（1 浙江莎普爱思药业股份有限公司，浙江平湖，314200；2 浙江大学药学院，浙江杭州，310000）
[摘要]目的 硫酸阿米卡星氯化钠注射液中有关物质衍生化HPLC法分析。
阿米卡星 (amikacin)为半合成的氨基糖苷类抗生素 ,抗菌谱广 ,对铜绿假单胞菌及若干分枝杆菌均有较强的抗菌活性。其突出优点是对许多肠道革兰氏阴性菌和铜绿假单胞菌所产生的乙酰化酶、磷酸化酶和核苷化酶等稳定。
中国药典2005年版硫酸阿米卡星及注射液（1ml：0.1g；2ml：0.2g）质量标准中已列有关物质检查，采用薄层色谱法，分离效果好，斑点清晰，但由于硫酸阿米卡星注射液中含有氯化钠，使斑点严重拖尾，影响结果判断，现参照英国药典2002年版硫酸阿米卡星质量标准中有关物质检查方法，采用衍生化HPLC法测定本品中的有关物质。
[关键词] 硫酸阿米卡星氯化钠注射液,测定，衍生化HPLC法，有关物质测定,
质量控制
1、仪器与试药
仪器：HP1100液相色谱仪，Alltima C18柱（150×4.6mm，5μ）。
水：蒸馏水：甲醇：色谱纯。
硫酸阿米卡星标准品、卡那霉素标准品及杂质A（即杂质 K29）对照品由中国药品生物制品检定所提供；
2，4，6-三硝基苯磺酸由金华康恩贝制药有限公司提供；
硫酸阿米卡星氯化钠注射液（规格：250ml：0.5g与氯化钠2.125g：批号：041204-9软袋包装，050330-2和070206玻瓶包装）浙江莎普爱思制药有限公司生产。
2、测定方法：
对照溶液：取本品作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
衍生化试剂：取2，4，6-三硝基苯磺酸适量，加水制成每1ml中含10mg溶液，作为衍生化试剂。
操作方法：分别精密量取供试品溶液和对照溶液1ml，置10ml量瓶中，再分别准确加入衍生化试剂2.0ml，吡啶3.0ml，盖上瓶塞，振荡混匀30s，75℃水浴中放置45min，冷水冷却2min，加冰醋酸2.0ml，振荡混匀30s。按照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录Ⅴ D测定），用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；磷酸盐缓冲液（0.27%KH2PO4溶液，用2.2%氢氧化钾调pH值至6.5）-甲醇（30：70）为流动相；检测波长340nm。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的10%；再精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。供试品溶液如显杂质峰，量取主峰后各杂质的峰面积，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰峰面积的3倍（3.0%）；杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰峰面积的5倍（5.0%）。
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3、方法专属性试验
3.1与合成原料、中间体、副产物及辅料的分离
分别取硫酸阿米卡星标准品和卡那霉素标准品各适量加水制成每lml中各
含2.0mg的溶液，进样分析，确定阿米卡星和卡那霉素等色谱峰的保留时间，考
察各成分峰之间的分离度：分别取硫酸阿米卡星标准品和杂质A对照品各适量加水制成每1ml中各含2.0mg的溶液，进样分析，确定阿米卡星和杂质A等色谱峰的保留时间，考察阿米卡星峰和杂质峰A之间的分离度。结果表明，在上述色谱条件下，阿米卡星和合成的前体卡那霉素以及杂质A之间有较好的分离度，见图2、图3：辅料对含量测定无干扰，见图10。
3.2 与分解产物的分离
(1)碱破坏试验：取本品l .0ml，加6mol/L氢氧化钠溶液0.5m1，水浴煮沸30分钟，放冷，加酸中和．照前述衍生化方法进行衍生化，进样，记录色谱图。结果见色谱图6。
(2)酸破坏试验：取本品5 ml，加6mol/L盐酸溶液0.5rnI，水浴煮沸30分钟，加碱中和，照前述衍生化方法进行衍生化，进样，记录色谱图。结果见色谱图5。
(3)高温破坏试验：取本品，在60℃条件下，放置10天后，取适量，照前述衍生化方法进行衍生化，进样，记录色谱图。结果见色谱图7。
(4)强光照射破坏试验：取本品，于强光下(45001x)照射10天后，取适量，照前述衍生化方法进行衍生化，进样，记录色谱图。结果见色谱图8。
(5)氧化破坏试验：取本品5 ml，加30％过氧化氢溶液2m1，水浴煮沸30分钟，照前述衍生化方法进行衍生化，进样，记录色谱图。结果见色谱图9。
(6)结论：上述实验表明，本品在高温、强光、强酸、氧化照射条件下稳定，但在强碱条件下．均产生分解产物。
本法可有效地检出上述分解产物。
4、最低检出浓度
通过逐级降低浓度，进样测定，确定阿米卡星的最低检出浓度(S/N>3)分别为1.0μg/ml，见色谱图11。
本法设计的供试品溶液浓度，可满足有关物质检测的要求。
5、色谱图记录时间的确定
取三批样品，照前述方法，进样，记录色谱图到主峰保留时间4倍，结果在主峰保留时间3倍后没有杂质峰出现，见图12、13、14，确定本品的有关物质检查的色谱图的记录时间为主峰保留时间的4倍。
6、 样品中有关物质测定
取本品，照前述方法，进样测定．结果见表1，有关物质测定HPLC色谱图
见图12～17。
7、有关物质限度
参照中国药典2005年版硫酸阿米卡星质量标准中有关物质限度，及根据三批样品有关物质实测结果，有关物质限度暂定为单个杂质面积不得大于对照溶液主峰峰面积的3倍(3.0％)；杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰的峰面积的5倍(5.0％)。
8 、结论
041204-9批(软袋包装)和050330-2批(玻瓶包装)已经室温留样2-3年，结果表明，这二批样品的有关物质均较低，均符合标准规定，说明本品稳定，软袋包装与玻瓶包装无质的差异。
文献资料
1、英国药典2002年版硫酸阿米卡星质量标准
2、中国药典2005年版硫酸阿米卡星及注射液质量标准
3、王明娟等.硫酸阿米卡星注射液及有关物质的HPLC法分析.中国抗生素杂志，2001，26（5）：345-347
论文作者:徐洪胜1，余露山2,, 张勇,
论文发表刊物:《中国医学人文》2019年第01期
论文发表时间:2019/3/5
标签：溶液论文; 色谱论文; 阿米论文; 硫酸论文; 杂质论文; 物质论文; 本品论文; 《中国医学人文》2019年第01期论文;