch），始载于神农本草经，性味苦寒，是茜草科栀子属常绿灌木的干燥果实。具有泻火除烦、清热利尿等功效，临床上广泛用于口舌生疮，湿热黄疸，小便短赤等病症。主产于江西、湖南等地，其果实富含天然色素藏红花素，常用于食品染色。文献报道，黄栀子含有多种类型的化合物，如环烯醚萜、黄酮类成分，主要指标性成为为栀子苷[1-3]。前期许多研究是通过薄层层析法鉴别黄栀子中指示性成分栀子苷和HPLC法测定栀子苷的含量来对黄栀子药材进行质量控制[4-6]。
然而，目前的HPLC法在检测黄栀子中栀子苷的含量时，提取栀子苷成分效率不佳，操作复杂，检测时间较长分离度一般，从企业和质控角度存在一定的弊端。基于以上现状，本研究建立了一种UPLC测定黄栀子中栀子苷的含量方法，操作方法简便，快速准确，专属性强，能够有效地对黄栀子质量进行控制。
1 方法与材料
1.1主要试剂与仪器
Waters超高压液相色谱仪（美国），Agilent C18色谱柱（2.1 mm × 100 mm，1.7 μm），D101型大孔树脂（国药试剂），BT25S型1/10万分析天平（德国Sartorius）等。乙腈、甲醇（色谱纯，美国Fisher公司），甲酸（色谱纯，美国Tedia公司），日本EYELA旋转蒸发仪，其他试剂均为国产分析纯。
栀子苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：1611769，纯度：98％）；
1.2 栀子苷色谱条件的确立
黄栀子供试品：称取黄栀子粉末1g，加入80%甲醇，在80℃下超声提取2h，冷却至室温，过滤取滤液，浓缩后，用色谱甲醇溶解即得黄栀子供试品。
栀子苷对照品溶液：称取栀子苷对照品5mg，加入甲醇溶解，稀释配制成5mg/L的栀子苷对照品溶液。
色谱柱 Agilent C18（2.1 mm × 100 mm，1.7 μm），甲醇：水（0.05%甲酸）= 23：77，色谱柱温30℃，流速为0.2mL/min，进样量为1.0μL，检测波长238nm。
1.3数据处理
采用SPSS16.0软件对数据进行统计分析，以及RSD值的计算。
2 结果分析
供试品中栀子苷与对照品色谱峰保留时间一致，供试品溶液色谱中被测化合物峰纯度在99 %以上，说明所确定的色谱条件能对供试品中上述化合物有较好的分离，分离度大于1.5且达到基线分离，所建立方法具有良好的专属性。
2.1 线性关系考察
精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成浓度为0.0010 mg/ml、0.0020 mg/ml、0.0050 mg/ml、0.0100 mg/ml、0.01500 mg/mL的对照品溶液，精密吸取上述溶液1.0 μL，按拟定的色谱条件注入超高效液相色谱仪。以峰面积对进样质量进行线性回归，得各被测成分的回归方程、相关系数及线性范围。结果表明食子酸质量浓度在0.0010～0.0150ug范围呈良好线性关系y=10000000x+2153.2，R2=0.99931。
2.2精密度实验
精密吸取取栀子苷对照品溶液（0.0100 mg/mL），按上述的色谱条件，连续进样6次，每次1.0 μL，测定栀子苷成分峰面积（结果6次峰面积RSD为1.22 %，符合质量标准技术要求（RSD在3 %以内），精密度良好。
2.3稳定性实验
按上述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，在0h、2h、4h、8h、12h分别进样1.0μL，测定栀子苷成分峰面积。结果表明供试品溶液12 h内稳定。其RSD为1.05 %，表明在12 h内稳定。
2.4重复性实验
取黄栀子药材（同一批次），按照上述方法制备供试品溶液6份，按拟定的色谱条件，每次1.0 μL，分别测定栀子苷成分峰面积，计算指标含量，RSD为2.1 %，符合质量标准技术要求（RSD均在3 %以内），重复性良好。
2.5加样回收率实验
取黄栀子样品6份，每份0.5 g，精密称定，加入适量栀子苷对照品溶液，按拟定的方法对样品进行处理。按上述色谱条件，按下式计算出回收率。结果显示该样品的平均回收率为99.52 %，RSD为1.05 %，准确度良好。
回收率=（测得量-样品中没食子含量）/对照品加入量×100%
2.6样品的测定
分别精密称取对照品与5个批次的样品，配置成溶液后按含量测定的方法进行测定，RSD值符合标准。试验结果如表2所示。
表1 黄栀子中栀子苷含量测定结果
结果说明黄栀子中栀子苷含量的测定稳定，RSD值符合要求。
3 讨论
黄栀子是许多复方的常用药材，其果实色素含量较高，临床上广泛用于治疗热病心烦、湿热黄疸、血淋涩痛等病症[7]。而栀子苷是黄栀子中的代表性成分，在黄栀子药材中含量较高，具有显著的抗炎抑菌效果，栀子苷的药理作用广泛，具有多种生物学效应[8]，是极其重要并有很大开发利用价值的中药材成分，因此，建立一种快速高效的色谱方法对其质量控制显得尤为重要。而2015年版《中国药典》也是通过HPLC测定黄栀子中指示性成分栀子苷进行质量控制。但前的HPLC法在检测黄栀子中栀子苷的含量时，操作方法比较复杂，不易操作，检测时间较长分离度一般，专属性弱。
为此，本研究建立了UPLC快速测定黄栀子中栀子苷含量，方法便捷准确且高效，其方法学考察符合药典标准，RSD均在范围内，用于黄栀子药材的质量控制具有借鉴意义。
参考文献：
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[8]刘益华，李晶，林曼婷，等. 栀子有效成分栀子苷的现代研究进展[J]. 中国药学杂志，2012（06)：406-409.
论文作者:华丰
论文发表刊物:《健康世界》2017年28期
论文发表时间:2018/3/9
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