酶联免疫法与磁微粒化学发光法检测HBV论文_张云,高双双,江旭

南阳市中医院 河南南阳 473000

【摘 要】本实验采用酶联免疫法(A法)与磁微粒化学发光法(B法),对128例HBsAg和HBV-DNA均阳性的标本,11例HBsAg阴性标本,分别进行PreS1Ag检测,并与常见的HBV血清标志物结果做比较分析。A法PreS1Ag检出率为79.7%,B法PreS1Ag检出率为95.3%。PreS1Ag与HBV-DNA的相关性较HBsAg更优,B法较A法敏感度高。

【关键词】酶联免疫法;磁微粒化学发光法;PreS1Ag;HBV-DNA

乙型肝炎病毒(HBV)感染可导致肝脏的炎症,称为乙型病毒肝炎,是威胁人类健康的重要传染病之一。乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV PreS1Ag),存在于完整的乙型肝炎病毒颗粒(Dane颗粒)表面,是乙肝病毒外膜蛋白的重要组成部分,参与乙肝病毒的组装、分泌,还可识别肝细胞膜上特异性受体[1]。可作为病毒感染和复制的重要辅助指标[2-3],本实验采用两种方法对HBV PreS1Ag进行检测,并与HBV血清标志物结果比较分析。

1 资料与方法

1.1一般资料:均来自本院就诊患者。常规抽取静脉血,分离血清置-20℃保存待检。

1.2试剂:A法为郑州安图公司ELISA双抗体夹心法试剂盒,批号为141209;B法为郑州安图磁微粒化学发光法试剂盒,批号为150209。质控血清购自中国卫生部临床检验中心。

1.3仪器:A法为上海科华公司ST-360酶标仪;B法为郑州安图公司Auto 2000化学发光分析仪。

1.4测定方法:A法用聚苯乙烯板包被抗-PreS1,与标本中的PreS1Ag结合,加入辣根过氧化物酶标记的抗-PreS1温育,洗去游离的酶标抗体,以四甲基联苯胺为底物显色,经酸终止后在450/630nm处读取吸光度(OD)值。Cut off值=2.1×阴性对照孔平均值。

B法血清50ul放在Auto 2000化学发光分析仪的标本架上,仪器自动吸样分析。

1.5结果判断标准:A法以标本OD值与临界OD值的比值(≥s/co)为阳性;B法用标本相对光强度与标准曲线比较计算出浓度。

1.6统计学分析:统计软件SPSS17.0对数据进行分析,各方法对比采用X2检验,P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 A法与B法检测HBV PreS1Ag的结果(n=139):用两种方法对这139份标本的PreS1Ag 进行测定和分析,11例HBV-DNA阴性患者,A法和B法检测PreS1Ag均为阴性。组间比较P<0.05,两种方法有显著统计学差异,见表1。

2.2用两种方法对不同模式HBV标志物的标本进行PreS1Ag的检测,并对PreS1Ag阳性检出率进行比较,见表2

3 讨论

在测定乙肝病毒PreS1Ag的检测方法中,A法由于操作简便、快捷、成本较低,因此应用广泛,但由于不同厂家生产的试剂有较大差异,分离结合态抗体的不确定性,以及反复洗板带来的误差,因此带来一系列误差,容易出现较高的假阴性。B法综合了磁微粒载体技术和化学发光免疫技术,使测量结果更准确、稳定,且全面实现了检测的自动化和标准化,减少了人工操作带来的误差,大幅度减少了批内、批间的误差[4]。

本实验与HBV常见血清标志物的比较显示:PreS1Ag、HbeAg、HBV-DNA有很好的相关性。而且在HbeAg(-)、抗-HVc(+/-)病例组中,B法与HBV-DNA符合率较高。提示此组患者病毒仍在复制,表明PreS1Ag在反映HBV复制方面较HbeAg更有意义。因此临床上增加PreS1Ag检测对HBV感染患者的治疗和预后可以提供有效知道,值得临床应用和推广。

参考文献:

[1]张娟.乙型肝炎分子生物学诊断技术的研究发展.国外医学:临床生物化学与检验学分册,1996,17(3):127-129

[2]姚雯颖,曹广亚,徐斌.乙肝前S1抗原与HBV血清标志物HBV-DNA的关系.中国实用医学研究杂志:2003,2(3):364-366

[3]刘彦华,倪旭.HBV-前C区基因变异与乙肝病毒复制的相关性,河北医药:2007,29(10):1056-1058

[4]陈慧英,张锦峰,岑小鹏,等.ELISA检测乙型肝炎HbsAg室内质控血清的试剂和使用[J].上海医学检验杂志:2010,15(4):203-205

论文作者:张云,高双双,江旭

论文发表刊物:《航空军医》2015年9期供稿

论文发表时间:2015/12/23

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