吴萍[1]2018年在《内皮抑素联合牛碱性成纤维细胞生长因子对兔耳增生性瘢痕的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨内皮抑素联合牛碱性成纤维细胞生长因子(贝复济)对兔耳创面瘢痕增生的影响及其机制,以期为治疗、预防病理性瘢痕提供一种新的方式。方法:随机选取新西兰大耳兔12只,建立兔耳增生性瘢痕模型,将其随机分配为4组,每组3只,每只双侧兔耳均设计6个创面,共计144个创面。A组(贝复济组)、B组(内皮抑素组)、C组(贝复济+内皮抑素组)、D组(生理盐水组)。分组处理如下:制作兔耳瘢痕模型,术后一周再创伤,除去痂壳形成二次创面。实验A组、C组术后立即外用贝复济喷洒至痂壳脱落。于术后第21天,实验B组、C组腹腔内注射内皮抑素,1次/天,连续注射7天,D组注射同量生理盐水;于术后第14天、21天、28天、42天观察创面及瘢痕情况;于术后第42天,分别采集各组兔耳瘢痕组织,应用苏木精-伊红染色法观察瘢痕组织形态学改变,用免疫组织化学法检测微血管标志物CD34及bFGF的表达,用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Bcl-2表达情况。观察CD34及bFGF表达情况:用Image-pro plus 6.0图像分析软件系统分别测定CD34及bFGF的吸光度值,用累计光密度值(Integral optical density,IOD)表示CD34、bFGF的表达强度。在高倍镜下观察,每张免疫组化染色切片选取5个视野,分别测定每一张标本的每一个视野的IOD值,取5个视野的均数作为该标本的IOD值,并进行比较。结果:术后第42天,组织形态学观察结果显示,实验C组增生性瘢痕明显减轻,瘢痕颜色减退明显,瘢痕组织内胶原疏松,排列较整齐,与A组、B组和D组比较有明显差异。免疫组织化学检测结果显示:CD34免疫组化染色结果:各组CD34的IOD值分别为A组(22.84±0.3),B组(12.7±0.53),C组(5.93±0.57),D组(41.96±03.82),即C组<B组<A组<D组,并且各组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。bFGF免疫组化染色结果:各组中bFGF的IOD值分别为A组(133765.37±5316.70),B组(296209.91±22961.17),C组(552960.53±56787.72),D组(58571.32±2414.95),即C组>B组>A组>D组,并且各组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2蛋白免疫印迹(Western blot)检测结果:A组(0.341±0.029),B组(0.201±0.015),C组(0.076±0.015),D组(0.539±0.063),即C组<B组<A组<D组,各组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.腹腔注射内皮抑素对血管内皮产生抑制作用,减轻瘢痕增生;2.重组牛碱性成纤维细胞生长因子(贝复济)促进创面愈合的同时,可能降低瘢痕血管形成,减轻瘢痕增生,但单独应用效果明显弱于内皮抑素;3.内皮抑素联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子(贝复济)产生协同作用,抑制微血管生成,减轻瘢痕增生。其机制可能是内皮抑素与重组牛碱性成纤维细胞生长因子协同抑制Bcl-2基因的表达,直接或间接加速内皮细胞、成纤维细胞等凋亡,减少细胞因子生成,从而减轻瘢痕增生。
吕威力[2]2003年在《碱性成纤维细胞生长因子促进人血管内皮细胞增生的研究》文中研究表明前言 创伤是广泛危害人类的“发达社会疾病”，深入研究创伤后的组织修复问题仍然是医学领域的重点和难点。创伤修复是体内多种因子和细胞参与的复杂过程。外源性生长因子对创伤修复的作用已成为当今创伤修复学研究的热点。成纤维细胞生长因子(FGF)，尤其是碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)具有广泛的生物学活性，是伤口愈合过程中所有相关细胞的促有丝分裂原、化学趋化及调节蛋白，可影响创伤修复的整个过程。bFGF调控创伤愈合的机制精细而复杂，深入了解其促创伤修复机制，对指导临床合理有效地应用bFGF具有重要意义，然而这方面的研究目前报导甚少。 本实验通过研究bFGF诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖中，核转录因子κB(NF-κB)和细胞周期相关蛋白ki-67的表达，及bFGF对血管生成抑制剂TNP-470和糖皮质激素地塞米松(Dex)作用的影响，来阐述bFGF促进内皮细胞(EC)增生的可能机制，为进一步研究FGF促进肉芽组织增生、创伤修复的作用机制提供实验依据。 方法 首先采用改进的Jaffe法进行HUVEC培养。待细胞达亚融合状态后，换无血清培养液使其停止生长。施加实验因素，分成6组：正常对照组(无血清DMEM)；bFGF组(500ng／ml)；Dex组(0.1μM)；TNP-470组(10~(-7)／ml)；bFGF+Dex组；bFGF+TNP-470组。48小时后进行各项检测。采用M竹试剂(3一(4，5一二甲基唾哇一2)2，5一二甲基四氮哇澳盐)比色分析法测定EC生长活性;采用流式细胞计数仪检测EC周期各时相相对细胞数;采用免疫组化方法检测EC中NF一KB和kl一67的表达;实验结果采用SPSS软件包进行数据统计分析和处理。结果 M竹检测结果，与对照组相比，bFGF显着刺激EC增生，使细胞数增加(P<0.05);bFG.F可减轻Dex和TNP一470对EC增生的抑制作用(P<0 .05)。流式细胞仪分析结果，bFGF使Go/Gl期EC比例减少，S期和几/M期比例增加，PI值增大(P<0.05);TNP-470使G0/G:期Ec比例上升，s期和几/M期比例下降，PI值降低(P<0.05);且bFGF可阻断TNP一470对EC增生的抑制，使PI值接近正常(P<0.05)。免疫组化结果显示，正常对照组，ki一67在核内极少表达，NF一姗丙5蛋白棕褐色染色多位于胞浆;bFGF组，胞核内ki一67和NF一KB两5蛋白表达均增加，可见棕褐色点状分布的颗粒，与对照组相比，差异显着(P<0.01);Dex和TNp-470使胞核染色明显变浅，阳性细胞数目显着减少，阳性率降低(TNP一470组，P<0.05);bFGF可逆转此抑制效应。讨论 外用FGF促进创面愈合已被许多实验所证实，但尚不清楚其作用的相关机制。本实验验证了bFGF对培养的HUVEC增生的调控作用。MTT分析结果可见，bFGF刺激EC增生，使细胞数增加。h一67是一种细胞增殖核抗原，除G0期外，细胞周期所有活性阶段均有表达。本实验应用鼠抗人匕一67单克隆抗体检测bF.GF对细胞周期的影响，结果显示，bFGF可促进EC核内ki一67的表达，刺激EC由静止期进人增殖期，加速细胞周期进程。流式细胞仪检测结果显示，bFGF使G碑q期EC比例减少，S期+GZ/M期比例增加。以上均表明bFGF有显着促进EC增生的作用，是EC增生的有力刺激剂。 本研究进一步探讨bFGF促EC分裂作用的机制。细胞外的bFGF与其细胞膜上两种相关受体(HSPG和bFGFR)形成复合物，通过一系列信号级联传导途径将信号传至细胞核。核转录因子NF一KB为一重要的调节因子，静息状态下，与其抑制蛋白IK一B偶联，以无活性形式驻留在胞质内。受刺激活化后，IK一B被降解，NF一KB则从胞浆移位人胞核发挥其调控功能。本实验应用兔抗人NF_一KB两5多克隆抗体检测EC内NF一KB的活化，结果表明，bFGF可活化NF一KB，使其在核内表达增加。由此推测，bF-GF显着促进EC增生的可能机制是通过 NF一KB活化，从而促进DNA合成、细胞分裂增生。 TNP一470可抑制EC生长和迁移，为特异性血管生成抑制剂。本实验表明，，rNP一470单独作用使细胞数减少，核内ki一67表达减少，NF一KB表达明显降低，PI值下降;而bFGF可减轻此抑制作用。 Dex是一种非特异性NF一KB阻断剂，可诱导IK一B的合成，阻止NF一KB释放，从而抑制依赖NF一KB的转录。本实验显示，Dex对未受刺激的EC增生无显着影响，可使核内kl一67表达减少，NF一KB表达明显降低;加人bFGF使其抑制增生作用逆转。结论 1.bFGF使体外培养的EC数目增加，ki一67表达增强，PI值增大，显着促进EC增生。 2.bFGF促EC增生的可能机制是通过活化NF一KB，使细胞由静止期进人增殖期，促进DNA合成、细胞分裂增殖。 3.TNP一470使细胞数减少，h一67与NF一KB表达降低，PI值下降，抑制EC分裂与增殖;bFGF可逆转其抑制效应。 4.Dex对未受刺激的EC增生无显着影响，可抑制ki一67与NF一KB表达;bFGF使其作用逆转。
赵忠芳[3]2011年在《普萘洛尔治疗血管瘤分子机制的初步研究及临床应用》文中研究指明研究背景：脉管性疾病(vascular anomalies)是较常见的良性肿瘤和发育畸形。虽然脉管性疾病属于良性病变,但发生在颌面颈部的病变,不仅导致严重的容貌毁损,还可能因为阻塞呼吸、消化道而影响发音、进食,甚至导致出血、窒息并危及生命。根据影像学资料和血流动力学原理,将脉管畸形分为低流量畸形(毛细管畸形、静脉畸形和淋巴管畸形)和高流量畸形(动脉畸形、动静脉畸形)两大类。血管瘤依据形态分为毛细血管瘤、海绵状血管瘤和蔓状血管瘤叁大类型。其中毛细血管瘤又可分为草莓状血管瘤、鲜红斑痣。血管瘤和脉管畸形是两种性质完全不同的病变,有着完全不同的临床表现、病程和转归。血管畸形是无内皮细胞异常增殖的非肿瘤性的先天性血管结构发育异常疾病,不会自行消退,随患者的生长发育持续增长。对患者的组织结构和功能产生严重影响。血管瘤是一种婴幼儿常见的先天性的良性、具有血管内皮细胞异常增殖的肿瘤或类肿瘤性疾病,大部分可以自行消退,但仍有20%的血管瘤不能消退。血管瘤可以发生在身体的任何部位,多位于皮肤和皮下组织,其次为口腔粘膜和肌肉、骨以及脑、肝、心脏等器官,其中约60%发生于头颈部,其次是躯干(25%)和四肢(15%)。不仅影响美观,还可出现多种并发症,如溃疡、出血、感染等。血管瘤主要发病于新生儿及1岁左右儿童,该病在新生儿中发病率为1%-2%,在婴儿中发病率为10%-12%,在体重低于1000g的早产儿,发病率则上升到22.9%,白种人发病率高于其他人种,原因不详,女婴比男婴发病率高,发病比为3：1-5：1。皮肤血管瘤通常单发,少数多发,血管瘤常在患儿出生时或出生后2周-至1个月内发现蚊咬状红点,并迅速增长,形成鲜红色斑疹或丘疹样团块,表现为一个或数个鲜红色、紫色、高出皮面、柔软的分叶状肿块,边界清楚,直径大小不等,甚至可达数厘米,压之不易褪色,瘤体通常呈鲜红色,凸出皮面,状似草莓。即过去所称的“草莓状血管瘤”或“毛细血管瘤”。根据Mulliken诊断标准将血管瘤分为：增生期、消退期和消退完成期。血管瘤患儿一般1岁以内增长最快,增殖期持续6-12个月,出生后的1个月和出生后的6个月是在增殖期内的2个生长高峰,1岁左右增至最大。1岁之后缓慢增长,进入稳定期,并逐渐消退,但完全消退通常需数年之久。血管瘤可自行消退完成的常常遗留有后遗症,如：皮肤松弛、色素沉着、瘢痕及纤维脂肪组织沉积等。位于眼睑、气管等处特殊部位的血管瘤常压迫周围器官,甚至危及生命。而位于眼睑、外鼻、耳郭、口唇等部位的病变,除了造成颜面部美容缺陷、畸形、凶险的出血倾向以外还可引起相应功能障碍等并严重威胁其生活质量,给患者及亲属带来极大的精神创伤和心理负担。少数迅速增殖的重症血管瘤还可能导致严重的外形和功能障碍,甚至危及生命。因此对于无法消退或不能完全消退的血管瘤或位于特殊部位的血管瘤应及时正确积极的治疗。目前对血管瘤的治疗没有统一的方案。治疗方法主要有：1)等待观察；2)冷冻治疗；3)激光治疗；4)放射与放射性核素治疗；5)注射治疗；6)介入治疗；7)血管瘤铜针疗法；8)手术治疗；9)外用药物治疗；10)口服药物治疗等。经远期随访证实,效果并不是很理想。冷冻治疗易导致增生或萎缩性瘢痕、色素沉着或色素减退。血管瘤的激光治疗常常会遗留有瘢痕,如萎缩性或增生性瘢痕等,另外激光治疗范围较大、较深厚度的血管瘤比较困难,甚至会引起大出血等情况,所以对于此类病灶使用激光治疗的时候一定要慎重,应严格掌握激光治疗血管瘤的适应证。对于接受放射与放射性核素治疗的血管瘤,治疗后在病灶局部容易形成萎缩性瘢痕,而且瘢痕表皮出现脱屑现象。经过临床的长期观察,对于这种由于放射线照射局部病灶所产生的萎缩组织或萎缩性瘢痕,并不能排除其有癌变的可能,而且放射核素治疗可能致对患儿有潜在危害。因此,现在在血管瘤的治疗中已很少使用放射及放射核素治疗。血管瘤的注射治疗是在血管瘤瘤体内直接注射激素或硬化剂,具体作用机制不是很明确,有可能为了达到治疗效果,IH瘤体内注射硬化剂造成内皮细胞的坏死及血管腔栓塞。平阳霉素在血管瘤瘤体的局部注射后6-12h内易发生发热反应,这可能是其抑制了内源性致热源释放的缘故,因此在配制平阳霉素混悬液时加入了地塞米松,进行了有效地预防发热反应。对于局部注射激素治疗无效且严重的血管瘤,可局部注射平阳霉素。介入治疗常用于内脏血管瘤如肝血管瘤的治疗。血管瘤铜针疗法由于铜原子的吸收并产生相应毒性作用,故目前很少采用。对于局限或比较局限的血管瘤原则上使用手术切除的方法,手术切除血管瘤不但安全而且可靠,并且有机会得到根治的有效治疗方法,对于冷冻、激光治疗后及血管瘤消退后遗留的瘢痕也可采用手术修复。对于范围较大的血管瘤,手术前应确定血管瘤的类型、范围、层次、血供等,若出血较多,难以切除干净或一期修复困难者,可采取二期修复。外用咪喹莫特药物具有抗疱疹病毒及治疗某些皮肤肿瘤的作用,且治疗范围逐渐的扩大,对于婴幼儿血管瘤的治疗,显示了一定的治疗效果。外用咪喹莫特药物治疗血管瘤操作方便、简单、未见的明显的全身不良反应。对于大面积、多发性及重症血管瘤的治疗,激素被认为是一线药物之一。主要适用于全身多发性血管瘤、增生期血管瘤以及累及重要器官或危及生命的血管瘤。口服激素的主要不良反应包括：dushing综合症,生长迟缓,胃食管反流,消化道溃疡,水、电解质紊乱,高血糖,行为异常和免疫抑制。但口服激素应该注意：1)若用药2周无效,终止治疗。若有效,病变减小或消失后再用药2-3周；2)减量撤药期间如出现反跳,则调整到较大剂量1周后减量,若再次出现反跳,应增大剂量继续2周,然后逐渐停药。总之,血管瘤的治疗方法甚多,且涉及多方面因素,在选择治疗方法时,应根据具体情况而定,目前尚无一种方法适用于所有情况。应该强调,治疗的目的不仅是为了消除病变,还必须保持健康的正常组织和外观。自2008年,法国医生Leaute-Labreze等偶然发现普萘洛尔能促进鼻咽部血管瘤消退并发表于《新英格兰杂志》后,开创了应用普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤的先河。近年来,普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤开始应用于临床且疗效显着,国内鲜见相关报道,普萘洛尔治疗血管瘤的分子机制国内外鲜见相关报道。血管瘤的病因、发生机制仍尚未完全清楚,主要机制为促血管形成因子及抑制因子的失衡。促血管形成因子中最主要的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)被认为是促进血管内皮细胞增殖活跃的血管形成因子。基质金属蛋白酶-9(Matrix Metall proteinase-9,MMP-9)在增殖期血管瘤内皮细胞的表达明显高于退化期及正常组织。因此,我们希望通过临床研究和分析普萘洛尔治疗增生期血管瘤的效果的显着进一步研究该病的发病机制的提供一些线索；通过采用干预措施观察增生期血管瘤患者的临床表现及血清、尿液因子水平的变化在增生期血管瘤治疗前后组间的差别,为疾病的治疗提供理论依据。目的：1)观察普萘洛尔治疗增生期血管瘤患者的临床效果；2)观察普萘洛尔治疗增生期血管瘤患者血清VEGF的水平变化；3)观察普萘洛尔治疗增生期血管瘤患者血清MMP-9的水平变化；4)普萘洛尔治疗增生期血管瘤患者血清VEGF与MMP-9的相关性；5)观察普萘洛尔治疗增生期血管瘤患者血清bFGF的水平变化；6)观察普萘洛尔治疗增生期血管瘤患者尿液bFGF的水平变化；7)普萘洛尔治疗增生期血管瘤的效果和bFGF变化的相关性；8)分析增生期血管瘤的临床特点及用普萘洛尔治疗的疗效和安全性。方法：本研究第一部分：1)按照Mulliken对血管瘤的诊断标准,对山东大学附属省立医院整形美容外科于2010年04月-2010年11月收治的增生期血管瘤患者53例收住入院,患者年龄为2个月-11个月,平均年龄6.5个月。血管瘤直径>1.0cm (1.0cm～8.9cm),化验血常规、肝肾功能、心电图、血糖、测量心率、血压和B超检查,对于各项检查符合要求的患儿口服普萘洛尔(天津力生制药厂生产,批号：H12020151),初始剂量0.5mg/kg/day q8h;1周内逐渐加量至2.0mg/kg/day q8h;2)口服普萘洛尔期间每次服药前、服药后0.5小时测量心率、血压变化(与正常婴幼儿心率、血压正常值表作对照),血压或心率低于正常标准,或服药后有其他较重的异常反应,作为停药标准；3)分别于服药前,服药4周与服药8周清晨空腹采集外周静脉血液样本；4)用采用酶联免疫吸附-双抗夹心(ELISA)法分别测定服药前,服药4周与服药8周血清中VEGF与MMP-9的水平变化,根据这些指标不同的组合分析各指标与增生期血管瘤患儿服用普萘洛尔药物效果的相关性。本研究第二部分：1)按照Mulliken对血管瘤的诊断标准,对山东大学附属省立医院整形美容外科于2010年04月-2010年11月收治的81例血管瘤患者(增生期53例,消退期29例),血管畸形患者24例,正常对照30例收住入院,血管瘤直径>1.0cm (1.0cm～8.9cm)，年龄2-11个月,平均年龄6.5个月,收住入院,化验血常规、肝肾功能、心电图、血糖、心率、血压和B超检查,对于各项检查符合要求的患儿口服普萘洛尔(天津力生制药厂生产,批号：H12020151),初始剂量0.5mg/kg/day q8h;1周内逐渐加量至2.Omg/kg/day q8h;2)口服普萘洛尔期间每次服药前、服药后0.5小时测量心率、血压变化(与正常婴幼儿心率、血压正常值表作对照),血压或心率低于正常标准,或服药后有其他较重的异常反应,作为停药标准；3)分别于服药前,服药4周与服药8周清晨空腹采集外周静脉血液样本；4)用采用酶联免疫吸附-X双抗夹心(ELISA)法分别测定服药前,服药4周与服药8周血清、尿液中的bFGF水平变化,根据这些指标不同的组合分析各指标与增生期血管瘤患者服用普萘洛尔效果的相关性。本研究第叁部分对82例血管瘤患者(增殖期53例,消退期29例),分析增生期血管瘤患者临床特征及用普萘洛尔治疗前、后、临床特征、超声检查的变化情况及安全性,同时观察停药后的相应临床症状及体征的变化。结果：本研究第一部分结果表明：1)用药前增殖性血管瘤患者53例(性别统计无差异),但治疗过程中因出现胃肠道反应(腹泻)、低血压等终止治疗者7例,治疗后4周的样本数是48例,治疗后8周的样本数是46例。用普萘洛尔治疗后的有效率逐渐增高,治疗后4周以好转病例较多,治疗后8周以有效病例较多,治疗后8周有效率明显增高(P<0.01),有效率达20%左右；2)血清VEGF水平在服药后4周和服药后8周呈逐渐下降趋势,治疗前与治疗后8周有统计学差异(P<0.05),而治疗前与治疗后4周无统计学差异(P>0.05),治疗后4周、8周无统计学差异(P>0.05)；3)血清MMP-9水平在服药后4周和服药后8周呈逐渐下降趋势,治疗前与治疗后8周有统计学差异(P<0.05),治疗前与治疗后4周无统计学差异(P>0.05),治疗后4周与治疗后8周无统计学差异(P>0.05)；4)MMP-9的表达变化与VEGF一致,并与VEGF呈正相关(r=0.9997,P<0.01)。本研究第二部分结果表明：1)普萘洛尔治疗前增殖性血管瘤增生期患者53例,治疗过程中因出现胃肠道反应(腹泻)、低血压等终止治疗者7例,治疗后4周的样本数是48例,治疗后8周的样本数是46例。治疗前增殖性血管瘤消退期患者29例,治疗4周后25例,治疗8周后24例。治疗前血管畸形患者24例,治疗4周后23例,治疗8周后20例。对照组30例,上述各组性别统计均无差异(P>0.05)；2)用普萘洛尔治疗增生期血管瘤,治疗前患者血清、尿液的bFGF水平显着高于正常对照(P<0.01)；患者血清bFGF水平在服药后4周和服药后8周呈逐渐下降趋势,治疗前与治疗后8周有统计学差异(P<0.05),而治疗前与治疗后4周无统计学差异(P>0.05),治疗后4周、8周无统计学差异(P>0.05)；3)患者尿液bFGF水平在服药后4周和服药后8周呈逐渐下降趋势,治疗前与治疗后8周有统计学差异(P<0.05),治疗前与治疗后4周无统计学差异(P>0.05),治疗后4周与治疗后8周无统计学差异(P>0.05)；4)普萘洛尔治疗消退期血管瘤,患者血清、尿液bFGF水平在治疗4周和治疗8周后与治疗前相比,均无统计学差异(P>0.05)；5)用普萘洛尔治疗血管畸形,患者血清、尿液bFGF水平在治疗4周和治疗8周后与治疗前相比,均无统计学差异(P>0.05)。本研究第叁部分结果表明：1)普萘洛尔治疗增生期血管瘤患者之前必须详细的检查,确保心、肺功能良好；2)普萘洛尔治疗增生期血管瘤患者用药剂量不超过[<2mg/(kg#d)],不良反应轻；3)普萘洛尔用药持续时间至血管瘤的增生期结束或者血管瘤瘤体消退不再继续生长,并逐渐减量至停药。结论：1)普萘洛尔治疗增生期血管瘤效果显着,副作用小；2)普萘洛尔治疗消退期血管瘤无明显效果；3)普萘洛尔治疗血管畸形无明显效果；4)普萘洛尔通过降低患者血清VEGF、MMP-9、bFGF及尿液bFGF水平,从而为治疗增生期血管瘤提供理论依据；5)普萘洛尔治疗增生期血管瘤的分子机制与下调患者外周血清VEGF、MMP-9、bFGF及尿液bFGF水平有关；6)本课题因样本量少,试验方法简单,随访时间短,希望扩大样本量,选用其他方法及长期随访进一步研究普萘洛尔治疗血管瘤的分子机制。
王志伟[4]2007年在《bFGF和G-CSF促进兔缺血后肢血管新生的实验研究》文中认为背景外周动脉闭塞或狭窄引起的肢体缺血性疾病(下肢动脉硬化闭塞症、糖尿病足、血栓性脉管炎等)是外科常见的致残性疾病，静息痛、皮肤溃疡或坏疽是下肢缺血性疾病典型的临床表现，以高发生率、高截肢率和高死亡率严重影响患者的生活质量。随着我国饮食结构的改变(摄入含脂食物增多)、人均寿命的延长以及检查诊断技术的改进，下肢缺血性疾病发病率逐年升高，已经成为危害人类健康的严重疾病。目前针对下肢缺血性疾病主要手段是药物、外科手术以及介入腔内治疗等。但是对于远端流出道严重狭窄尤其是合并糖尿病的患者往往没有手术机会，目前还缺乏令人满意的治疗方法。应用各种方法和平段促进新生血管生成，促进缺血肢体侧枝循环的建立，可能是有效可行的治疗方法之一。血管新生(angiogenesis)原指在已存在血管床的基础上血管内皮细胞增殖、迁移并重塑形成新的成熟血管，即从先前存在的血管上出芽生成新生毛细血管的过程。人体组织的正常生长均需要血管新生，成年女性子宫内膜的反复重建也是反复血管新生的过程；由于动脉狭窄或闭塞而引起组织、器官处于缺血状态，机体会形成代偿性的侧支血管，此均为生理性的血管新生。血管新生疗法，原是指通过应用外源血管生长因子(血管内皮生长因子VEGF，碱性成纤维细胞生长因子bFGF等)或其基因，以促进缺血组织内血管新生和侧支血管的形成，使缺血组织的缺血状态获得改善的治疗方法。血管发生(vasculogenesis)指发生在胚胎发育时期的血管内皮祖细胞(EPC)形成原始血管的过程。然而近年来发现在成年体内也存在EPC，主要分布于骨髓，循环外周血中也含有EPC，但含量极少。循环外周血中的EPC同样参与后天的血管新生。这就加深了对血管新生的认识，扩大了血管新生的概念。有学者认为在缺血、创伤等因素或某些因子动员下，骨髓EPC大量复制并释放至外周血液，定向迁移至缺血部位，定向增殖分化为血管内皮细胞，参与缺血组织的血管新生。并认为VEGF、bFGF、粒单-集落刺激因子(G-CSF)等促血管生成作用实质也是动员骨髓EPC的迁移、增殖、分化，而发挥血管新生效应。也有人认为血管新生和血管发生同时存在，共同改善局部缺血状态。各种血管生长因子控制着血管内皮细胞的增殖、分化和迁移，调节着血管新生整个过程的各个阶段。在组织缺血缺氧的情况下，组织产生各种促血管新生的因子的能力增强，并且可以动员循环中的细胞共同参与新血管的形成。bFGF被认为是体内最为有效的促血管生长因子之一。多个研究还发现bFGF有促进动脉生成的作用。不少学者应用bFGF基因研究血管新生，但随着蛋白备制、分离、提纯技术的发展，逐渐多的学者开始应用蛋白进行研究。研究表明，心肌梗死后内源性bFGF和VEGF增加。但bFGF和VEGF增加的量不足且时间短暂，在缺血组织内适时适量地增加局部外源性bFGF和VEGF的量是近年来研究的热点。骨髓干细胞CD34~+细胞可分化为血管内皮细胞，而且干细胞能分泌如bFGF和促使血管管腔内皮化的细胞因子。bFGF等血管生长因子又可以促进干细胞增殖并向血管内皮细胞分化，诱导内皮细胞产生纤维酶原激活物和基质金属蛋白酶，从而降解基质，加速新生血管的管腔结构的形成和叁维立体构像形成。很多学者已经开始了应用干细胞(骨髓干细胞、间充质细胞或单个核细胞)自体移植促进血管新生治疗缺血性疾病(下肢缺血、心肌缺血等)的动物实验研究和临床研究，并取得了一定效果。干细胞自我移植是应用骨髓干细胞动员剂将骨髓干细胞“驱赶”到外周血，增加外周血中干细胞的数量，促使定向“归巢”到缺血组织的干细胞数量相应增加，同样可达到自体干细胞移植治疗缺血性疾病的效果。目的本实验通过皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)促使兔骨髓干细胞动员；在兔骨髓干细胞动员促使“干细胞自我移植”的基础上，兔缺血后肢肌内注射重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)，观察其对缺血组织血管新生情况的影响及兔缺血肢体的改善情况。材料与方法选用成年健康日本大耳白兔40只，各实验兔均切断左侧股动脉及其分支，制作兔后肢缺血模型；随机分4组；bFGF组各兔在缺血后肢肌肉内多次注射重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)(n=10)，G-CSF组兔皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员兔自体干细胞释放和迁移至缺血组织(n=10)，bFGF+G-CSF组按bFGF组和G-CSF组的方法给予bFGF蛋白和G-CSF(n=10)，对照组给予等剂量生理盐水(n=10)。术后4周，各实验兔行腹主动脉造影观察缺血后肢侧支循环血管形成情况并拍摄X线片；取内收肌和腓肠肌肌肉行病理切片HE染色计数管腔由单个血管内皮细胞组成的毛细血管数目；并用免疫组织化学方法检测内收肌和腓肠肌中VEGF阳性表达的血管数。实验结果应用统计软件SPSS11.5处理。结果1大体观察麻醉意外死亡1只实验兔(bFGF+G-CSF组)，术后2d内因肠梗阻死亡1只实验兔(bFGF组)，术后4d因腹泻死亡1只实验兔(对照组)，术后5d和6d实验兔(G-CSF组)分别突然死亡1只，余均存活(生命体征平稳，饮食正常，精神状态良好等)。在观察时间内，各实验兔均未见到左后肢缺血性坏死；术后4d手术切口均愈合良好，无切口红肿、渗液等；对照组3只实验兔术后出现跛行，术后4天均能正常行走；对照组1只实验兔术后第2天左后肢出现足背部溃疡，约1cm×1cm大小，术后第5天溃疡愈合；其余3组各兔未出现跛行或溃疡；各实验兔均有不同程度的左后肢毛发脱落现象。2血常规情况G-CSF组和bFGF+G-CSF组各兔术后给予皮下注射G-CSF 10μg/kg，外周血中白细胞数量明显上升，第6天白细胞数最高达26.2×10~9/L～43.6×10~9/L，平均达35.3×10~9/L，且在第4天高倍镜下就可检测到幼稚细胞。停止皮下注射G-CSF后，外周血白细胞迅速下降，第9天基本恢复正常。其余2组各兔外周血中白细胞数量未有明显变化5.4×10~9/L～10.2×10~9/L，平均8.6×10~9/L。皮下注射G-CSF的G-CSF组和bFGF+G-CSF组与未进行皮下注射G-CSF的对照组和bFGF组之间第6天的白细胞数量有显着性差异(P＜0.05)；而G-CSF组与bFGF+G-CSF组、对照组与bFGF组之间均无统计学意义(P＞0.05)。3侧支血管数腹主动脉造影拍摄的各X线片均显示左侧股动脉连续性中断，远端股动脉均显影良好，并出现不同数量的侧支循环血管。bFGF+G-CSF组各X线片上均显示出现密集的侧支血管，呈网状分布，分别连接在中断的股动脉之间；bFGF组显示较密集的紊乱的侧支血管；G-CSF组显示出一定数量的侧支血管形成；对照组也显示出少量的侧支血管。在腹主动脉造影X线片上经股骨中点画一条垂直于股骨纵轴的直线，记录通过该直线显示的血管数，定义为该实验兔左后肢侧支血管数。bFGF+G-CSF组侧支血管数多于bFGF组(P=0.034)，也多于G-CSF组(P=0.001)；bFGF组侧支血管数多于G-CSF组(P=0.036)；3个实验组侧支血管数均多于(P＜0.05)。4毛细血管计数HE染色的兔左后肢内收肌和腓肠肌组织切片，每一标本随机选取5个视野，在400倍显微镜下观察计数管腔由单个血管内皮细胞组成的毛细血管数目，由两人独立分别计数毛细血管数目，其平均值即为毛细血管数。bFGF+G-CSF组均可见满视野由单个血管内皮细胞组成的毛细血管分布于肌束间；bFGF组可见较多的毛细血管；G-CSF组也可见不少的毛细血管；对照组可见稀疏的毛细血管。bFGF+G-CSF组血管密度多于bFGF组(P=0.000)，也多于G-CSF组(P=0.000)；bFGF组侧支血管数多于G-CSF组(P=0.002)；3个实验组侧支血管数均多于对照组(P＜0.05)。5 VEGF阳性表达的血管数VEGF抗体S-P二步法免疫组化法染色的切片，在光学显微镜下观察，血管内皮细胞胞浆染色呈棕黄色者为阳性细胞，该毛细血管即为VEGF阳性表达的血管。每一标本随机选取5个视野，在400倍显微镜下观察计数VEGF阳性表达的血管数，由两人独立分别计数染色之微血管数目，其平均值即为VEGF阳性表达的血管数。bFGF+G-CSF组均可见肌束间大量胞浆黄染的毛细血管；bFGF组可见较多胞浆黄染的毛细血管；G-CSF组也可见不少胞浆黄染的毛细血管；对照组可见稀疏胞浆黄染的毛细血管。VEGF阳性表达的血管数依次为：bFGF+G-CSF组＞bFGF组＞G-CSF组＞对照组(均为P＜0.05)。结论1．在兔缺血后肢肌肉内多次注射重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)，方法简单易行，安全可靠，可促进血管新生，增加缺血后肢血液灌注，改善肢体缺血状态；2．单纯皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)可促使兔骨髓干细胞动员，可促进兔缺血后肢的血管新生，增加侧支循环，改善肢体缺血状态；3．通过皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)促使兔骨髓干细胞动员；在兔骨髓干细胞动员促使“干细胞自我移植”的基础上，兔缺血后肢肌内多次注射重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)，可共同促进缺血组织内血管新生，建立更丰富的侧支循环，使组织缺血得到更充分的改善，效果优于单独应用bFGF蛋白或骨髓干细胞动员。
谢华[5]2008年在《改善创面局部环境促进糖尿病创面愈合的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:通过氨基胍(Aminoguanidine)腹腔注射和胰岛素、654-2湿敷,比较正常大鼠创面、糖尿病大鼠难愈创面未用药组和用药组之间创面愈合的情况,对比bFGF在叁组之间的表达情况及皮肤组织AGEs含量,分析糖尿病难愈创面局部环境的改善对创面愈合的作用及其机制。方法:建立糖尿病大鼠慢性难愈合创面模型,实验分为叁组,A组为正常大鼠创面;B组为糖尿病大鼠难愈合创面未用药组;C组为糖尿病大鼠难愈合创面用药组,叁组实验大鼠创面模型制作成功后,分别在创面形成后的1、3、7、14天随机选取各组4只大鼠,处死后剪取肉芽组织标本,每组各8个创面。检测指标:①创面愈合时间,愈合标准为肉眼观察创面上皮化达95%～100%或残余创面＜5%为创面完全愈合的标准。②组织学观察:标本以体积分数为4%的甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE染色,在光镜下观察创面肉芽组织生长情况,上皮化程度及炎细胞浸润、成纤维细胞聚集和胶原沉积等情况并照相。③皮肤组织AGEs含量检测,bFGF表达检测。结果:1、糖尿病大鼠难愈合创面用药组(C组)较未用药组(B组)愈合时间明显提前(p＜0.05),糖尿病大鼠难愈合创面用药组(C组)较正常大鼠创面(A组)愈合时间延长(p＜0.05)。2、糖尿病大鼠慢性难愈创面未用药组(B组)各个时间bFGF含量全程均较正常大鼠创面(A组)低(p＜0.05),糖尿病大鼠难愈场面用药组(C组)bFGF含量较糖尿病大鼠慢性难愈创面未用药组(B组)高(p＜0.05),糖尿病大鼠慢性难愈场面用药组(C组)较正常大鼠创面(A组)表达仍减少(p＜0.05)。3、糖尿病大鼠慢性难愈创面未用药组(B组)皮肤组织AGEs含量较正常大鼠(A组)高(p＜0.05),糖尿病大鼠慢性难愈场面用药组(C组)皮肤组织AGEs含量较糖尿病大鼠慢性难愈创面未用药组(B组)有降低(p＜0.05)。结论:1、氨基胍腹腔注射和胰岛素、山莨菪碱(654-2)湿敷能有效降低皮肤组织中AGEs的含量,促进糖尿病难愈创面的愈合,缩短愈合时间、提高愈合质量。2、糖尿病大鼠难愈合创面中bFGF的表达低于正常大鼠创面bFGF的表达。3、氨基胍腹腔注射和胰岛素、654-2湿敷通过改善糖尿病大鼠难愈创面局部环境,能促进bFGF的表达。
吕威力, 董玉兰[6]2003年在《碱性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增生的研究》文中研究说明目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对人血管内皮细胞 (EC)增生的影响及其机制 ,明确 b FGF对烟曲霉素衍生物 (TNP- 4 70 )及地塞米松 (Dex)作用的影响。 方法 培养人脐静脉内皮细胞 (HU VEC) ,采用 MTT法测定 EC生长活性 ,免疫组织化学方法检测 EC中核因子 (NF-κB)和 ki- 6 7的表达。 结果 b FGF有显着促进 EC增生的作用 ,可使核内 NF-κB和 ki- 6 7表达增强 ;TNP- 4 70及 Dex可抑制 EC增生 ,使核内 NF-κB和 ki- 6 7表达减少 ;b FGF逆转二者的抑制效应。 结论 b FGF能促进 EC增生 ,其机制可能是通过激活 NF- κB,使细胞由静止期进入增殖期 ,促进 DNA合成 ,细胞分裂增殖。 TNP- 4 70及 Dex可抑制 NF- κB活化 ,b FGF可逆转二者的抑制效应
杨剑丽[7]2009年在《人bFGF的克隆及其对HeLa细胞生长和血管生成素表达的影响》文中认为宫颈癌是世界女性第二大恶性肿瘤。已经有实验证实血管新生与宫颈癌患者预后不良有关。有多个血管生成因子参与肿瘤血管发生过程,其中主要的有VEGF、bFGF和血管生成素。bFGF是可以与肝素结合的多功能多肽家族的成员之一。它具有促血管生成的作用,它也在多种肿瘤的增殖和分化中发挥重要作用。研究发现多种恶性肿瘤都高表达bFGF。有学者研究显示宫颈癌患者的血清中bFGF含量增高。血管生成素是唯一一个以促血管发生的功能而命名的血管生成因子。血管生成素在内皮细胞可以发生核转移,进而促进内皮细胞的增殖。血管生成素在HeLa细胞中也有核转移现象,并且能够在细胞核内促进rRNA的合成。目前对于bFGF和血管生成素的研究主要集中在其如何诱发肿瘤的血管发生,进而促进肿瘤的进一步生长和恶化,以及它们在肿瘤预后评价中的相关作用。而对于二者的关系的研究比较少。有学者发现,应用血管生成素的反义核苷酸可以抑制体外培养的HeLa细胞和体内的肿瘤细胞的生长,但是细胞和肿瘤内的bFGF表达增加。本实验室前期的研究发现,在转染血管生成素反义核苷酸的黑色素瘤细胞中,bFGF的表达增加,而在转染血管生成素正义核苷酸的黑色素瘤细胞中,bFGF的表达降低。为了进一步的研究bFGF与血管生成素的关系,我们克隆了人bFGF基因,并且构建了含有人bFGF基因的正义和反义的真核表达载体,建立了稳定表达bFGF的细胞株。进而探讨在HeLa细胞中,利用bFGF基因的转染改变细胞内源的bFGF基因的表达水平对血管生成素表达的影响。实验结果显示,在转染反义bFGF基因的bFGF低表达细胞株中,细胞表达的bFGF的mRNA和蛋白都降低,细胞的增殖受到了抑制,但是血管生成素的蛋白表达水平却提高了。相反,在转染正义bFGF基因的bFGF高表达的细胞株中,细胞表达的bFGF的mRNA和蛋白均增加,同时细胞的增殖增加,然而血管生成素的的蛋白表达水平下降了。但是,高表达和低表达bFGF的细胞的血管生成素的mRNA水平无显着性差异。对HeLa细胞及高表达bFGF和低表达bFGF的细胞,施加外源的血管生成素后,HeLa细胞和转染反义bFGF基因的低表达bFGF的细胞株,细胞增殖加速,而转染正义bFGF基因的高表达bFGF的细胞株的细胞增殖无改变。实验结果表明,bFGF和血管生成素均可以直接刺激HeLa细胞的增殖。证明外源bFGF基因的转染导致细胞内源bFGF水平发生改变,这一改变负性地影响细胞内源血管生成素蛋白的表达。
陈冬悦[8]2017年在《TWEAK与增殖性糖尿病视网膜病变相关性及促细胞增殖作用的研究》文中研究指明目的:为了证实TWEAK和Fn14在增殖性糖尿病视网膜病变中上调,并有促使ARPE-19细胞增殖和胶原合成的作用。研究背景:糖尿病视网膜病变严重危害了糖尿病患者的视力,是其视力丧失的主要原因,是糖尿病危害性最大的并发症之一。持续的高血糖引起视网膜微血管的慢性病变,促进糖尿病视网膜病变病理过程的进展。临床上根据糖尿病视网膜病变(DR)的分级标准,出现视网膜新生血管或玻璃体出血和(或)视网膜前出血即发展为增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)。PDR引起反复玻璃体出血,视网膜和玻璃体纤维化,视神经萎缩以及视网膜脱离,最终可导致患者视力严重受损。PDR最显着的特征就是视网膜新生血管的形成,各种血管因子、细胞因子和炎症因子均参与这一过程。以往的重点在于各类血管内皮生长因子和其它具有促血管生成作用的因子的研究。近年来,免疫系统的紊乱和功能失衡以及血管增殖的激活也被认为参与了PDR的病理过程。另外有研究表明,在PDR增殖过程中有多种细胞参与,如成纤维细胞、RPE细胞、胶原细胞等,因RPE细胞参与血-视网膜外屏障的构成,所以RPE细胞的变化在PDR进展中尤为重要。最近肿瘤坏死因子超家族中的新成员被发现具有调节炎症和细胞增殖、促新生血管形成的作用。特别是肿瘤坏死因子样的凋亡弱诱导剂(TWEAK)具有活跃的生物学特性,它通过结合纤维母细胞生长因子诱导分子14(Fn14)激活NF-κB信号通路,调节细胞的存活和增殖,诱导释放Cathepsin B引起细胞死亡,提高前炎症分子MMP9、ICAM1和IL6的表达,而这些细胞因子均已被证实参与了PDR的病理过程。有报道称,在PDR病人玻璃体中有TWEAK和Fn14的基因表达。大量证据表明TWEAK有可能通过TWEAK/Fn14信号通路参与调控PDR的发展。本研究通过检测PDR病人玻璃体中TWEAK和Fn14的表达情况,了解TWEAK和Fn14与PDR的相关性。为确认TWEAK表达与PDR临床病理特征之间的关系,我们进一步研究了视网膜细胞过表达TWEAK后,能够提高该细胞增殖和胶原合成的能力。方法:玻璃体样本的采集通过玻璃体手术分别获得16个PDR病人和21个非PDR的2型糖尿病病人的玻璃体样本。ELISA法检测玻璃体液中TWEAK和Fn14含量通过ELISA法检测两组病人玻璃体液中TWEAK和Fn14的含量。Westernblot法分析玻璃体液中TWEAK和Fn14蛋白的表达量两组病人玻璃体液中TWEAK和Fn14蛋白的表达水平通过与GAPDH带的灰度百分比表示。目的基因的获取从293T细胞获取人的总DNA,通过PCR技术获得TWEAK扩展片段。ARPE-19细胞培养和TWEAK过表达将ARPE-19细胞进行贴壁培养。细胞融合大于90%时,以1:3的比例分代。在ARPE-19细胞中过表达TWEAK。将TWEAK编码序列克隆入pc DNA3.1(+)载体。将TWEAK-pc DNA3.1(+)和对照质粒分别转染入ARPE-19细胞。在G418液体中筛选并保存。RNA提取和定量RT-PCRRT-PCR操作按照试剂盒说明书进行,GAPDH作为内对照。TWEAK和GAPDH引物由Sangon公司合成。Westernblot法分析细胞中TWEAK蛋白的表达量检测过表达ARPE-19细胞在传代不同阶段,细胞中TWEAK蛋白的表达量。细胞计数检测,MTT检测和群落形成检测细胞计数检测获得细胞生长曲线,MTT法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力。Westernblot法分析细胞中α-SMA,collagen I和collagen IV蛋白的表达量检测过表达ARPE-19细胞在传代不同阶段,细胞中α-SMA,collagen I和collagen IV蛋白的表达量。统计和分析用Graph Pad Prism软件进行统计分析。数据结果表示为平均值加减标准差。两组间对比采用t-test,多组均数对比采用单因素方差分析。P小于0.05视为有统计学意义。结果:PDR病人玻璃体液中TWEAK和Fn14水平升高21个非PDR的T2DM病人和16个PDR病人的玻璃体样本被收录本研究中。为确定TWEAK和Fn14与PDR的相关性,通过ELISA法检测了两组病人玻璃体液中TWEAK和Fn14的含量的变化,结果显示,PDR病人玻璃体中TWEAK和Fn14含量显着升高。通过Westernblot法分析了两组病人玻璃体中TWEAK和Fn14的蛋白表达水平。结果显示,TWEAK和Fn14在PDR病人玻璃体中的蛋白表达水平也随之显着升高,因此,我们认为TWEAK/Fn14信号通路在PDR病人的玻璃体液中表达上调。稳定的TWEAK过表达ARPE-19细胞系的建立从293T细胞中获取人总DNA,利用PCR技术得到TWEAK编码序列扩展片段,然后被克隆入pc DNA3.1(+)载体,ARPE-19细胞被克隆的载体转染,可以获得稳定表达TWEAK的ARPE-19细胞系。TWEAK过表达促进了细胞增殖和胶原在ARPE-19中的合成为了研究TWEAK在ARPE-19细胞增殖中的作用,我们将ARPE-19(TWEAK过表达)组和ARPE-19(阴性对照)组的细胞生长曲线进行对比,我们发现,TWEAK过表达组细胞群在培育3天和5天时的生长速度明显加快。在培育24和48小时后,过表达组细胞的活力较对照组更强。无论初始培育的细胞数目是多少,TWEAK过表达组细胞形成的集落数目显着多于对照组。因此我们认为TWEAK过表达可以引起ARPE-19细胞的增殖和活力的增强。我们进一步研究了纤维化相关分子在两组细胞中的表达情况,结果显示,过表达组细胞中α-SMA,collagen I和collagen IV的蛋白表达水平显着高于对照组,并在细胞传代过程中表达稳定,提示TWEAK能提高纤维化相关分子在视网膜细胞中的表达。结论:在增殖性糖尿病视网膜病变病人的玻璃体中,TWEAK/Fn14通路表达上调。TWEAK/Fn14通过其相关机制推动PDR的病理发展过程。TWEAK/Fn14通路在视网膜ARPE-19细胞增殖和胶原合成中的发挥调节作用。
张晓婷[9]2013年在《化瘀散结片对DispaseⅠ诱导兔白内障的影响研究》文中研究指明目的：通过玻璃体腔注射Dispase I诱导兔增生性玻璃体视网膜病变(Proliferative vitreoretinopathy,PVR)动物模型,发现模型动物出现不同程度白内障。本实验观察了化瘀散结片对白内障模型动物晶状体混浊程度、晶状体上皮细胞增生相关的房水血管内皮细胞生长因子(VEGF).碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)浓度的影响,探讨化瘀散结片防治Dispase I诱导的兔实验性白内障的作用,为化瘀散结片防治增生性眼病提供一定实验依据。方法：采用玻璃体腔注射0.1u/0.05ml Dispase I诱导动物模型,将动物分为空白对照组、模型对照组、化瘀散结片高、中、低剂量治疗组。化瘀散结片治疗组连续28天给予不同剂量的化瘀散结片混悬液灌胃进行治疗治疗。通过裂隙灯显微镜观察模型动物晶状体混浊程度、酶联免疫法吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定晶状体上皮细胞增生相关的VEGF, bFGF的浓度进行观察和分析。结果：(1)晶状体混浊度：空白对照组与模型对照组晶状体混浊度比较有极显着差异(P<0.01)；空白对照组与化瘀散结片高、中、低治疗组比较,晶状体混浊程度的发展及程度有极显着差异(P<0.01)。(2)眼房水中VEGF含量：模型对照组兔眼房水中VEGF含量明显高于空白对照组,有极显着差异(P<0.01)；模型对照组与化瘀散结片各治疗组比较有极显着差异(P<0.01),空白对照组与化瘀散结片各治疗组比较有极显着差异(P<0.01)。且房水中VEGF的含量与化瘀散结片呈剂量相关性。(3)眼房水中bFGF含量：模型对照组与空白对照组比较有极显着差异(P<0.01),空白对照组与各治疗组比较有极显着差异(P<0.01)。模型对照组与化瘀散结片高、中剂量组比较有极显着差异妒<0.01),与低剂量组比较无差异(P>0.05)。结论：DispaseI成功诱导PVR的同时发生并发性白内障,本实验通过研究化瘀散结片对实验性白内障兔晶状体混浊程度、房水VEGF和bFGF浓度的影响,发现中药复方化瘀散结片能延缓兔实验性白内障晶状体混浊发生时间,减轻晶状体混浊程度,降低房水VEGF、bFGF浓度,从而抑制晶状体上皮细胞增生,发挥其防治白内障的作用。
朱雅琳[10]2014年在《普萘洛尔及异丙肾上腺素对体外培养婴儿血管瘤内皮细胞影响的研究》文中认为目的：1）研究普萘洛尔及异丙肾上腺素在体外对婴儿血管瘤内皮细胞生长曲线的影响，从而进一步探索研究β-肾上腺素受体在婴儿血管瘤发病机制中的作用；2）研究普萘洛尔及异丙肾上腺素在体外对人血管内皮细胞生长因子，人血管内皮细胞生长因子-2，人碱性成纤维细胞生长因子；3）研究普萘洛尔及异丙肾上腺素在体外对血管瘤内皮细胞表面β2-肾上腺素能受体表达的影响；4）研究普萘洛尔及异丙肾上腺素在体外对血管瘤内皮细胞凋亡的影响。方法将体外培养的2～3代增殖期婴儿血管瘤内皮细胞分为叁大组，分别为空白组、普萘洛尔组及异丙肾上腺素组，其中后两组再分别给予该药物的高、中、低浓度，作用一定时间后采用MTT法分别测定各组细胞的生长曲线。研究两种药物对细胞生长曲线的影响。在上述研究的基础上将培养的第2～3代增殖期婴儿血管瘤内皮细胞分为若干组，每组分别使用含有不同浓度的普萘洛尔和异丙肾上腺素的培养基及空白培养基作用一定时间（24～48小时）后使用ELISA的方法测定细胞培养上清液中人血管内皮细胞生长因子，人血管内皮细胞生长因子-2，人碱性成纤维细胞生长因子的浓度及人β2-肾上腺素能受体的表达并与空白组对照，从而研究两种药物对上述细胞因子及受体的影响。随后将培养的第2～3代血管瘤内皮细胞分为若干组，每组分别使用含有不同浓度的普萘洛尔和异丙肾上腺素的培养基及空白培养基作用一定时间（24～48小时），使用流式细胞仪分别测定两种药物作用前后的血管瘤内皮细胞的凋亡率并与空白组对照，以探讨普萘洛尔和异丙肾上腺素两种药物对该细胞凋亡的影响。结果：一定浓度的普萘洛尔作用于体外培养的血管瘤内皮细胞一定时间后发现，24～48小时组，0.16%DMSO组及其余叁种浓度对于细胞平均吸光度的影响无明显差别（P＞0.05）但在72～96小时其吸光度不全相同，进行两两比较后发现空白组、0.16%DMSO组及低浓度组（10、15ug/ml组）无明显差异，而20ug/ml组与空白组有差异（P＜0.05）。一定浓度的异丙肾上腺素作用于体外培养的血管瘤内皮细胞一定时间后发现，24～72小时内各组的吸光度值无明显差异（P＞0.05），但在96小时时发现，空白组与其余各组含有药物的培养基相比，吸光度值不全相同（P＜0.05），两两比较后发现浓度越高，测得的吸光度值越高（P＜0.05）。同时使用一定浓度的普萘洛尔及异丙肾上腺素作用于体外培养的血管瘤内皮细胞一定时间后，测定细胞培养上清液中人血管内皮细胞生长因子，人血管内皮细胞生长因子-2，人碱性成纤维细胞生长因子的浓度及人β-2肾上腺素能受体的表达，结果发现使用普萘洛尔后人碱性成纤维细胞生长因子及人血管内皮细胞生长因子-2的浓度下降，人血管内皮细胞生长因子在24小时时各组浓度无差异，在作用48小时时有所下降，而人β2-肾上腺素能受体的表达是下降的。一定浓度的异丙肾上腺素作用一定时间后发现其作用与普萘洛尔相反。最后使用流式细胞仪检测两种药物作用于血管瘤内皮细胞后的凋亡率的变化发现，普萘洛尔作用24小时时，高浓度组（20μg/ml）的凋亡率较对照组及低浓度组是明显升高的（P＜0.05）；48小时时中浓度组（10μg/ml）的细胞凋亡率较空白组也是升高的（P＜0.05），而高浓度组（20μg/ml）的凋亡率较其他各浓度组细胞的凋亡率也是升高的（P＜0.05）。异丙肾上腺素作用组与之相反，作用24小时时中高浓度组细胞较空白及低浓度组的细胞凋亡率是下降的，而作用48小时时高浓度组的细胞凋亡率较空白和中低浓度组的细胞凋亡率是下降的。结论：一定浓度普萘洛尔作用于增殖期婴儿血管瘤内皮细胞一定时间后能够抑制细胞生长，而异丙肾上腺素则反之；β-肾上腺素受体在婴儿血管瘤发病中有重要作用。同时一定浓度普萘洛尔作用于体外培养的血管瘤内皮细胞，对人血管内皮细胞生长因子，人血管内皮细胞生长因子-2，人碱性成纤维细胞生长因子的浓度及血管瘤内皮细胞表面β2-肾上腺素能受体的表达是起抑制作用的，而异丙肾上腺素的作用是与之拮抗的。最后普萘洛尔及异丙肾上腺素对于体外培养的血管瘤内皮细胞的凋亡率的影响的作用也是相互拮抗的。因此，β-肾上腺素能受体在血管瘤的发生发展过程中是起到重要作用的，它有可能是通过对相关细胞因子以及对细胞凋亡的影响而起作用的。
参考文献：
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[2]. 碱性成纤维细胞生长因子促进人血管内皮细胞增生的研究[D]. 吕威力. 中国医科大学. 2003
[3]. 普萘洛尔治疗血管瘤分子机制的初步研究及临床应用[D]. 赵忠芳. 新疆医科大学. 2011
[4]. bFGF和G-CSF促进兔缺血后肢血管新生的实验研究[D]. 王志伟. 郑州大学. 2007
[5]. 改善创面局部环境促进糖尿病创面愈合的实验研究[D]. 谢华. 昆明医学院. 2008
[6]. 碱性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增生的研究[J]. 吕威力, 董玉兰. 中国修复重建外科杂志. 2003
[7]. 人bFGF的克隆及其对HeLa细胞生长和血管生成素表达的影响[D]. 杨剑丽. 东北师范大学. 2009
[8]. TWEAK与增殖性糖尿病视网膜病变相关性及促细胞增殖作用的研究[D]. 陈冬悦. 吉林大学. 2017
[9]. 化瘀散结片对DispaseⅠ诱导兔白内障的影响研究[D]. 张晓婷. 成都中医药大学. 2013
[10]. 普萘洛尔及异丙肾上腺素对体外培养婴儿血管瘤内皮细胞影响的研究[D]. 朱雅琳. 新疆医科大学. 2014
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