胡锦林 王灿铭（通讯作者） 郭振英
（浙江省肿瘤医院病理科 浙江 杭州 310022）
【摘要】 目的：比较GS切片染色套液与常规染色液在病理制片技术中的作用与效果，为病理制片寻找更为环保、健康的制片方法。方法：收集2000例病理切片标本，分成2组，每组1000例，分别用GS切片染色套液和常规染色液行H-E染色，观察制片效果。结果：使用GS切片染色套液和常规染色液制出的切片按照H-E染色质量评定标准，差异无统计学意义（P＞0.05）；工作环境中，使用常规染色液空气质量相对较差。结论：GS切片染色套液可以代替常规染色液在病理制片技术中的应用。
【关键词】 GS染色套液；常规染色液；二甲苯；染色质量
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）03-0026-03
Application of GS stainingsolution sets in pathology techniques instead of theconventional staining solution
Hu Jinlin, Wang Canming(Communication author), Guo Zhenying.
Department of Pathology, Zhejiang Cancer Hospital, Hangzhou, Zhejiang 310022,China
【Abstract】Objective To investigate more environmentally friendly and healthy staining methods, we compared the utility ofGS staining solution sets and the conventional staining solutions. Methods Total 2000 cases of specimens were selected and divided into 2 groups.Each group was stained with GS staining solution sets or conventional staining solutions for H&E staining. Results According to H&E staining quality assessment standards, the difference between two groups was not significant (P> 0.05); air quality ofthe work environmentis relatively poor using conventional staining solutions. Conclusion GS staining solution sets can replace conventional staining solutions in the pathological techniques.
【Key words】GS staining solution sets; Conventional staining solutions; Xylene; Staining quality
随着人们健康环保意识的不断增强，病理实验室的环保问题已越来越受关注。在日常工作中，病理技师在切片后，需进行脱蜡、水洗、苏木精伊红染色、脱水、透明等染色步骤，其中，脱蜡、脱水是否彻底和透明的好坏直接影响病理制片的质量。二甲苯是常用的脱蜡剂和透明剂，但二甲苯具有一定的毒性，长期接触对身体健康产生严重损害。本研究使用环保型GS切片染色套液代替常规染色液应用于H-E染色，效果满意，现介绍如下：
1.材料与方法
1.1材料
选取我院2014年8月～2015年4月常规HE染色切片2000例，包括肺、子宫、乳腺、甲状腺、淋巴结等组织。经常规10%中性缓冲福尔马林固定，脱水处理，石蜡包埋，切片厚度4μm。
1.2设备
德国Leica ST5020染色机，Leica CV5030封片机，DHG-9053A型恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。
1.3试剂
GS切片染色套液（哈尔滨格林标本技术开发有限公司），常规染色液（包括二甲苯、梯度酒精、苏木精、伊红等）。
1.4方法
2000例切片分成2组，每组各1000例，分别行GS切片染色套液和常规染色液染色。（一）常规染色步骤：⑴二甲苯Ⅰ 1min；⑵二甲苯Ⅱ 2min；⑶二甲苯Ⅲ 2min；⑷无水酒精 1min；⑸95%酒精 1min；⑹70%酒精1min；⑺水洗 1min；⑻Gill苏木素液 5min；⑼水洗1min；⑽1%NaHCO3水溶液1min；⑾水洗3min；⑿伊红 15sec；⒀水洗10sec；⒁75%酒精 30sec；⒂95%酒精1min；⒃无水酒精Ⅰ1min；⒄无水酒精Ⅱ2min；⒅二甲苯Ⅰ1min；⒆二甲苯Ⅱ 2min。（二）GS 染色套液染色步骤：⑴脱蜡液Ⅰ5min；⑵脱蜡液Ⅱ5min；⑶脱蜡液Ⅲ5min；⑷浸水液Ⅰ10sec；⑸浸水液Ⅱ10sec；⑹水洗1min；⑺苏木素预染液20sec；⑻苏木素染色液4min；⑼水洗2min；⑽蓝化液10sec；⑾水洗1min；⑿脱水Ⅰ10sec；⒀脱水Ⅱ20sec；⒁脱水Ⅲ20sec；⒂脱水Ⅳ20sec；⒃脱水Ⅴ10sec；⒄透明液Ⅰ1min；⒅透明液Ⅱ1min。
1.5 结果评估
常规石蜡切片和H-E染色的质量标准参照《病理学高级教程》[1]，评定标准：（1）切片完整，厚度4～6μm，厚薄均匀，无褶无刀痕；（2）染色核质分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。
1.6 统计学处理
采用SPSS 21.0统计软件将两种染色液制片效果进行统计分析，行χ2检验，比较差异用P＜0.05表示有统计学意义。
2.结果
2.1 两种染色液制片效果比较
采用环保型GS染色套液制片方法简单，染液渗透均匀，染色核质分明，红蓝适度，形态结构清晰，与常规染色液制片效果差异无统计学意义（P＞0.05），结果稳定（图1-5）。经1000例切片进行比较后，两种染色液效果见表1。
表1 GS染色套液与常规染色液制片效果比较
试剂种类 制片数甲级片乙级片丙级片
GS染色套液1000 867 112 21
常规染色液 1000 878 96 26
注：两组比较，P＞0.05。
2.2 使用两种染色液工作环境比较
使用常规染色液在制片过程中，试剂产生的气味明显比用GS染色套液制片时浓烈，工作环境的空气质量使用常规染色液比用GS染色套液差。
3.讨论
近百年来，常规HE染色以其稳定的效果，低廉的价格，一直为国内外各病理实验室所使用。然而，常规病理学技术中有毒化学试剂的使用也一直威胁者病理工作者的健康和环境的污染，其中以二甲苯尤为突出。二甲苯是常规HE染色的常用透明剂，为无色透明液体，与乙醇、液状石蜡、氯仿等可以互溶，沸点为137～140℃，易挥发，有刺激性气味，为中等毒性，具有一定致癌性，可对环境造成一定污染[2]。
随着病理学技术的发展和医学实验室对环保标准的逐步提高，使用环保试剂，创建“绿色”实验室已是趋势。国内外已有使用二甲苯等替代产品的相关报道[3-6]，国内亦有部分病理实验室由于担心二甲苯的毒性，省去最后二甲苯的步骤，改为封片前用热风吹干或烤干，导致H-E染色质量欠佳， 颜色发朦，细胞收缩，组织结构欠清晰[7]。本实验采用哈尔滨格林标本技术开发有限公司研发的环保型GS切片染色套液与常规染色液对H-E染色效果进行评估，效果满意。环保型GS切片染色套液代替常规染色液具有以下优势：（1）安全无毒，无明显刺激性气味，不含二甲苯、汞等有毒有害物，不会对环境造成污染；（2）自动染色机程序适当调整即可使用，脱蜡和透明效果与二甲苯相当，着色鲜艳，对比度好；（3）染液对组织切片的渗透性好，脱水时间可缩短，而长时间的透明对伊红的退色亦不明显，适用于午休等空余时间在染色机上的使用；（4）不与水汽混合，在潮湿的环境下浓度也不会明显下降；（5）不同人员配置的试剂，处理方法不同，很难标准化。而GS染色套液解决了实验室质量控制的标准化问题，保证质量的稳定。
本研究通过1000例切片分别应用GS染色套液和常规染色液对染色后的切片质量分析，结果显示两种染色液制片效果比较差异无统计学意义（P＞0.05），说明GS染色套液可以代替常规染色液应用于常规病理制片技术中。GS染色套液达到了病理诊断所需的标准，且无毒环保，若能充分发挥其优势，将大大改善病理实验室的工作环境，真正实现健康、环保、优质、高效。
附图：
图①A、②A、③A、④A、⑤A为常规染色套液制片；图①B、②B、③B、④B、⑤B为GS染色套液制片，两者效果一致，结果稳定。
【参考文献】
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[7]刘勇，卢少芬，周虹等.染色后干片是影响苏木精-伊红染色质量的重要因素[J].中华病理学杂志，2013，42(4):271-272.
论文作者:胡锦林,王灿铭（通讯作者）,郭振英
论文发表刊物:《医药前沿》2016年1月第3期
论文发表时间:2016/5/20
标签：切片论文; 常规论文; 制片论文; 甲苯论文; 病理论文; 苏木论文; 效果论文; 《医药前沿》2016年1月第3期论文;