（北京协和医学院医药生物技术研究所；北京100050）
摘要: 目的：目前我国药理实验用硫酸铜培养基为透明天蓝色，特殊条件灭菌后先变褐色冷却摇匀后渐变为暗蓝透明色，称“中国蓝”。 在没有特殊压力灭菌器设备条件下，摸索出用普通压力容器灭菌硫酸铜后呈现中国蓝效果的一套特殊灭菌技术方法。 材料与方法：半自动单开门的压力蒸汽灭菌器，正常灭菌工艺参数为：压力0.15MPa,温度120℃，灭菌保持30分钟。由于培基含铜药理室提出了特殊的灭菌条件：压力增高至0.16MPa,温度升高至124℃，同时培基含糖灭菌时间要缩短至15分钟。本研究所当前普通压力设备依照上述条件进行灭菌操作，不能达到上述不变色效果，这的确是个技术难题。为保证药理室研制工作不停滞，进行了系列技术参数细微改变试验，用打破常规技术方法，成功找到了使硫酸铜培基灭菌后显现出中国蓝的最适灭菌工艺参数和特殊操作方法。 结果：经过比对试验找到了快速升温快速排气法微调参数达到理想的灭菌效果即硫酸铜培养基溶液灭菌后由透明蓝渐变为中国蓝，由此建立了一种操作低端压力设备的特殊灭菌技术方法。
关键词 : 药理室; 硫酸铜 ; 中国蓝; 压力灭菌器; 特殊灭菌
1. 材料与方法
药理室新配置硫酸铜培养基溶液蓝色
卧式矩形压力蒸汽灭菌器 常规工艺参数：压力0.15MPa 温度120℃ 消毒30分钟
硫酸铜培养基灭菌条件：压力0.16MPa 温度124℃ 消毒时间15分钟
灭菌合格标准指示卡
首先了解变色原理：硫酸铜溶液由透明蓝色变为透明绿色，原理是持续高温使溶液浓缩这一物理变化的结果，再分析药理用培基液组分，糖分等经高温会有碳化现象，碳化颜色呈暗黄与透明绿混合成浑浊绿。浓缩与碳化都源自于持续高温，于是就从控制套层（预热）温度和保温（排气）时间着手进行了多次试验。
具体方法是：分组控制不同预热保温时间与特殊升温、特殊降温处理，人工微调，反复试验，具体数据如下表：
第一组： 常规操作。 按照药理室要求的参数条件灭菌，0.16MPa124℃15分钟，因为没有明确说明不变色的特殊效果，所以仍按常规预热和排气，灭菌结果显示暗绿色，推断可能灭菌过度导致。
第二组 ： 空消试验。 经过第一次灭菌过度后，决定细微改变参数试验一次，降低压力参数为0.155MPa,减少保温时间为20分钟，其他条件不变进行空消，灭菌结果无菌可行。
第三组： 正式使用微调。 此蓝色培基为含硫酸铜培基溶液，药理室娄人惠老师希望（用特殊技术方法）达到灭菌后先褐色自然冷却摇匀后渐变成中国蓝的理想效果。 于是在锁定上述参数“0.155MPa124℃消毒15分钟保温20分钟”不变的前提下开始微调操作，先缩短预热为20分钟，结果绿色变透明，说明可行，但没达到蓝色仍需再进一步减温处理。
第四组： 继续微调摸索。 提前加热套层，再缩短预热时间为15分钟，其他参数条件不变，灭菌结果出现蓝色，比较满意。
第五组： 完善微调锁定方法。 最后，微调缩短保温时间至15分钟，其他参数不变，并借鉴牛奶灭菌快排方法减少碳化出现，灭菌结果点绿消失，出现了经典中国蓝，达到了理想效果。
第六组： 建立方法 。上述成功的灭菌条件参数与微调操作是：压力0.155MPa温度124℃消毒15分钟提前预热15分钟快排保温15分钟。此特殊方法使硫酸铜培基灭菌后自然冷却由褐色渐变为理想的中国蓝，继续实践，效果显著，方法确立。
2. 结果
在保持灭菌参数基本不变提前下微调参数，采用提前预热快速排气降温法缩短消毒前后加热时间，使硫酸铜灭菌彻底同时又减少了热浓缩碳化的可能，防止绿色呈现而保持蓝色至中国蓝，达到了非常理想的灭菌效果。 此特殊灭菌技术方法是使用简陋传统灭菌设备完成，之后在实验室用L型Ⅳ级压力蒸汽灭菌器中重复操作，结果一致，经过数年反复验证无误，沿用至今。
3 .讨论
颜色变化是理想灭菌效果的指针，而药理实验工作则借助颜色标识参考来判段结果。不理想的绿色结果会让实验反应标识不明确，必须多增加几次实验才能验证确定结果。标识明朗则很快确定结果，理想的中国蓝灭菌效果使得药理室减少了反复实验次数，节省了判定结果的时间，从而推进了工作进度。良好的灭菌技术是科研工作的基础支撑和后勤保障。
硫酸铜的特殊灭菌技术方法成功达到了药理科研实验理想的灭菌效果，这对于现有压力设备是个突破，节约了设备资源，降低了科研成本，开辟了科研进度新局限。后经多次多种灭菌设备的实践验证，这种快速升温降温以及微调处理技术方法是成熟的特殊灭菌技术方法，值得推广。
此特殊灭菌技术方法用于类似需要高温高压又含糖培养基的灭菌消毒，适用于各种低压小型压力蒸汽灭菌器，特别是灭菌设备条件相对较低端的科研单位非常经济实惠。 它的优势是使用设备材料成本较低，操作灵活方便快捷，缺点是人工劳动成本较高，不适合先进批量消毒设备和需求量大的待消物的消毒工作。
我单位压力容器设备条件有限，不断发展的科研技术需要与之相匹配的先进设备，这样可以降低劳动力成本，腾出更多时间和空间去创造更优质更可靠后勤保障供应。随着压力蒸汽灭菌器的逐渐改进，相应的灭菌技术也会不断提高，会出现更高更新的灭菌技术与方法解决各种特殊待消物的消毒问题，更有效配合与保证研究项目的工作进展。灭菌技术的不断提高更新完善有望使灭菌后勤保障工作走上新的台阶。
论文作者:曹凤华
论文发表刊物:《医师在线》2017年4月下第8期
论文发表时间:2017/6/15
标签：硫酸铜论文; 药理论文; 方法论文; 压力论文; 技术论文; 参数论文; 培养基论文; 《医师在线》2017年4月下第8期论文;