一、青少年原发性骨肉瘤临床病理分析（论文文献综述）
王紫玥[1]（2021）在《利用生物信息学结合大数据分析骨肉瘤预后相关基因并探索STC2基因在骨肉瘤中的表达及意义》文中研究表明研究目的:骨肉瘤是原发骨肿瘤中最常见的一种类型,其发病率与死亡率逐年上升,其临床主要表现为:骨骼、关节疼痛和局部肿块;病理学镜下特征主要表现为肿瘤性成骨。化疗耐药与远期肺转移是导致患者死亡的主要原因。因为骨肉瘤细胞具有高度异质性,目前尚无有效的肿瘤治疗。但前沿的靶向治疗为疾病临床诊疗带来希望,目前,已经在骨肉瘤中尝试或应用的靶向药物类型有:表皮生长因子受体EGFR阻断剂、特定细胞标志物单克隆抗体、免疫检查点的抑制剂、I型干扰素等,目前可用于临床治疗骨肉瘤的的分子靶点数量较少,远不足以满足临床诊疗需要。利用生物信息学结合大数据分析,多维度挖掘骨肉瘤相关基因数据,并结合分子生物学实验进行验证,是筛选骨肉瘤潜在的诊疗基因靶点的重要手段。本研究将综合利用大数据分析、生物信息学工具以及实体组织验证,综合对影响骨肉瘤发生发展的基因群进行多维度分析,旨在探索潜在的临床诊疗新型靶点。具体研究内容:1、通过生物信息学结合大数据分析,筛选与正常骨组织相比,在骨肉瘤中表达出现异常的基因群,并进行基因功能注释以及模块分析,对潜在的核心基因构建高低风险特征模型,进一步筛选出与病人预后相关的关键基因。2、利用Prot Param、Genecards、R语言、GEPIA、Oncomine等生信手段,分析预后相关的关键基因理化性质、细胞定位、表达水平、周围相关蛋白、共表达基因谱系,并进行临床病理学特征分析,逐步解析STC2基因在肿瘤中的作用模式。3、应用生物样本库中骨肉瘤实体组织与细胞系,验证关键基因表达,并分析其临床病理特征,探索STC2基因作为骨肉瘤预后标志物的潜在可行性。研究方法:1、骨肉瘤预后相关基因的数据挖掘及基因表达特征模型的构建（1）从Gene Expression Omnibus（GEO）数据库中挑选出合适的骨肉瘤数据集（筛选标准:（1）样本量>10例;（2）含正常对照组织;（3）近十年内公布数据）,分析骨肉瘤和正常组织之间的差异表达基因（DEGs）。（2）根据基因表达量的差异倍数,对所有差异表达基因进行分组,对各组基因进行基本功能注释,包括分析其主要表达的细胞定位、发挥的生物学功能以及参与的信号通路。（3）在基因进行基本功能注释后,利用Cytoscape对差异表达基因进行功能模块分析,挑选其中关键模块基因使用survexpress进行风险评估,筛选出与病人预后相关的高风险组基因。2、生物信息学分析STC2基因在骨肉瘤中的作用（1）使用Prot Param预测STC2蛋白的基本理化性质,包括:氨基酸组成、分子量、等电点、不稳定系数、蛋白半衰期、疏/亲水性等。（2）分别应用c NLS-mapper以及TMHMM网站进行核定位区域及跨膜区域分析预测,明确STC2基因在细胞中的基本表达定位,探索其潜在的作用模式。（3）使用Genecards在线分析STC2蛋白的亚细胞定位。（4）利用oncomine数据库对STC2在骨肉瘤组织中的表达情况进行分析,包括:肉瘤与普通组织、肉瘤和其他类型肿瘤、各种类型的肉瘤3种不同模式。（5）使用CELL等数据库分析STC2在骨肉瘤细胞水平的基本表达情况,主要对比分析:m RNA芯片、转录组测序2种不同类型。（6）从TCGA数据集中下载肉瘤患者原始数据信息,包括:性别、种族、新辅助化疗、药物治疗、肿瘤深度、坏死程度、复发、转移、器官侵犯等等,统计学分析STC2基因表达与骨肉瘤临床病理特征之间的关系。3、验证STC2在骨肉瘤中的表达及临床意义（1）收集山西医科大学第二医院病理科骨肉瘤样本以及临床病理资料,进行STC2免疫组化染色,对阳性表达定位、阳性率均进行评估。（2）统计学分析STC2与山西医科大学第二医院骨肉瘤患者临床病理特征的关系,并和TCGA中大数据分析的结果进行对比。（3）使用癌症细胞系百科全书数据库分析STC2基因过表达与干扰前后,对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,包括骨肉瘤与其它肿瘤细胞增殖能力以及骨肉瘤与正常细胞增殖能力对比。研究结果:1、骨肉瘤预后相关基因的数据挖掘及基因表达特征模型的构建（1）数据筛选:在GEO数据库中,筛选得到条件合适的2个骨肉瘤数据集:GSE12865和GSE42352,其中GSE12865数据集包含14个样本,包括:12个骨肉瘤样本,和2个正常组织样本。GSE42352数据集包含87个样本,包括:84个骨肉瘤样本,和3个正常组织样本。（2）根据差异基因筛选标准:（1）p<0.05;（2）|log2FC|≤1.0（差异表达倍数小于2）、1.0≤|log2FC|≤2.0（差异倍数大于2小于4）、2.0≤|log2FC|≤3.0（差异倍数大于4小于8）、3≥|log2FC|（差异表达倍数大于8）将差异表达基因分成一、二、三、四组,并对四组基因进行功能注释。结果显示:差异表达量较高的三、四组基因主要富集在细胞膜和细胞外。（3）对差异基因进行功能模块分析,结果显示:评分较高的核心模块亦主要富集于细胞外、细胞基质构架,并且包含22个基因,分别为:CCND1、CD44、CXCR4、FGF2、TP53、MMP9、QSOX1、EVA1A、DMP1、MXRA8、MEPE、GAS6、LGALS1、PNPLA2、SPARCL1、MFGE8、AMBN、AMTN、SPP1、STC2、IGFBP4、PRSS23。（4）将核心模块中的22个基因构建表达特征模型,并进行风险评估,根据评估结果将基因进一步分为高、低风险两组,鉴定出与患者预后显着相关的高风险组基因。结果显示:高风险组中MMP9、EVA1A、SPP1、STC2基因与患者差相关。（5）对于MMP9、EVA1A、SPP1、STC2四个基因逐个进行单因素生存分析,结果显示仅有STC2与患者总生存预后显着相关,其表达量越高病人预后越差;而其余MMP9、EVA1A、SPP1基因与患者预后无明显相关关系。2、STC2基因在骨肉瘤中的表达及作用（1）分析STC2基因信息理化性质,包括氨基酸组成、蛋白质等电点、半衰期、疏水性及亲水性、核定位区域、跨膜区域、亚细胞定位等,结果显示:STC2蛋白为具有一定稳定性的亲水性蛋白,且对基因生物学功能分析结果提示,其调节细胞钙/磷酸盐稳态,并与雌激素分泌相关。（2）STC2基因细胞定位分析显示:基因不存在跨膜区域或核定位序列,人STC2蛋白主要分布在内质网和细胞外。（3）STC2基因表达模式显示:与其它肿瘤组织相比,其在骨肉瘤组织和细胞系中表达均明显升高。而且,在骨肉瘤的不同亚型（成骨型骨肉瘤、成软骨型骨肉瘤、成纤维型骨肉瘤、毛细血管扩张型骨肉瘤）中,STC2在成骨型和成软骨型骨肉瘤中表达明显高于其余二组,提示其与骨组织发育具有潜在相关性。（4）GEPIA和TCGA的数据分析显示,STC2基因表达与患者的生存预后显着相关,其表达含量越高,患者预后越差。（5）构建以STC2为中心的PPI蛋白,并分析基因潜在生物学功能,结果显示:与STC2蛋白相关性最强的前10名蛋白有:IGFBP5、CYR61、PENK、FSTL3、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP1、FAM20A、BPIFB2、FAM20,其中显示与成骨机制相关的基因有5个,分别为IGFBP5、CYR61、PENK、FSTL3、IGFBP3。3、验证STC2在骨肉瘤中的表达及临床意义（1）收集山西医科大学第二医院43例骨肉瘤组织进行STC2免疫组化检测,染色结果显示:STC2蛋白主要定位在细胞核。（2）分析STC2与骨肉瘤患者临床病理特征的关系结果显示:STC2表达在化疗后显着降低,差异具有统计学意义。（3）细胞学验证STC2对骨肉瘤细胞增殖功能的影响结果显示:STC2基因过表达后,与STC2基因低表达的细胞株相比,其增殖能力明显增强。研究结论:1、骨肉瘤预后相关基因的数据挖掘及基因表达特征模型的构建骨肉瘤中表达差异倍数较高的基因,主要富集于细胞外,提示调控骨肉瘤发生发展的核心基因可能在细胞外或细胞基质构架中发挥功能;而且,风险评估的结果显示:STC2、MMP9、EVA1A、SPP1四个基因与患者预后相关,其中STC2基因的预后价值通过单因素分析得到验证。2、STC2基因在骨肉瘤中的表达及作用对STC2蛋白的基本性质,包括亲疏水性、稳定性、细胞定位以及参与的信号通路等进行分析,结果显示:STC2基因对钙磷稳态进行调节,而且STC2蛋白分泌型蛋白与骨肉瘤的发生发展具有潜在相关性。3、验证STC2在骨肉瘤中的表达及临床意义在43例骨肉瘤组织免疫组化的分析结果显示,STC2蛋白主要定位于细胞核,且其表达在化疗组显着降低,差异具有统计学意义;而且,STC2表达与骨肉瘤细胞增殖能力明显相关。
张杰[2]（2021）在《TRIM35调控骨肉瘤细胞迁移和侵袭作用机制的研究》文中指出背景:骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是一种临床上较为普遍的原发性恶性骨肿瘤,较强的侵袭性是青少年和儿童癌症引起死亡的重要原因之一,其发病率与死亡率逐年增加。骨肉瘤患者的发病受多种环境和遗传因素的复杂网络调控,临床早期特异性的诊断标志物的缺乏,导致其确诊时往往发生转移。目前临床上对OS的治疗主要采用早期手术切除原发病病灶以及联合多种化疗药物的联合治疗,但是其治疗过程中的副作用产生的毒性作用现今仍然无法预测和解决,导致OS患者不良预后的产生与生存率的减低。因此,对骨肉瘤的早期发生发展的相关基因以及其分子机制的研究,可为临床患者的早期诊断和靶向用药提供新的理论支撑。随着生物科学技术的不断进步,在恶性肿瘤的靶向分子治疗中,越来越多的癌基因与抑癌基因的研究被用于癌症的早期诊断和良好预后的改善措施之中。TRIM35（Tripartite motif 35）属于三元基序家族蛋白成员之一,其具有高度保守结构域的蛋白质,参与了多种肿瘤的发生发展,其对癌细胞的迁移和侵袭的生物学功能有着重要的作用。本研究主要研究TRIM35在骨肉瘤患者与正常骨组织中的表达情况;TRIM35的表达强度与骨肉瘤临床病理参数之间的关系,以及骨肉瘤患者生存的危险因素的分析;分析TRIM35的表达是否是骨肉瘤患者的独立危险因素;进一步在细胞水平研究TRIM35的表达水平是否通过EMT进程和Wnt/β-catenin通路对人骨肉瘤细胞系143B与Saos-2的迁移与侵袭能力产生影响。方法:1.在2018年10月至2019年12月于延安大学附属医院病理科收集正常骨组织30例和64例骨肿瘤组织的切片以及标本的临床信息。利用免疫组织化学染色技术检测TRIM35骨肉瘤组织中和正常骨组织的表达情况,采用KaplanMeier生存曲线法对骨肉瘤患者的预后进行单因素分析,COX比例风险回归模型中行多因素分析TRIM35对患者预后风险的影响。2.构建TRIM35的过表达质粒载体以及siRNA,分别转染到骨肉瘤细胞Saos-2和143B中,应用qRT-PCR和Western Blot验证转染效率。在143B细胞中沉默TRIM35的表达和Saos-2细胞中过表达TRIM35后,分别应用细胞划痕和Transwell实验检测TRIM35对骨肉瘤细胞侵袭与转移能力的影响。3.通过siRNA沉默TRIM35在骨肉瘤143B细胞中的表达,在骨肉瘤细胞Saos-2转染过表达质粒载体,应用Western Blot检测EMT进程的标志性蛋白及调控EMT进程的关键转录因子,明确TRIM35是否对于EMT进程相关。通过细胞免疫荧光技术进检测各Saos-2细胞的各处理组中β-catenin的表达及定位情况,以此判断TRIM35与Wnt/β-catenin通路有无关联。结果:1.免疫组化结果显示TRIM35在骨肉瘤组织中表达显着升高;骨肉瘤临床病理参数结果分析表明了TRIM35的表达强度与肿瘤大小、复发、内脏转移和术后生存时间显着相关,而与其他因素之间未见明显相关;采用Kaplan-Meier生存曲线法对骨肉瘤患者的预后进行单因素分析结果显示TRIM35的表达强度与患者的预后情况显着相关;COX比例风险回归模型中进行多因素分析表明TRIM35表达强度是影响骨肉瘤患者预后的独立危险因素。2.qRT-PCR和Western Blot检测TRIM35在骨肉瘤细胞Saos-2和143B中显着高表达与正常成骨细胞系h FOB1.19相比;细胞划痕实验中在24h和48h观察时,TRIM35表达沉默时,143B-si TRIM35组的细胞迁移率都显着低于143B cell组和143B-si NC组,TRIM35的过表达时,Saos-2-TRIM35组的细胞迁移率均显着高于Saos-2 cell组和Saos-2-NC组;Transwell试验中,TRIM35的沉默时143Bsi TRIM35组进入下室的细胞数显着低于143B cell组和143B-si NC组,而过表达TRIM35时Saos-2-TRIM35组进入下室的细胞数显着高于Saos-2 cell组和Saos-2-NC组。3.在骨肉瘤细胞Saos-2和143B中分别过表达与敲除TRIM35的表达。qRTPCR和Western Blot实验结果表明:敲低TRIM35的表达能够抑制143B细胞中的EMT进程中的E-cadherin的表达显着上调,而N-cadherin、Vimentin及Zeb1和Snail等均明显下调,抑制了143B细胞中的EMT进程;过表达TRIM35时,Ecadherin显着下调,而N-cadherin、Vimentin及Zeb1和Snail则又都显着上调,Saos-2细胞中过表达TRIM35能够诱导EMT进程的发生。结论:1.TRIM35在骨肉瘤组织中表达显着增高且与临床信息显着相关,表达强度与骨肿瘤的预后显着相关,并可以作为患者预后的独立危险因素。2.TRIM35的低表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭,高表达能够促进骨肉瘤细胞的迁移与侵袭。3.骨肉瘤细胞中TRIM35的过表达参与了EMT进程的调控,同时TRIM35能够促使β-catenin向细胞核内转移激活Wnt/β-catenin通路。
郑楷[3]（2021）在《骨巨细胞瘤中p63、Ki-67的表达及影像学分级与临床病理因素的相关性研究》文中认为[目的]研究骨巨细胞瘤（giant cell tumor of bone,GCTB）中Ki-67、p63的表达并探讨其与影像学分级、病理分级及肿瘤复发等的关系,为GCTB的生物学行为和预后判断提供依据。[方法]收集2010年3月-2018年3月期间于深圳市第二人民医院骨肿瘤科首次手术刮除获得的四肢长骨骨巨细胞瘤石蜡标本99例,及瘤旁正常骨组织标本10例。应用免疫组织化学技术测定其Ki-67及p63表达情况,同时进行影像学Campanacci分级和病理学Jaffe分级,分析Ki-67、p63的表达情况与Campanacci分级之间的相关性,分析Ki-67、p63蛋白的表达、Campanacci分级情况与临床病理变量的关系。[结果]1.Ki-67在GCTB中的表达水平显着高于瘤旁正常骨组织,二者在统计学上存在显着差异（P<0.05）。Ki-67在复发GCTB组表达水平显着高于未复发GCTB组的表达水平,二者在统计学上存在显着差异（P<0.05）。GCTB中Ki-67的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位及肿瘤大小情况均无明显相关性（P>0.05）。在Jaffe分级I、II、III级中无明显相关性（P>0.05）;与p63蛋白的表达呈负相关性,有显着差异（P=0.001<0.05,rs=-0.324）;2.p63在GCTB中的表达水平显着高于瘤旁正常骨组织,二者在统计学上存在显着差异（P<0.05）。p63在复发GCTB组的表达水平明显低于未复发GCTB组,差异有统计学意义（P<0.05）。GCTB中p63的表达与性别、年龄、肿瘤部位及肿瘤大小均无明显相关性（P>0.05）,在Jaffe分级I、II、III级中无明显相关性（P>0.05）;3.GCTB中Campanacci分级情况与患者性别、年龄及肿瘤部位均无相关性（P>0.05）,在Jaffe分级I、II、III级中无明显相关性（P>0.05）,与肿瘤最大径有统计学意义（P<0.05）。随着Campanacci分级增高,术后复发率增高,差异有统计学意义（P<0.05）;Campanacci分级情况与p63蛋白的表达呈负相关性,有显着差异（P<0.001,rs=-0.352）。Campanacci分级情况与Ki-67蛋白的表达呈正相关性,有显着差异（P=0.047<0.05,rs=0.664）。[结论]1.骨巨细胞瘤p63、Ki-67表达可能与其生物学行为及术后复发有一定关系;2.Campanacci影像学分级可能有助于评估骨巨细胞瘤术后复发风险;3.骨巨细胞瘤Campanacci分级与p63及Ki-67蛋白表达有一定的相关性,综合分析其结果可能有助于评估骨巨细胞瘤预后。
卢守亮,程才,刘广飞,王路,李勇,郭志远,高书明,辛大森[4]（2021）在《20岁以下接受根治性手术后原发性骨肉瘤患者的预后相关影响因素》文中研究表明目的探讨影响<20岁根治性手术后原发性骨肉瘤患者的预后独立因素,以此来预测患者的预后生存。方法回顾性分析美国国立癌症研究所监测、流行病学和结果数据库（SEER）中1984年—2014年确诊并登记的1 339例原发性骨肉瘤患者的临床病理资料,应用Kaplan-Meier法计算患者的生存率,log-rank检验评价生存差异,并根据Cox多因素分析结果确定影响根治性手术后原发性骨肉瘤预后的独立因素。结果根据<20岁接受根治性手术的骨肉瘤患者的分析结果发现,0～5岁34例（2.54%）,6～10岁236例（17.63%）,11～15岁600例（44.81%）,16～20岁469例（35.02%）。中位生存期68个月。其中757（56.53%）例为男性,582（43.47%）例为女性。1 339例中白种人986例（73.64%）,其次是黑种人230例（17.18%）,其他种族123例（9.18%）。通过多变量分析发现男性（HR=1.242;95%CI:1.024～1.505）、中轴骨骨肉瘤（HR=1.589;95%CI:1.179～2.166）、骨肉瘤区域侵犯（HR=1.470;95%CI:1.156～1.870）、远处转移（HR=3.536;95%CI:2.725～4.589）是总体生存率的独立性危险因素。其他类型骨肉瘤（HR=0.471;95%CI:0.285～0.779）是总体生存率独立性保护因素。结论基于SEER数据库,本研究确定<20岁接受根治性手术后原发性骨肉瘤患者预后的独立影响因素,这将有助于临床医生制定个体化的医疗策略并预测患者预后。
任万里[5]（2021）在《脊柱原发侵袭性肿瘤术后复发的影响因素探究》文中研究表明目的:回顾分析我院自2007年以来收治的39例脊柱原发侵袭性肿瘤手术的临床病例,探讨脊柱原发侵袭性肿瘤术后复发的影响因素,从而为临床治疗方案的设计提供可行性参考依据。方法:选取我院2007年1月至2019年10月收治的39例脊柱原发侵袭性肿瘤病例,其病理类型（根据术后病理检验）包括骨巨细胞瘤、软骨肉瘤（1级）、骨母细胞瘤和动脉瘤样骨囊肿。收集所有患者的原始病历,通过影像资料（包括术前及术后病变部位X线、CT平扫MRI平扫+强化、PET-CT、ECT全身骨扫描等）、住院病历资料（包含病史、入院查体、手术记录、住院期间用药等）,对患者在院期间的治疗信息进行采集。并通过门诊复诊及电话随访资料进行回访,采集患者术后信息（后续治疗、复发与否、复发时间）。以患者的年龄、病变节段、肿瘤长径、Tomita分型、Enneking分期（间室内/间室外）、是否行术前局部动脉栓塞、手术方式、手术入路、输血量、双磷酸盐及地诺塞麦使用情况、术后放疗等方面作为术后复发的可能影响因素进行回顾性分析。结果:39例患者随访14-166个月,平均随访56.04±24.6个月,13例复发,复发率为33.3%。X2检验示Tomita分型、Enneking分期（是否侵袭至间室外）、围术期同种异体红细胞输血量、术后放疗与复发率相关。但病例的年龄,发病节段,肿瘤大小,手术方式,手术入路与最终的结果没有显着相关性,对于骨巨细胞瘤和动脉瘤样骨囊肿亚组的单因素分析结果显示,是否使用地诺单抗或二磷酸盐类药物与巨细胞瘤和动脉瘤样骨囊肿术后复发无显着相关性。Logistic多因素分析结果显示,EnnekingⅢ期（肿瘤侵袭至间室外）与肿瘤术后复发率呈显着相关性。结论:肿瘤Tomita分型（侵犯椎管或椎旁）、侵袭至间室外、围术期大量输血、术后未放疗等因素可导致脊柱原发侵袭性骨肿瘤患者术后复发率升高,而且侵袭至间室外是脊柱原发侵袭性肿瘤术后复发的独立危险因素,应选择具有足够安全边界的肿瘤切除方式及必要的术后综合治疗以降低术后复发率,而放疗是影响脊柱软骨肉瘤（1级）、骨巨细胞瘤和骨母细胞瘤术后复发的独立保护因素。最终建议对病变累及椎管或椎旁的间室外原发性侵袭性脊柱肿瘤,情况允许时尽量行Enbloc手术切除,或行术后放疗（动脉瘤样骨囊肿除外）,并采用术前行造影栓塞和术前备自体血等方法,尽可能减少同种异体红细胞输注量,以降低术后复发几率。此外,对于行刮除术的患者,必要时使用射频消融等手段进行病灶边缘的灭活。
杨庆磊[6]（2020）在《环状circRNA Hsacirc0001017在骨肉瘤中的生物学功能及临床意义》文中研究表明背景骨肉瘤多发于青少年,致残和病死率高,预后差。随着测序技术和分子生物技术的发展,环状RNA成为肿瘤研究中的热点,作为潜在的肿瘤标志物,找到可用于骨肉瘤的诊断及治疗靶点的环状RNA临床意义重大。目的通过高通量测序分析骨肉瘤组织的环状RNA差异表达谱;研究hsacirc0001017在骨肉瘤细胞中的生物学功能;分析hsacirc0001017在骨肉瘤患者组织和外周血清中的表达变化,探讨其临床意义。方法1)利用第二代高通量测序技术检测3例骨肉瘤组织和1例正常骨组织样本的环状RNA表达谱;挑选其中差异显着且样本间一致性较好的5条环状RNA,在3种骨肉瘤细胞系和6例骨肉瘤患者组织样本中进行qRT-PCR验证,筛选可能作为肿瘤标志物的环状RNA。2)构建筛选出的hsacirc0001017过表达和干扰载体,转染人骨肉瘤U2OS细胞,MTT法检测转染后细胞的增殖能力,Transwell实验检测迁移和侵袭能力,流式细胞检测凋亡情况。3)入选39例骨肉瘤患者和24例健康志愿者,qRT-PCR检测骨肉瘤组肿瘤组织、瘤旁组织及两组外周血清hsacirc0001017的表达变化,ROC曲线分析hsacirc0001017对于骨肉瘤的诊断价值,多因素回归分析研究hsacirc0001017与肿瘤病理指标的相关性,采用生存曲线和COX回归分析探讨hsacirc0001017对骨肉瘤患者生存率的影响。结果1)3例骨肉瘤组织与正常骨组织间共同差异表达的环状RNA共246个,其中一致上调80个,一致下调166个。6例骨肉瘤组织和3个骨肉瘤细胞系中hsacirc0000704、hsacirc0001017、hsacirc0005035 均表达上调,hsacirc0001016、hsacirc0008934均表达下调,与测序结果一致。2)成功构建了 hsacirc0001017的过表达和干扰载体并转染U2OS细胞。MTT实验显示,hsacirc0001017过表达后U2OS细胞的增殖能力显着增加,而hsacirc0001017敲低后增殖能力下降。Tanswell实验显示,hsacirc0001017过表达后细胞的迁移和侵袭能力显着增加,而hsacirc0001017敲低后迁移和侵袭能力下降。流式细胞凋亡检测显示,hsacirc0001017过表达后细胞凋亡减少,而hsacirc0001017敲低后细胞凋亡增加。3)与健康志愿者相比,骨肉瘤患者外周血清hsacirc0001017的表达显着上调。与瘤旁组织相比,骨肉瘤患者肿瘤组织和外周血清hsacirc0001017的表达均显着上调且呈线性相关。绘制ROC曲线,外周血清 hsacirc0001017 的 AUC 为 0.8579,肿瘤组织 hsacirc0001017的AUC为0.8097。按血清hsacirc0001017的表达量将骨肉瘤患者分为高表达组和低表达组,多因素回归分析显示hsacirc0001017表达上调与骨肉瘤Price分级和肺部转移正性相关;生存分析显示,血清hsacirc0001017高表达组的总生存率显着下降,COX回归分析提示血清hsacirc0001017表达上调是影响骨肉瘤患者生存期的独立危险因素。结论1)高通量测序构建的骨肉瘤的环状RNA差异表达谱结果可靠。2)Hsacirc0001017在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞中均表达上调,与测序结果一致。3)细胞体外实验发现,hsacirc0001017过表达可促进U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭,而抑制细胞的凋亡,而hsacirc0001017敲低作用相反,提示其在骨肉瘤中发挥了癌基因的作用。4)临床中,骨肉瘤患者的外周血清和组织样本中hsacirc0001017的表达一致上调,hsacirc0001017表达上调对骨肉瘤有较高的诊断价值,并且hsacirc0001017上调越明显,提示骨肉瘤病情越严重,预后越差。
郭栎枫[7]（2020）在《骨肉瘤患者中RanBPM表达的临床意义和相关机制的初步探讨》文中认为背景:原发性骨的恶性肿瘤是间叶来源性恶性肿瘤,发生率较低,在所有恶性肿瘤中占比不到0.2%。骨原发恶性肿瘤的临床表现异质性大,需要选择适当的治疗方式。骨肉瘤（35%）,软骨肉瘤（30%）和尤因肉瘤（16%）是较常见的骨原发恶性肿瘤,其中骨肉瘤是最常见的骨原发恶性肿瘤。骨肉瘤主要发生于儿童和年轻人。通常位于四肢:78%位于下肢,自从引入新辅助化疗以来,骨肉瘤的生存率已得到大大的提高。在上世纪的80年代,已从10%-20%提高到50%-60%。生存率的提高归因于多药化疗和晚期手术的联合应用。在现代治疗方案中,通常使用阿霉素和顺铂的组合,选择性加入甲氨蝶呤、异环磷酰胺和依托泊苷。但自1985年后,骨肉瘤的生存率就没有实质性的进一步改善。儿童的存活率比50岁以下的患者高5-10%,而60岁以上的患者的存活率仅为24%。骨肉瘤细胞对化疗比较差的敏感性以及化疗药物的耐药性是影响其化疗疗效的主要因素。因此,控制转移和克服化疗耐药性对于提高骨肉瘤患者的生存率有重要意义。目前化疗药物主要以DNA损伤诱导剂为主,化疗药物的作用机制就是通过诱导骨肉瘤细胞周期调控因子及凋亡相关因子的表达,导致细胞周期阻滞及凋亡。因此调控骨肉瘤细胞周期和凋亡通路的相关基因成为增加化疗敏感性、控制耐药以提高患者长期生存率的关键。RanBPM（Ran-Binding Protein in Microtubule organizing center）是一个新的Ran蛋白结合蛋白。它广泛表达于不同组织和细胞系,在细胞内发挥着支架蛋白的作用,RanBPM与多种肿瘤的发生、发展密切相关,它在结肠癌、胃癌和肺癌中均发挥抑癌基因的作用,可以显着抑制肿瘤的转移并增加其对化疗药物的敏感性。但关于RanBPM在骨肉瘤发生发展中的作用尚不清楚,有研究发现,RanBPM在骨肉瘤细胞中低表达,且与骨肉瘤的增殖、凋亡和转移相关。RanBPM是一个与凋亡相关的支架蛋白,随着细胞凋亡的进程细胞内的分布情况可发生显着改变。近期研究表明RanBPM能在细胞凋亡中以凋亡前体蛋白的形式发挥重要的调节作用,但其在骨肉瘤凋亡过程中的作用及分子机制仍有待进一步研究。因此,本研究检测了骨肉瘤组织中RanBPM的表达,分析了其临床病理意义,并通过过表达RanBPM来初步探讨其对骨肉瘤细胞凋亡的影响和分子机制。目的:研究骨肉瘤患者组织中RanBPM表达的临床意义,并初步探讨其影响骨肉瘤细胞凋亡的分子机制。方法:收集重庆医科大学第二附属医院,（2014年1月至2019年12月）和陆军军医大学第二附属医院（2008年8月至2014年12月）具有较完整病例和随访资料的骨肉瘤患者的临床样本,共54例纳入本研究中。通过免疫组化方法检测RanBPM在人骨肉瘤组织标本中的表达情况,并分析了其临床病理意义。采用RT-PCR、Western blot检测成骨细胞及不同骨肉瘤细胞株中RanBPM的mRNA和蛋白表达水平。使用慢病毒建立稳定过表达RanBPM的SaOS2骨肉瘤细胞株的模型,并利用流式及TUNEL染色法检测过表达RanBPM组及对照组骨肉瘤细胞凋亡率,使用线粒体膜电位检测过表达RanBPM组及对照组细胞凋亡过程中发生的线粒体跨膜电位变化。结果:1.在54例骨肉瘤石蜡标本组织中有43例RanBPM呈阳性表达,阳性表达率为79.63%。对照组骨母细胞瘤组织的表达率为95%,P<0.05,差异具有统计学意义。2.组间比较发现RanBPM的表达与骨肉瘤患者的性别、年龄及病理分型等相关临床病理参数无关,差异无统计学意义（P>0.05）。3.骨肉瘤组织中RanBPM的表达与骨肉瘤分期、肿瘤复发和肺转移相关,在晚期、复发或发生肺转移的骨肉瘤组织中,RanBPM的阳性率相对较低（分别为P<0.01和P<0.001）。4.RanBPM在成骨细胞和骨肉瘤细胞株中均呈阳性表达,在成骨细胞中的表达显着高于骨肉瘤细胞（P<0.05）,并且在恶性程度较低的骨肉瘤细胞株MG63和HOS中的表达要高于恶性程度较高的细胞株SaOS2和U2OS（P<0.05）。5.过表达RanBPM降低了骨肉瘤细胞增殖的能力,促进了凋亡率上升（P<0.05）。过表达RanBPM明显增加了caspase-3和Cytc的表达水平,并同时Bax:Bcl-2的比率上调（P<0.05）;过表达RanBPM破坏了线粒体膜电位,诱导了内源性线粒体凋亡信号转导途径。结论:1.骨肉瘤组织中RanBPM的表达与骨肉瘤分期、肿瘤复发和肺转移相关,在晚期、复发或发生肺转移的骨肉瘤组织中,RanBPM的阳性率相对较低。2.过表达RanBPM的骨肉瘤细胞凋亡率升高,RanBPM可能通过上调内源性线粒体通路发挥诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用。
刘敏[8]（2020）在《唑来膦酸通过miRNA抑制骨肉瘤的机制研究》文中研究说明第一部分miRNA在唑来膦酸抑制骨肉瘤中的表达谱特征及生物信息学分析目的通过对miRNA在唑来膦酸抑制骨肉瘤中的表达谱特征及生物信息学分析,寻找其潜在miRNA靶基因。方法用CCK8细胞增殖实验分析不同的浓度条件下唑来膦酸对于骨肉瘤U-2OS细胞和MG-63细胞增殖能力的影响。同时采用Transwell实验探讨唑来膦酸对骨肉瘤U-2OS细胞和MG-63细胞侵袭能力的影响。用有效浓度唑来膦酸处理骨肉瘤细胞后,设置相同条件下的未处理对照组,然后分别收集细胞,运用BGISeq-500测序仪进行RNA-seq转录组学高通量测序,获得差异表达的miRNA和m RNA表达谱数据,然后进行生物信息学分析。结果CCK8实验的结果表明唑来膦酸对骨肉瘤U-2OS细胞和MG-63细胞的增殖可以起到明显的抑制作用,且这种作用存在浓度依赖性,其抑制U-2OS细胞、MG-63细胞的IC50分别为20μM、50μM处理24h。而采用IC50的处理浓度时间进行Transwell实验结果表明,骨肉瘤U-2 OS、MG63细胞的侵袭也被唑来膦酸明显抑制,较未处理对照组相比分别下降43.0%和37.7%（P<0.05）。在唑来膦酸抑制骨肉瘤细胞的过程中,RNA-seq转录组学高通量测序发现了一些差异表达的miRNA及其相对应的靶基因。而进一步进行的生物信息学分析提示,相关的miRNA可能有miRNA-423-5p、miR-663a、miR-1237、miR-1247-5p、miR-187、miR-3194,潜在的靶基因可能包括FJX1,KLF2、MAPK7、RHOB。结论唑来膦酸可以抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭,且在其抑制过程中伴随着一些差异表达的miRNA,以及与之相对应的差异表达的m RNA。第二部分唑来膦酸处理骨肉瘤细胞后差异表达miRNA的初步验证和大数据分析目的对唑来膦酸处理骨肉瘤细胞后差异表达潜在miRNA进行初步试验验证和大数据分析,明确其后续研究价值。方法荧光定量PCR检测唑来膦酸作用骨肉瘤细胞后潜在靶基因的表达情况,验证其研究价值。利用TCGA数据库获得相关潜在靶基因的表达数据及临床预后数据,采用Kaplan-Meier对FJX1、KLF2、RHOB、MRGPRF进行5年生存率的生存分析。结果PCR检测显示,与对照组相比,有效浓度的唑来膦酸处理骨肉瘤（U-2OS和MG63）细胞后,miR-1237、miR-187、miR-663a、KLF2 m RNA、RHOB m RNA的表达量均明显上升（P<0.05）。而FJX1 m RNA在U-2OS细胞中表达量下降了75%,在MG63细胞中表达量下降40%,表达量的差异具有统计学意义（P<0.05）。而进一步的Kaplan-Meier生存分析结果显示,患者的5年生存率在FJX1 m RNA高表达组中要较低表达组明显降低,这种差异存在统计学意义（P<0.05）,提示其作为致癌基因可能;而在KLF2、RHOB和MRGPRF m RNA高表达组中,5年生存率较低表达组要明显提高,差异均有统计学意义（P<0.05）,提示其作为抑癌基因可能。结论miR-1237、miR-187、miR-663a以及相关的m RNA（包括FJX1、KLF2、RHOB、MRGPRF）在唑来膦酸抑制骨肉瘤细胞中的差异变化,可能是其潜在调控基因。第三部分miRNA-187通过靶向调节MAPK7调控骨肉瘤增殖和迁移的作用机制研究目的探讨miRNA-187通过靶向调节MAPK7调控骨肉瘤增殖和迁移的作用机制研究。方法采用q RT-PCR检测骨肉瘤多种细胞株中miR-187的表达量。将miR-187模拟物或NC转染到骨肉瘤细胞中,通过WST-1分析监测SAOS-2细胞的增殖速率和集落形成测定。采用FACS流式细胞仪评估细胞在不同细胞周期阶段的分布。利用划痕实验和Transwell实验评估miR-187过表达后,对骨肉瘤SAOS-2细胞迁移和侵袭的影响。运用双荧光报告实验和Western blot实验来证实,miR-187通过靶向调节MAPK7调控骨肉瘤细胞。结果q RT-PCR检测显示miR-187的在骨肉瘤多种细胞株中表达均显着下调,而其中以SAOS-2细胞表达下调最明显,约为8倍。WST-1分析监测结果显示,miR-187的过表达导致了SAOS-2细胞的增殖速率显着下降,细胞的集落形成被抑制了62%（P<0.05）。细胞周期分析显示miR-187的过表达引起G2/M期细胞的积累,同时还伴随细胞周期蛋白B1表达的抑制。划痕实验中,在24h时,miR-187 mimics组细胞愈合宽度明显要比miR-NC组大,彼此间的差异具有统计学意义（P<0.05）。而Transwell实验结果显示,miR-187过表达后,骨肉瘤SAOS-2细胞的侵袭数目较miR-NC转染组减少了60%,差异有统计学意义（P<0.05）。双荧光素酶测定结果显示,在转染质粒p GL3-MAPK7′-UTR-WT同时加入miR-187质粒的实验组与加入空质粒的对照组相比,荧光素酶活性显着下调（P<0.05）。而在转染p GL3-MAPK7′-UTR-MUT组质粒同时加入miR-187质粒的实验组与加入空质粒的对照组相比,荧光素酶活性下降无显着差异。蛋白质印迹结果表明:MAPK7在骨肉瘤细胞中的表达水平显着高于对照组人成骨细胞（h FOB 1.19）,差异有统计学意义（P<0.05）。而miR-187的过表达导致SAOS-2细胞中的MAPK7表达被显着抑制。结论miRNA-187是通过靶向调节MAPK7调控骨肉瘤增殖和迁移。
牛国昌[9]（2020）在《骨尤文肉瘤的影像学研究及鉴别诊断》文中进行了进一步梳理第一部分骨尤文肉瘤的影像学研究目的:在儿童和青少年中,骨尤文肉瘤是第二常见的原发性恶性骨肿瘤,发病率仅次于骨肉瘤,但缺乏特征性临床症状,通常在治疗前很难作出准确诊断。本研究回顾性分析、总结骨尤文肉瘤的临床及影像学特征,期望找到有价值的特征用于临床诊断。方法:选取2004年1月至2020年1月河北医科大学第三附属医院收治的经病理组织学证实的25例骨尤文肉瘤患者为研究对象。其中男性15例,女性10例,男:女=1.5:1。25例骨尤文肉瘤中有20例行X线检查,23例行CT检查,23例行MRI检查,行X线或CT检查共有23例。归纳并研究骨尤文肉瘤的临床改变与医学影像特征。结果:患者发病年龄范围1.327岁,中位年龄是12岁。发病高峰年龄是1120岁（占44%）。单发病灶23例（占92%）,多发病灶2例。23例单发病灶中有10例位于长骨,4例位于髂骨,1例位于跟骨,1例位于胸椎,1例位于腰椎,3例位于骶骨,2例位于肩胛骨,1例位于颈椎。位于长骨骨干有6例,4例位于长骨干骺端。1.23例单发病灶依据其X线及CT改变的特点表现:1)大多数骨尤文肉瘤以溶骨型骨质破坏（14/23例,60.9%）与混合型骨质破坏（7/23例,34.8%）为主,硬化型骨质破坏少见（1/23例,4.3%）。2)骨质破坏形态以虫蚀样或筛孔样骨质破坏多见（14/23例,60.9%）。少数病灶呈膨胀性改变（3/23例,13%）、可见残存骨（5/23例21.8%）,部分病例出现病理性骨折（3/23例,13%）,均无肿瘤骨。3)骨膜反应:部分病人出现骨膜反应（9/23例,39.1%）,1例呈竖发样（4.3%）,21.7%病例葱皮样骨膜反应（5/23例）,13%病例日光样骨膜反应（3/23例）。其中13%病灶骨皮质内侧存在“骨内膜反应”（3/23例）,并与葱皮样骨膜反应混合存在。2.在MRI上,100%患者中均可见正常骨髓被肿瘤置换,81%（17/21例）病灶在TWI1上呈低信号,在TWI2上呈高信号。90.5%（19/21例）病灶周围软组织肿块形成,少数软组织肿块内囊变（1/21例,4.8%）,少数病灶周围软组织明显水肿（5/21例,23.8%）。23.8%（5/21例）病灶形成“同心圆征”。3.有2例为多发病灶,1例位于右侧髂骨及右侧坐骨。一例位于右侧胫骨、右侧腓骨。影像学表现与其单发病灶相比并无明显不同。结论:1.骨尤文肉瘤发病高峰年龄为1120岁（占44%）,男性多见。2.骨尤文肉瘤单发病灶好发于长骨骨干（26%）,溶骨型骨质破坏（60.9%）和混合型骨质破坏（34.8%）较为多见,均无肿瘤骨。骨质破坏形态以“虫蚀样”或“筛孔样”（60.9%）多见。“葱皮样骨膜反应”（13%）和“骨内膜反应”（13%）在骨尤文肉瘤的诊断中有重要价值。3.骨尤文肉瘤单发病灶在MRI上,100%患者中均可见正常骨髓被肿瘤置换,多数病灶（81%）在TWI1上呈低信号,在TWI2上呈高信号。90.5%病灶周围软组织肿块形成,呈现骨质轻微破坏伴大软组织肿块特点。骨尤文肉瘤囊变（4.8%）少见,少数病灶周围软组织明显水肿（23.8%）。部分病灶周围形成“同心圆征”（23.8%）。4.有2例为多发病灶,1例位于右侧髂骨及右侧坐骨,医学影像改变与单发病灶比较无明显不同。第二部分骨尤文肉瘤与其它易混淆骨疾病的鉴别诊断目的:临床上,骨尤文肉瘤与急性骨髓炎、嗜酸性肉芽肿、骨肉瘤发病年龄相近,好发部位相似,不容易区别。故本文第二部分试图通过量化的影像学指标鉴别骨尤文肉瘤与以上后三种骨疾病。方法:挑选2004年1月至2020年1月河北医科大学第三附属医院治疗的经病理组织学证实的骨尤文肉瘤、急性骨髓炎、嗜酸性肉芽肿、骨肉瘤患者为研究对象。25例骨尤文肉瘤病人,研究方法见第一部分。27例急性骨髓炎中有25例行X线检查,22例行CT检查,26例行MRI检查。10例嗜酸性肉芽肿中有7例行X线检查,8例行CT检查,5例行MRI检查。128例骨肉瘤中有85例行X线检查,91例行CT检查,105例行MRI检查。骨尤文肉瘤与以上三种疾病进行鉴别比较的影像征象有:部位、病灶破坏的类型、骨皮质破坏形态、骨膜反应、残留骨、肿瘤骨、膨胀改变。病灶MRI信号、软组织肿块、肿块内囊变,软组织水肿,另外骨尤文肉瘤与急性骨髓炎单独进行鉴别的指标有:蛇形通道、半影征、脂肪小滴、脓肿。全部统计分析均采用SPSS25.0软件。率的比较采用χ2检验。采用bonferroni法校正检验水准,α=0.05/3=0.0167,P<0.05视为有统计学意义。结果:1发病年龄比较骨尤文肉瘤患者组发病高峰为1120岁（44%）,中位年龄12岁;急性骨髓炎组发病高峰为110岁（52%）,中位年龄为9岁;嗜酸性肉芽肿组发病高峰为110岁（80%）,中位年龄为9岁;骨肉瘤组发病高峰为1120岁（61%）,中位年龄为19岁。2发病部位比较2.1本组四种骨疾病均多见于长骨,在长骨的发生率从少到多依次为,骨尤文肉瘤（44%）、嗜酸性肉芽肿（70%）、急性骨髓炎（81.5%）、骨肉瘤（88.2%）。急性骨髓炎、骨肉瘤分别较骨尤文肉瘤更好发于长骨,比较差异有统计学意义（P<0.05）。但是,嗜酸性肉芽肿与骨尤文肉瘤相比较差异无统计学意义（P>0.05）。2.2在长骨病变中,急性骨髓炎好发于长骨干骺端（59.1%）,而骨尤文肉瘤好发于长骨干（63.6%）,但二者比较差异无显着统计学意义（P>0.05）。本组嗜酸性肉芽肿好发于长骨骨干（71.4%）,与骨尤文肉瘤比较差异无统计学意义（P>0.05）。骨肉瘤好发于长骨干骺端（87%）,与骨尤文肉瘤比较差异有显着统计学意义（P<0.001）。3影像特点比较3.1骨尤文肉瘤与骨髓炎鉴别比较27例急性骨髓炎骨质破坏区均无膨胀改变,部分骨尤文肉瘤（4/25例,16%）骨质破坏区呈膨胀改变,二者比较差异性有统计学意义（P=0.039）。在MRI检查中,91.3%（21/23例）骨尤文肉瘤病灶有软组织肿块形成,26例急性骨髓炎均无软组织肿块形成,二者比较差异有显着统计学意义（P<0.001）。部分急性骨髓炎病例出现骨内或骨外脓肿（13/26例,50%）、“蛇影通道”（7/26例,26.9%）、“半影征”（6/26例,23.1%）、“脂肪小滴”（7/26例,26.9%）,而骨尤文肉瘤均没有出现以上四种特异性影像学征象,二者比较差异有显着统计学意义（P<0.05）。少数骨尤文肉瘤病灶周围明显水肿（6/23例,26.1%）,急性骨髓炎（22/26例,84.6%）病灶周围明显水肿,二者比较差异有显着统计学意义（P<0.001）。3.2骨尤文肉瘤与嗜酸性肉芽肿比较嗜酸性肉芽肿病灶（6/9例,66.7%）较骨尤文肉瘤（4/25例,16%）较骨质破坏区呈膨胀改变多见,嗜酸性肉芽肿（1/5例,20%）病灶周围形成软组织肿物较骨尤文肉瘤（21/23例,93.1%）少见,嗜酸性肉芽肿（4/5例,80%）病灶周围软组织明显水肿较骨尤文肉瘤（6/23例,26.1%）多见,二者此三项影像指标比较差异有统计学意义（P<0.05）。3.3骨尤文肉瘤与骨肉瘤比较骨肉瘤中有成骨型骨质破坏(60/117例,51.3%、地图样骨质破坏（87/117例,74.4%）、肿瘤骨形成（58/117例,49.6%）、骨膜反应（86/117例,73.5%）、Codman三角（50/117例,42.7%）,而骨尤文肉瘤中有成骨型骨质破坏（1/25例,4.0%）、地图样骨质破坏（9/25例,36%）、无肿瘤骨形成、骨膜反应（10/25例,16%）、Codman三角（2/25例,8.7%）,二者此四项影像改变比较差异有统计学意义（P<0.05）。骨肉瘤病灶内有残留骨嵴（1例/117,0.9%）、骨内膜反应（1例/117,0.9%）,部分骨尤文肉瘤病例有残留骨嵴（6/25例,24%）、骨内膜反应（4例/25,16%）,二者此两项影像改变比较差异有统计学意义（P<0.05）。多数骨肉瘤（59/105例,56.2%）病灶T1WI上呈低信号,T2WI上呈混杂高信号,骨尤文肉瘤（2/23例,8.8%）这样的MRI信号改变少见,二者比较差异有统计学意义（P<0.001）。其中“内骨膜反应”对鉴别骨肉瘤与骨尤文肉瘤有重要诊断价值。结论:急性骨髓炎组发病高峰为110岁（52%）,比骨尤文肉瘤小。与骨尤文肉瘤不同的是急性骨髓炎好发于长骨,并且好发干髓端（59.1%）。急性骨髓炎无病灶膨胀改变。急性骨髓炎病灶区无软组织肿块形成,瘤周水肿较骨尤文肉瘤明显。病变骨内或骨外脓肿（50%）、“蛇形通道”（26.9%）、“半影征”（23.1%）、“脂肪小滴”（26.9%）、“死骨”（12%）,而骨尤文肉瘤均没有出现这些四种特异性影像学征象。嗜酸性肉芽肿组发病高峰为110岁（80%）,比骨尤文肉瘤小。与骨尤文肉瘤不同的是嗜酸性肉芽肿（66.7%）病灶较骨尤文肉瘤（16%）有明显膨胀多见,嗜酸性肉芽肿（93.1%）较骨尤文肉瘤（26.1%）瘤周围软组织明显水肿。骨肉瘤组发病高峰1120岁（61%）,与骨尤文肉瘤接近。较尤文肉瘤发生率高的影像指标有:成骨型骨质破坏（51.3%）、地图样骨质破坏（74.4%）、肿瘤骨形成（49.6%）、骨膜反应（73.5%）、Codman三角（42.7%）,骨肉瘤（56.2%）病灶T1WI上呈低信号,T2WI上呈混杂高信号。骨肉瘤较骨尤文肉瘤发生率低的影像指标有:骨肉瘤病灶内有残留骨嵴（0.9%）、骨内膜反应（0.9%）。
任兆舟[10]（2020）在《MiR-421通过调控MCPIP1蛋白通路促进骨肉瘤疾病进展的机制研究》文中指出前言:骨肉瘤（osteosarcoma）是原发性恶性骨肿瘤中最常见的类型,在全世界的发病率大概是1-3/百万。骨肉瘤主要的临床症状为逐渐加重的持续性的局部疼痛,可伴有包块、肢体活动障碍,皮温升高,夜间痛尤甚,低生存率和疼痛使患者背负着极大的痛苦和生存压力。骨肉瘤主要的发病人群为青少年,但在50岁以上人群中有一个二次峰值。骨肉瘤是由恶性成骨细胞产生未成熟骨或骨样组织,可在组织学上分为:传统型或经典型、低级的中央型、骨膜型、骨膜旁型、毛细血管扩张型、小细胞型和成软骨细胞型。目前临床治疗骨肉瘤的主要方法是手术切除联合新辅助化疗。然而,单纯手术的患者5年生存率大概在15-17%。手术切除联合新辅助化疗（阿霉素、顺铂、加或不加甲氨蝶呤）,这样治疗方案的进步可以使5年生存率达到70%左右。但是,转移或复发的骨肉瘤患者的生存率仍约20%左右。免疫治疗在骨肉瘤的治疗中发挥着重要的作用,因为骨细胞与免疫系统细胞之间存在着重要的交叉和桥梁,开创了骨免疫学的跨学科新领域。许多信号传导通路RANK-RANKL system,IL?1,IL?6,IL?17和transforming growth factor?β（TGFβ）等在骨系统和免疫系统中均发挥着重要的作用。许多免疫系统基因敲除小鼠均改变了骨表型,例如Tnfsf11（编码RANKL）,interferon（αandβ）receptor 1（Ifnar1）,nuclear factor-κB（Nfkb）和interferon?γ（Ifng）等等。深刻理解骨肉瘤细胞、破骨细胞、骨细胞、成骨细胞与免疫细胞怎样驱动肿瘤的发生与进展仍旧处于初期的论证中。单核细胞趋化蛋白诱导蛋白1（monocyte chemotactic protein induced protein 1,MCPIP1）是一种Cys-Cys-Cys-His型锌指蛋白,由zc3h12a基因编码。MCPIP1最初被发现在人外周血单核细胞并被单核细胞趋化蛋白（MCP-1）所诱导。MCPIP1能够在巨噬细胞中依靠促炎因子TNF,IL1b和LPS刺激下所诱导。MCPIP1具有RNase活性,通过与3’非翻译区（UTR）结合降解mRNA从而抑制促炎细胞因子（IL-1、IL-6和IL-12）的表达。此外,MCPIP1可以作为T细胞激活的制动因子,被认为是参与炎症平衡和控制的关键负调控因子。MCPIP1还参与细胞因子诱导的内皮炎症的控制和内皮功能障碍。近期,MCPIP1被证明可以通过抑制细胞凋亡参与乳腺癌的疾病进展。MicroRNAs（miRNAs）是一类调节基因表达的非编码核糖核酸,受表观遗传和遗传等机制调控。许多文献报道miRNAs调控骨肉瘤细胞或肿瘤组织的生长和转移,包括miR?133b,miR?100,miR?340或miR?214等。mi RNAs不仅调控许多生物学功能,诸如细胞发育、增殖、凋亡、分化和代谢,还广泛调控胶质母细胞瘤、尤因肉瘤、膀胱癌、结肠癌和骨肉瘤,更在许多癌症的耐药机制中发挥重要的作用。许多miRNAs可以通过调控目标蛋白来影响骨肉瘤细胞或肿瘤组织的生长和转移。本研究我们通过筛选一些感兴趣的microRNAs,发现miR-421在骨肉瘤患者组织中的表达差异,并探究了MCPIP1在骨肉瘤的疾病进程中发挥的作用;进一步探索在骨肉瘤组织中MCPIP1与miRNAs表达是否有相关性;是否与骨肉瘤的疾病进展相关;并进一步证实miR-421是否在骨肉瘤细胞和动物模型中可以调控MCPIP1靶点。材料和方法:一、实验材料1.组织标本收集我们收集2011年7月至2013年7月在中国医科大学附属医院及直属肿瘤医院住院患者手术切除的30例骨肉瘤标本组织,骨肉瘤旁的正常骨组织作为对照组。所收集的骨肉瘤患者中,在手术前均没有进行新辅助化疗。根据美国癌症联合委员会（AJCC）骨肿瘤分期系统TNM分期将患者的疾病进展分类。所有收集患者组织标本的实验都得到了中国医科大学伦理委员会的审查和批准,并取得了患者的知情同意及允许。2、细胞系:人骨肉瘤细胞系MG63和U2OS细胞培养购买于ATCC（American Type Culture Collection）。细胞解冻、传代、培养及转染按照ATCC细胞培养说明进行。3、实验动物6周龄BALB/c nude裸鼠（Balb/c-nu/nu）购买于Charles River公司,裸鼠饲养及相关实验严格按照动物福利法要求进行。所有动物实验都得到了中国医科大学伦理委员会的审查和批准,均符合中华人民共和国关于动物保护的伦理要求。二、主要研究方法1、通过real-time PCR检测30个骨肉瘤患者肉瘤组织和癌旁正常骨组织中的miR-15b,miR-133b,miR-140-5p,miR-25-3p,miR-129,miR-300,miR-421,miR-422,miR-421,miR-449,miR-542等诸多miRNAs的表达水平。分析他们的表达差异性。2、进一步使用Kaplan-Meier生存分析来评估miR-421的表达水平是否与骨肉瘤患者的预后生存时间存在联系,并使用卡方检验miR-421的表达水平是否与骨肉瘤的临床病理TNM分期存在关联性。3、通过real-time PCR检测30个骨肉瘤患者肉瘤组织和癌旁正常骨组织中的中的MCPIP1的mRNA的表达。分析他们的表达差异性。4、进一步使用Kaplan-Meier生存分析来评估MCPIP1 mRNA的表达水平是否与骨肉瘤患者的预后生存时间存在联系,并使用卡方检验MCPIP1 mRNA的表达水平是否与骨肉瘤的临床病理TNM分期存在关联性。5、将miR-421 control对照,miR-421 mimic模拟物和miR-421 inhibitor抑制剂分别转染到骨肉瘤MG63和U2OS细胞后,通过MTT比色法实验检测各组在12h（12小时）,24h（24小时）,36h（36小时）和48h（48小时）OD490nm吸光值,评估miR-421对于骨肉瘤细胞增殖的影响。6、将miR-421 control对照,miR-421 mimic模拟物和miR-421 inhibitor抑制剂分别转染到骨肉瘤MG63和U2OS细胞后,通过Western blotting和real-time PCR实验检测各组增殖相关因子cyclin D1和抑制凋亡相关因子bcl-2的蛋白水平和mRNA表达,评估miR-421对于骨肉瘤细胞增殖和凋亡相关因子的影响。7、通过transwell小室内突破实验检测各组骨肉瘤细胞迁移数量的改变,评估miR-421对于骨肉瘤细胞迁移的影响;检测各组迁移相关因子MMP2的蛋白水平和mRNA表达,评估miR-421对于骨肉瘤细胞迁移相关因子的影响。8、通过ELISA,Western blotting和real-time PCR实验检测各组促炎因子IL-6的蛋白水平和mRNA表达,评估miR-421对于骨肉瘤细胞释放促炎因子IL-6的影响。9、生物信息学miRDB软件预测MCPIP1是否与miR-421有共同的3?-UTR靶点。10、Control,miR-421和miR-421 antisense分别转染到带有pMIR-REPORTTMM vector（MCPIP1突变型）或带有pMIR-REPORTTMM vector control（MCPIP1野生型）的骨肉瘤MG63和U2OS细胞中,通过Dual luciferase reporter assay荧光素酶实验具体分析miR-421是否能够在骨肉瘤细胞中直接作用于MCPIP1的3?-UTR靶点。11、将miR-421 control对照,miR-421 mimic模拟物和miR-421 inhibitor抑制剂分别转染到骨肉瘤MG63和U2OS细胞后,通过Western blotting和real-time PCR实验验证miR-421是否可以调控体外骨肉瘤MG63细胞和U2OS细胞中MCPIP1蛋白水平和mRNA表达差异。12、将Control对照,miR-421 mimic模拟物和miR-421mimic+MCPIP1蛋白分别转染到骨肉瘤MG63细胞中,通过MTT比色法实验检测各组在12h（12小时）,24h（24小时）,36h（36小时）和48h（48小时）OD490nm吸光值,并检测各组cyclin D1和bcl-2的蛋白水平和mRNA表达,最后评估miR-421是否能通过调控MCPIP1蛋白影响骨肉瘤细胞的增殖。13、将Control对照,miR-421 mimic模拟物和miR-421mimic+MCPIP1蛋白分别转染到骨肉瘤MG63细胞中,通过transwell小室内突破实验检测各组骨肉瘤细胞迁移数量的改变,并检测各组迁移相关因子MMP2的蛋白水平和mRNA表达,最后评估miR-421是否能通过调控MCPIP1蛋白影响骨肉瘤细胞的迁移。14、将Control对照,miR-421 mimic模拟物和miR-421mimic+MCPIP1蛋白分别转染到骨肉瘤MG63细胞中,检测各组IL-6的蛋白水平和mRNA表达,最后评估miR-421是否能通过调控MCPIP1蛋白影响骨肉瘤细胞释放促炎因子IL-6。15、将分别带有control/miR-421 agomir类似物或miR-421 control/miR-421antagomir抑制剂的骨肉瘤MG63细胞（1×107）肌肉注射到裸鼠胫骨旁,16天后观察他们的成瘤效果,观察各组骨肿瘤的体积差异;分别检测各组裸鼠骨肉瘤模型骨肉瘤组织中MCPIP1,cyclin D1,bcl-2,MMP2和IL-6的蛋白水平和mRNA表达,最后评估miR-421是否能通过调控MCPIP1蛋白影响骨肉瘤动物模型的肿瘤生长和对增殖、迁移和炎症释放产生影响。结果:1、通过real-time PCR检测30个骨肉瘤患者肉瘤组织和癌旁正常骨组织中的miR-15b,miR-133b,miR-140-5p,miR-25-3p,miR-129,miR-300,miR-421,miR-422,miR-421,miR-449,miR-542等诸多miRNAs的表达水平,我们发现与对照组癌旁正常骨组织相比,骨肉瘤组织中的miR-421表达显着升高了60%。Kaplan-Meier生存曲线分析显示与低表达miR-421的骨肉瘤患者5年生存率和生存时间相比,高表达miR-421的骨肉瘤患者具有更低的5年生存率,更短的生存时间（χ2=3.842;P=0.0299）。卡方检验证实miR-421的表达与骨肉瘤患者TNM分期相关,与疾病严重程度相关。2、通过real-time PCR检测30个骨肉瘤患者肉瘤组织和癌旁正常骨组织中的中的MCPIP1的mRNA的表达。我们发现与对照组癌旁正常骨组织相比,骨肉瘤组织中的MCPIP1 mRNA表达显着降低了38%。Kaplan-Meier生存曲线显示与低表达MCPIP1 mRNA的骨肉瘤患者5年生存率和生存时间相比,高表达MCPIP1 mRNA的骨肉瘤患者具有更高的生存率,更长的生存时间（χ2=5.840;P=0.0210）,卡方检验分析显示MCPIP1的mRNA表达与骨肉瘤患者TNM分期相关,与疾病严重程度相关。3、将miR-421 control对照,miR-421 mimic模拟物和miR-421 inhibitor抑制剂分别转染到骨肉瘤MG63和U2OS细胞后,MTT比色法实验显示与对照组比较,过表达miR-421组在12h（12小时）,24h（24小时）,36h（36小时）和48h（48小时）OD490nm吸光值均显着升高,抑制miR-421组在4个时间点OD490nm吸光值均显着下降。4、与对照组比较,过表达miR-421骨肉瘤MG63和U2OS细胞组cyclin D1和bcl-2的蛋白水平和mRNA表达显着上调,抑制miR-421组cyclin D1和bcl-2的蛋白水平和mRNA表达显着下降。5、通过transwell小室内突破实验显示与对照组比较,过表达miR-421组骨肉瘤细胞迁移数量显着增加,抑制miR-421组迁移数量显着减少。Western blotting和real-time PCR实验显示:与对照组比较,过表达miR-421组MMP2的蛋白水平和mRNA表达显着上调,抑制miR-421组MMP2的蛋白水平和mRNA表达显着下降。6、ELISA,Western blotting和real-time PCR实验显示:与对照组比较,过表达miR-421骨肉瘤MG63和U2OS细胞组IL-6的蛋白水平和mRNA表达显着上调,抑制miR-421组IL-6的蛋白水平和mRNA表达显着下降。7、生物信息学miRDB软件预测MCPIP1与miR-421有共同的3?-UTR靶点。8、Control,miR-421和miR-421 antisense分别转染到带有pMIR-REPORTTMM vector（MCPIP1突变型）或带有pMIR-REPORTTMM vector control（MCPIP1野生型）的骨肉瘤MG63和U2OS细胞中,荧光素酶实验显示:与MG63和U2OS细胞MCPIP1野生型control组相比,MCPIP1野生型miR-421组的荧光素酶活性显着降低;但与MCPIP1突变型control组相比,MCPIP1突变型miR-421组的荧光素酶活性并没有改变。Western blotting和real-time PCR显示:与对照组相比,过表达miR-421组MCPIP1蛋白水平和mRNA表达显着下调;抑制miR-421组MCPIP1蛋白水平和mRNA表达显着提高。9、将Control对照,miR-421 mimic模拟物和miR-421mimic+MCPIP1蛋白分别转染到骨肉瘤MG63细胞中,MTT比色法实验显示:与过表达miR-421组比较,过表达miR-421+MCPIP1组在12h,24h,36h和48h四个时间点OD490nm吸光值显着下降;与过表达miR-421组比较,过表达miR-421+MCPIP1组cyclin D1和bcl-2的蛋白水平和mRNA表达显着下调。10、Transwell小室内突破实验显示:与过表达miR-421组比较,过表达miR-421+MCPIP1组骨肉瘤细胞迁移数量显着下降;与过表达miR-421组比较,过表达miR-421+MCPIP1组MMP2蛋白水平和mRNA表达显着下调。与过表达miR-421组比较,过表达miR-421+MCPIP1组IL-6蛋白水平和mRNA表达显着下调。11、将分别带有control/miR-421 agomir类似物或mi R-421 control/miR-421antagomir拮抗剂的骨肉瘤MG63细胞肌肉注射到裸鼠胫骨旁,成功建立裸鼠骨肉瘤成瘤动物模型。与control组相比,miR-421 agomir类似物组裸鼠骨肉瘤体积增加了17.61%。随后Real-time PCR和western blotting实验显示,与control相比,miR-421agomir组骨肉瘤组织中cyclin D1,bcl-2,MMP2和IL-6 mRNA和蛋白水平的表达显着上调,MCPIP1 mRNA和蛋白水平的表达显着下调;与miR-421 control组相比,miR-421 antagomir拮抗剂组裸鼠骨肉瘤体积减小了43.69%。随后real-time PCR和western blotting实验显示:与miR-421 control相比,miR-421 antagomir拮抗剂组骨肉瘤组织中cyclin D1,bcl-2,MMP2和IL-6 mRNA和蛋白水平的表达显着下调,伴有MCPIP1 mRNA和蛋白水平的表达显着上调。结论:1、MiR-421在人骨肉瘤组织中呈现高表达并与临床病理分期相关;MCPIP1在人骨肉瘤组织中呈现低表达并与疾病进展程度相关2、MiR-421能够促进体外骨肉瘤MG63细胞和U2OS细胞的增殖;并且能够增加骨肉瘤细胞中增殖相关因子cyclin D1和抑制凋亡因子bcl-2的表达3、MiR-421可以促进骨肉瘤MG63细胞和U2OS细胞的迁移;并且能增加骨肉瘤细胞中迁移相关因子MMP2的表达,还可以促进骨肉瘤细胞中促炎因子IL-6的释放4、生物信息学预测并证实MCPIP1与miR-421有共同的3?-UTR靶点;并且miR-421能够在骨肉瘤细胞中直接作用于MCPIP1的3?-UTR靶点。Mi R-421能够负向调控骨肉瘤MG63细胞和U2OS细胞中MCPIP1的表达5、MiR-421可以通过负向调控MCPIP1蛋白促进骨肉瘤细胞的增殖、迁移和促炎因子IL-6的释放;还可以通过调控MCPIP1蛋白促进裸鼠骨肉瘤模型的疾病进展
二、青少年原发性骨肉瘤临床病理分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、青少年原发性骨肉瘤临床病理分析（论文提纲范文）
（1）利用生物信息学结合大数据分析骨肉瘤预后相关基因并探索STC2基因在骨肉瘤中的表达及意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 骨肉瘤预后相关基因的数据挖掘及基因表达特征模型的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 GEO数据库获取芯片数据 |
| 1.2 GEO2R筛选骨肉瘤和正常组织中的差异表达基因 |
| 1.3 GO和 KEGG富集分析 |
| 1.4 PPI网络分析和hub基因鉴定 |
| 1.5 Cytoscape功能模块分析 |
| 1.6 KM单因素生存分析 |
| 1.7 GEPIA数据库组织水平表达分析 |
| 1.8 Surve Express平台构建骨肉瘤关键模块基因的表达特征模型 |
| 1.9 核心基因表达水平 |
| 2 结果 |
| 2.1 差异表达基因筛选 |
| 2.2 GO和 KEGG对四组差异表达基因的功能分析 |
| 2.3 差异基因的关键功能模块分析 |
| 2.4 关键功能模块基因表达特征模型构建 |
| 2.4.1 构建表达特征风险模型并进行预后评价 |
| 2.4.2 对高风险组和低风险组构建生存曲线 |
| 2.4.3 分析关键模块基因的表达水平与高低两个风险组的关系 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 4.1 差异表达倍数高的基因在细胞中的富集部位 |
| 4.2 表达特征模型构建 |
| 第二部分 生物信息学分析STC2 基因在骨肉瘤中的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 Prot Param预测人STC2 蛋白理化性质 |
| 1.2 Genecards进行STC2 蛋白亚细胞定位分析 |
| 1.3 Oncomine数据库分析STC2 基因的组织表达 |
| 1.4 GEPIA数据库验证STC2 在骨肉瘤中表达情况 |
| 1.5 CCLE分析STC2 细胞表达水平 |
| 1.6 TCGA数据库分析STC2 基因临床病理学特征 |
| 1.7 STRING数据库分析STC2 基因周围相关蛋白 |
| 2 结果 |
| 2.1 人STC2 蛋白的理化性质分析及预测 |
| 2.2 人STC2 蛋白的核定位、跨膜区、及亚细胞定位预测分析 |
| 2.3 STC2 基本表达情况——组织水平、细胞水平 |
| 2.3.1 Oncomine分析STC2 基因组织水平表达情况 |
| 2.3.2 Outlier分析STC2 基因在不同肉瘤亚型中的表达 |
| 2.3.3 STC2 基因在肉瘤与正常组织之间的表达比较(组织水平) |
| 2.3.4 STC2 在骨肉瘤与其他类型肉瘤的表达情况 |
| 2.3.5 STC2 在骨肉瘤各亚型之间的表达分析 |
| 2.3.6 STC2 在骨肉瘤细胞与其他肿瘤细胞系之间的表达比较 |
| 2.4 STC2 基因预后意义 |
| 2.5 初步探索STC2 影响骨肉瘤发生发展的分子机制 |
| 2.5.1 STC2 相互作用蛋白网络 |
| 2.5.2 STC2 共表达分析 |
| 2.6 TCGA数据库分析STC2 与肉瘤患者临床病理特征的关系 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 4.1 STC2 基因的基本信息 |
| 4.2 STC2 与骨肉瘤患者预后 |
| 第三部分 实体组织验证STC2 在骨肉瘤中的表达及临床意义 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验器材和试剂 |
| 1.2 免疫组化 |
| 1.2.1 免疫组化步骤 |
| 1.2.2 STC2 免疫组化判读标准 |
| 2 结果 |
| 2.2 免疫组化验证STC2 与骨肉瘤患者临床病理特征的关系 |
| 2.2.1 STC2 在非骨肉瘤组织中表达定位 |
| 2.2.2 STC2 在普通型骨肉瘤中的表达定位及阳性率 |
| 2.2.3 STC2 表达与普通骨肉瘤的临床病理特征 |
| 2.3 细胞学验证STC2 对骨肉瘤细胞增殖功能的影响 |
| 2.3.1 敲除STC2 基因对骨肉瘤细胞增殖能力的影响 |
| 2.3.2 过表达STC2 基因对骨肉瘤细胞增殖能力的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 4.1 免疫组化验证STC2 与骨肉瘤患者临床病理特征的关系 |
| 4.2 细胞学验证STC2 对骨肉瘤细胞增殖功能的影响 |
| 参考文献 |
| 综述 骨肉瘤生物标志物的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）TRIM35调控骨肉瘤细胞迁移和侵袭作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 1.绪论 |
| 1.1 骨肿瘤的概述 |
| 1.1.1 骨肉瘤的发病情况 |
| 1.1.2 骨肉瘤的病因及其发病机制 |
| 1.1.3 骨肉瘤的诊断与治疗 |
| 1.1.4 骨肉瘤的治疗现状 |
| 1.2 TRIM35与肿瘤的发生 |
| 1.3 EMT进程与肿瘤的发生 |
| 1.4 Wnt/β-catenin通路与肿瘤的发生 |
| 2.实验材料与试剂 |
| 2.1 临床样本与细胞系 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 主要试剂配 |
| 2.4.1 细胞培养试剂 |
| 2.4.2 免疫组化试剂 |
| 2.4.3 分子克隆培养基 |
| 2.4.4 Westernblot实验试剂 |
| 3.TRIM35骨肉瘤临床病理组织与指数的相关性分析 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 免疫组化 |
| 3.1.3 统计学方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 免疫组织化学染色结果 |
| 3.2.2 TRIM35在人骨肉瘤组织中的表达及临床意义 |
| 3.2.3 TRIM35 的表达与参数之间的关系 |
| 3.2.4 采用 Kaplan-Meier 生存曲线法对骨肉瘤患者的预后进行单因素分析(表 3-3) |
| 3.3 讨论 |
| 4.TRIM35对骨肉瘤细胞的生物学功能的影响 |
| 4.1 实验方法 |
| 4.1.1 细胞培养 |
| 4.1.2 质粒提取 |
| 4.1.3 细胞转染 |
| 4.1.4 总RNA提取 |
| 4.1.5 逆转录 |
| 4.1.6 qTR-PCR |
| 4.1.7 总蛋白提取 |
| 4.1.8 Western Blot |
| 4.1.9 细胞划痕实验 |
| 4.1.10 细胞Transwell实验 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 TRIM35在人骨肉瘤细胞系及成骨细胞系中的表达差异 |
| 4.2.2 TRIM35特异性si RNA及TRIM35过表达载体的转染效果 |
| 4.2.3 TRIM35的表达促进骨肉瘤细胞的迁移 |
| 4.2.4 TRIM35 促进骨肉瘤细胞侵袭 |
| 4.3 讨论 |
| 5.TRIM35对EMT进程与Wnt/β-catenin通路的影响 |
| 5.1 实验方法 |
| 5.1.1 细胞培养 |
| 5.1.2 细胞转染 |
| 5.1.3 qRT-PCR |
| 5.1.4 Westernblot |
| 5.1.5 细胞免疫荧光实验 |
| 5.1.6 统计及分析 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 TRIM35通过介导EMT促进骨肉瘤细胞侵袭及迁移 |
| 5.2.2 TRIM35 与 Wnt/β-catenin 通路的关系 |
| 5.3 讨论 |
| 6.结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间科研成果 |
（3）骨巨细胞瘤中p63、Ki-67的表达及影像学分级与临床病理因素的相关性研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 标本处理 |
| 2.3 实验试剂及仪器 |
| 2.4 伦理 |
| 2.5 免疫组织化学染色方法 |
| 2.6 统计学分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 Ki-67、p63在GCTB及瘤旁组织中表达情况 |
| 3.2 Campanacci分级情况与临床病理特征的关系 |
| 3.3 Ki-67在GCTB中的表达与临床病理特征的关系 |
| 3.4 p63在GCTB中的表达与临床病理特征的关系 |
| 3.5 GCTB中 Campanacci分级与p63、Ki-67 表达的相关性分析 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 Ki-67 与骨巨细胞瘤的关系 |
| 4.2 p63 与骨巨细胞瘤的关系 |
| 4.3 Campanacci分级在骨巨细胞瘤中的意义 |
| 4.4 GCTB中 Ki-67、p63 的表达与Campanacci分级的相关性分析 |
| 第五章 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 骨巨细胞瘤中Ki-67及p63表达的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）脊柱原发侵袭性肿瘤术后复发的影响因素探究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 参考文献 |
| 第二章 资料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 结论 |
| 第六章 综述 |
| 参考文献 |
| 附表(图) |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（6）环状circRNA Hsacirc0001017在骨肉瘤中的生物学功能及临床意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 骨肉瘤组织样本环状RNA表达谱的差异分析及验证 |
| 1.1 实验对象和方法 |
| 1.2 实验结果 |
| 1.3 讨论 |
| 第二部分 hsa_circ_0001017在骨肉瘤中的生物学功能 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 实验结论 |
| 2.6 讨论 |
| 第三部分 hsa_circ_0001017在骨肉瘤中的临床意义 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 研究对象 |
| 3.3 研究方法 |
| 3.4 统计学处理 |
| 3.5 研究结果 |
| 3.6 研究结论 |
| 3.7 讨论 |
| 第四部分 环状RNA在肿瘤中的研究进展 |
| 4.1 环状RNA概述 |
| 4.2 环状RNA与肿瘤 |
| 4.3 环状RNA作为新型肿瘤标志物 |
| 4.4 骨肉瘤概述 |
| 4.5 环状RNA与骨肉瘤 |
| 4.6 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读学位期间主要研究成果 |
| 致谢 |
（7）骨肉瘤患者中RanBPM表达的临床意义和相关机制的初步探讨（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 :骨肉瘤患者中RanBPM表达的临床意义研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 :骨肉瘤细胞中RanBPM诱导凋亡机制的初步探讨 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 文献综述一 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 |
（8）唑来膦酸通过miRNA抑制骨肉瘤的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 miRNA在唑来膦酸抑制骨肉瘤中的表达谱特征及生物信息学分析 |
| 前言 |
| 第一节 唑来膦酸抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二节 唑来膦酸处理骨肉瘤细胞后mi RNA和 m RNA表达谱特征分析 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 第三节 唑来膦酸处理骨肉瘤细胞后差异表达的mi RNA和 m RNA生物信息学分析 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 唑来膦酸处理骨肉瘤细胞后差异表达miRNA的初步验证和大数据分析 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 mi RNA-187 通过靶向调节MAPK7 调控骨肉瘤增殖和迁移的作用机制研究 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| (一) 唑来膦酸对骨肉瘤的作用机制研究现状 |
| 参考文献 |
| (二) MiRNA在骨肉瘤诊断与治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（9）骨尤文肉瘤的影像学研究及鉴别诊断（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一部分 骨尤文肉瘤的影像学研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 骨尤文肉瘤与其它易混淆的骨疾病的鉴别诊断 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 骨尤文肉瘤的临床、病理及影像研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）MiR-421通过调控MCPIP1蛋白通路促进骨肉瘤疾病进展的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :MiR-421在人骨肉瘤组织中的高表达并与疾病进展程度相关 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 组织标本收集 |
| 2.2 提取骨肉瘤组织和癌旁组织的总RNA |
| 2.3 琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量 |
| 2.4 逆转录 |
| 2.5 计算表达数值 |
| 2.6 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 MiR-421在人骨肉瘤组织中高表达并其表达与疾病进展相关 |
| 3.2 MCPIP1在人骨肉瘤组织中低表达并与疾病进展相关 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :MiR-421 促进骨肉瘤MG63和U2OS细胞的增殖和迁移 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料和方法 |
| 2.1 人骨肉瘤MG63和U2OS细胞培养 |
| 2.2 MG63和U2OS细胞解冻 |
| 2.3 MG63和U2OS细胞传代 |
| 2.4 MG63和U2OS细胞再冻存 |
| 2.5 MG63和U2OS细胞转染 |
| 2.6 Real-time PCR和细胞转染效率 |
| 2.7 Western blot实验 |
| 2.8 MTT比色法检测miR-421对MG63和U2OS细胞增殖的影响 |
| 2.9 Transwell小室内突破法检测miR-421对MG63和U2OS细胞迁移和侵袭的影响 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 MiR-421 促进体外骨肉瘤MG63和U2OS细胞的增殖 |
| 3.2 MiR-421 可以增加MG63 细胞和U2OS细胞中增殖相关因子cyclinD1 和抑制凋亡因子bcl-2的表达 |
| 3.3 MiR-421 可以促进骨肉瘤MG63 细胞和U2OS细胞的迁移 |
| 3.4 MiR-421 可以增加骨肉瘤MG63和U2OS细胞中迁移相关因子MMP2 的表达 |
| 3.5 MiR-421 可以促进骨肉瘤MG63 细胞和U2OS细胞中促炎因子IL-6 的释放 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 :MiR-421 可以通过调控MCPIP1 蛋白促进骨肉瘤的疾病进展 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 生物信息学预测并验证MCPIP1与miR-421 是否有共同的3?-UTR靶点 |
| 2.2 人骨肉瘤MG63细胞培养 |
| 2.3 MG63细胞传代 |
| 2.4 MG63细胞再冻存 |
| 2.5 MG63细胞转染 |
| 2.6 Real-time PCR和细胞转染效率 |
| 2.7 Western blot实验 |
| 2.8 MTT比色法检测miR-421 是否通过MCPIP1 影响MG63 细胞的增殖 |
| 2.9 Transwell小室内突破法检测miR-421 是否通过MCPIP1 影响MG63 细胞迁移和侵袭 |
| 2.10 裸鼠骨肉瘤成瘤动物模型 |
| 2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 生物学预测并证实MCPIP1与miR-421 有共同的3?-UTR靶点 |
| 3.2 MiR-421 能够负向调控骨肉瘤MG63 细胞和U2OS细胞中MCPIP1 的表达 |
| 3.3 MiR-421 可以通过负向调控MCPIP1 蛋白促进骨肉瘤细胞的增殖、迁移和促炎因子的释放 |
| 3.4 MiR-421 可以通过调控MCPIP1 蛋白促进裸鼠骨肉瘤模型的疾病发展 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 本研究的局限性 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、青少年原发性骨肉瘤临床病理分析（论文参考文献）
- [1]利用生物信息学结合大数据分析骨肉瘤预后相关基因并探索STC2基因在骨肉瘤中的表达及意义[D]. 王紫玥. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]TRIM35调控骨肉瘤细胞迁移和侵袭作用机制的研究[D]. 张杰. 延安大学, 2021(09)
- [3]骨巨细胞瘤中p63、Ki-67的表达及影像学分级与临床病理因素的相关性研究[D]. 郑楷. 广州医科大学, 2021(02)
- [4]20岁以下接受根治性手术后原发性骨肉瘤患者的预后相关影响因素[J]. 卢守亮,程才,刘广飞,王路,李勇,郭志远,高书明,辛大森. 中国医师杂志, 2021(03)
- [5]脊柱原发侵袭性肿瘤术后复发的影响因素探究[D]. 任万里. 山东大学, 2021(09)
- [6]环状circRNA Hsacirc0001017在骨肉瘤中的生物学功能及临床意义[D]. 杨庆磊. 南方医科大学, 2020(01)
- [7]骨肉瘤患者中RanBPM表达的临床意义和相关机制的初步探讨[D]. 郭栎枫. 重庆医科大学, 2020(12)
- [8]唑来膦酸通过miRNA抑制骨肉瘤的机制研究[D]. 刘敏. 苏州大学, 2020(06)
- [9]骨尤文肉瘤的影像学研究及鉴别诊断[D]. 牛国昌. 河北医科大学, 2020(02)
- [10]MiR-421通过调控MCPIP1蛋白通路促进骨肉瘤疾病进展的机制研究[D]. 任兆舟. 中国医科大学, 2020(01)