彭慕建1 沈建忠1 彭丽芳2
（1.井冈山大学附属医院）
（2.吉安市中心人民医院 343000）
【摘 要】目的：探讨脂蛋白脂肪酶基因Ser447Stop多态性与缺血性脑血管病之间的关系。方法：选取100例缺血性脑血管病患者作为研究组，另选100例健康志愿者作为对照组，用限制性片段多态性分析和聚合酶链反应来确定其基因型。结果：与对照组相比,脑梗死患者组血清TG,LDL-c水平较对照组升高(P＜0.05);脑梗死患者组血清CHO,ApoAⅠ,ApoB100水平较对照组降(P＜0.05)。在HDL-c方面，两组无显著性差异（P＞0.05）。在HDL-c方面，两组无显著性差异（P＞0.05）。研究组CG、G等位基因较对照组少。结论：脂蛋白脂肪酶基因Ser447Stop多态性与缺血性脑血管病之间有一定的相关性，在脑梗死方面尤为突出，因此其可作为缺血性脑血管病信号和保护因素。
【关键词】脂蛋白脂肪酶；基因；Ser447Stop；缺血性脑血管病
【中图分类号】R743 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）8-0653-02
近年来，随着社会的发展，人们生活压力的不断增加，缺血性脑血管病的患者不断提升。随着科学技术的发展，许多国内外专家学者认为，缺血性脑血管病是多种因素共同作用的结果。经过大量的研究,发现了许多与之相关的基因位点和多态性,其中包括脂蛋白脂肪酶基因多态性的研究[1]。脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)是分子量为65000的糖蛋白, 由骨骼肌细胞、脂肪细胞、心肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成和分泌的甘油水解酶, 甘油三酯水解为甘油及脂肪酸，在乳糜微粒及极低密度脂蛋白的分解代谢中具有关键性作用。目前国内外的研究集中在LPL基因多态性与动脉粥样硬化性疾病,并取得了重要进展。本研究选取2013年9月~2015年3月收入的100例缺血性脑血管病患者作为研究组，另选100例健康志愿者作为对照组，采用用限制性片段多态性分析和聚合酶链反应来确定其基因型，以明确LPL Ser447Stop突变与缺血性脑血管病是否有相关性，为缺血性脑血管病的预防和基因治疗提供理论依据。以下为本研究的回顾分析。
1 资料与方法
1.1一般资料
本研究于2013年9月~2015年3月收入100例缺血性脑血管病患者作为研究组，其中包括脑梗死72例，短暂性脑缺血发作患者28例。研究组中男60例，女40例，年龄43~85岁，平均年龄（60.2±3.2）岁，所有患者全国第四届脑血管病学术会议诊断标准(1986)为诊断依据经头颅CT或MRI证实[2]。所选取的患者均均不存在以下情况：1、哺乳期的妇女或怀孕妇女；2、患有严重心肝肾疾病的患者；3、有恶性疾病、严重疾患的症状；4、药物过敏；5、患有精神方面的疾病。另选取100例健康志愿者作为对照组，男60例，女40例，年龄42~85岁，平均年龄（60.1±2.8）岁。研究组和对照组在年龄、性别、精神等基本资料方面无统计学差异（P＞0.05），组间具有一定可比性。
1.2方法
对观察组和研究组患者进行血清脂质的检测和基因分型。1、血清脂质检测：将所收集的血清标本解冻后1 h内完成检测。酶法测定TC和TG,选择性遮蔽法直接测定HDL-c,直接测定法测定LDL-c,免疫比浊法测定ApoA Ⅰ，ApoB100。2、基因分型: （1）白细胞DNA的抽提:STMT破碎红细胞及白细胞的细胞膜，离心收集白细胞核，苯酚氯仿提取，乙醇沉淀洗涤，待测。（2）生物学的聚合酶链反应(PCR)的扩增: 将RAPD反应试剂加入EP管中轻混后用100ul石蜡油覆盖于反应混合液之上，防止样品在反复加热-冷却的过程中蒸发，盖好盖子。开PCR反应仪设置适应的数据，将EP管放入仪器开始扩增，循环35次；72摄氏度延伸10min，仪器为Model MyGene 25 Plus。（3）扩增产物酶切:取MnlI限制性内切酶2.5 U，PCR扩增产物10μL，总反应体积20μL，37℃水浴4 h,水浴结束后56℃20 min终止反应；取和6×上样缓冲液2μL及酶切产物10μL进行2 g/dl琼脂糖凝胶电泳，观察结果。扩增产物长488bp,经MnlI限制性内切酶水解后出现三种基因型: LPL Ser447stop突变纯合子(GG)型(246bp,203bp)；LPL Ser447stop无突变(CC)型(285bp,203bp);LPL Ser447stop突变杂合子(CG)型(285bp,246bp,203bp) [3]。
1.3统计学方法
本文采用SPSS19.0软件进行统计分析，观测数据以平均值±标准差来表示，采用T检验，计数资料用百分比（%）表示，采用卡方检验，当P值＜0.05时认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 研究组与对照组载脂蛋白和血脂水平
如表1，可以看出，研究组血清TG,LDL-c水平较对照组明显升高(P＜0.05)，差异具有统计学意义；研究组血清CHO,ApoAⅠ,ApoB100水平较对照组明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义。在HDL-c方面，两组无显著性差异（P＞0.05）。
3 讨论
脂蛋白脂肪酶(LPL) 全称三脂酰甘油蛋白脂酰基水解酶，成熟的LPL主要是由骨骼肌、心肌、脂肪细胞等肝外实质细胞合成分泌、释放入血后，借助硫酸肝素等葡糖胺聚糖结合在毛细血管内皮上，通过非共价键结合形成的同二聚体产生活性，由Ser132、Asp156及His241组成其催化中心。LPL基因位于8号染色体的短臂,由10个外显子与9个内含子组成，长约35 kb。外显子1～9编码475个氨基酸的蛋白质,其中外显子2编码酶与脂质结合的部位,外显子4～6编码酶的催化活性部位，外显子6和9编码酶与肝素结合的部位 [4]。已发现LPL存在数十种基因变异,LPL Ser447stop突变是LPL常见变异之一。93位染色体的T突变为G是一种位于调节区的突变，这种突变可以增强启动子的活性，因此可以推测这种突变对携带者有保护性作用。
LPL的突变可以影响其催化功能,造成严重高乳糜微粒血症,并出现三酰甘油水平升高等临床症状。动脉粥样硬化与LPL导致的高三酰甘油血症之间的关系尚未得到广泛证实。相关文献显示,Asp9Asn,Asn291Ser,Gly188Glu和其它一些罕见突变通常与低高密度脂蛋白胆固醇和血浆高三酰甘油呈正相关[5]。不过近年有文献显示Ser447stop突变是一种保护性因素,能抑制冠心病的发生发展。在Framingham研究中,受试者中约17%为Ser447stop突变携带者,在男性患者中这种突变与三酰甘油水平降低和高密度脂蛋白胆固醇水平增高有关,对男性冠心病患者有一定保护作用[6]。
在本次研究中，与对照组相比,脑梗死患者组血清TG,LDL-c水平较对照组升高(P＜0.05);脑梗死患者组血清CHO,ApoAⅠ,ApoB100水平较对照组降(P＜0.05)。在HDL-c方面，两组无显著性差异（P＞0.05）。研究组CG、G等位基因较对照组少。
综上所述，脂蛋白脂肪酶基因Ser447Stop多态性与缺血性脑血管病之间有一定的相关性，在脑梗死方面尤为突出，因此其可作为缺血性脑血管病信号和保护因素。
参考文献：
[1]黄鑫,方定志,杜娟等.脂蛋白脂肪酶基因Ser447stop多态性对高糖低脂膳食诱导的健康青年血脂比值变化的影响[J].四川大学学报（医学版）,2010,41(2):243-246.
[2]梁旭方,李月琴,李贵生等.真鲷脂蛋白脂肪酶基因顺式元件PPRE及在肝脏活体调控作用[J].热带海洋学报,2004,23(4):49-55.
[3]邹宏丽,宋玉强,王文等.急性心肌梗死患者脂蛋白脂肪酶基因Ser447Stop的多态性研究[J].山东医药,2008,48(7):7-9.
[4]林慧琼,钟维章,滕晓茗等.脂蛋白脂酶基因Ser447stop多态性与脑梗死的关系[J].临床荟萃,2009,24(1):40-42.
[5]胡晓雁,肖志杰,刘晗睿等.脂蛋白脂肪酶-447C/G基因多态性与老年脑梗死的关系[J].中国动脉硬化杂志,2012,20(10):918-922.
[6]穆云翔,解用虹.脂蛋白脂肪酶基因突变研究进展[J].中国动脉硬化杂志,2002,10(4):358-362.
论文作者:彭慕建1,沈建忠1,彭丽芳2
论文发表刊物:《河南中医》2015年8月
论文发表时间:2016/6/1
标签：脂蛋白论文; 缺血性论文; 多态性论文; 基因论文; 突变论文; 脂肪论文; 对照组论文; 《河南中医》2015年8月论文;