关键词：高压液相色谱法；健脑合剂；氨基比林；咖啡因
前言：HPLC法又称高压液相色谱法，可以用于测定目标对象中某一类或几类物质的含量。健脑合剂以一种常用的口服药剂，一般用于抑制中枢神经的兴奋，治疗抑郁和头痛等症状。由于该药剂作用于患者的神经系统，需要严格控制用量，健脑合剂的核心成分为氨基比林和咖啡因，通过高压液相色谱法测定氨基比林和咖啡因的含量，能够为后续用药工作提供必要参考，我院进行了相关研究工作且取得了一定成果，具体如下：
1.仪器与材料
本次研究所用设备包括色谱仪、超声清洗机和辅助设备，色谱仪为德国诺尔Knauer公司生产，型号Smartline 1050，超声清洗机为上海医疗设备二厂生产，型号TCQ—250，氨基比林、咖啡因由沈阳医疗化工集团生产，经检验符合使用标准。健脑合剂为云南龙发制药有限公司生产，批准文号：国药准字Z20027175，产品编号：12000292111。磷酸、三乙胺、乙睛由沈阳化工集团三厂提供，三乙胺为分析纯、乙睛为色谱纯，经检验符合使用标准。其他辅助设备包括无菌烧瓶、反应器等，均符合实验要求。
2.方法
2.1色谱条件选取
应用色谱仪进行分析时，所选色谱柱为Spherisorb C18(4.5nm*260nm，4.5μm），确定流动相为0.026mol.L-1磷酸—乙睛（磷酸与乙睛比例为85:15），其中磷酸PH值（酸碱度）为3.0。对其混合溶液进行处理，使用0.46μm滤波抽滤，并应用超声清洗机进行脱气处理。流速方面，控制在0.78-0.82ml·min-1之间，在室温条件下进行检测，确定检测波长为274nm。再进行咖啡因峰测定，理论塔板数为5000，氨基布林峰与咖啡因峰的分离度方面，经测定稳定在4.5左右。
2.2线性关系分析
完成初步测定后，精密称取氨基比林和咖啡因置于无菌反应器中，加入温度为70℃的热水，使氨基比林和咖啡因自行溶解，放置120min，使其冷却至室温水平，加入蒸馏水进行稀释，要求每1ml混合液中含有氨基比林和咖啡因分别为750μg、150μg。再取五分溶液，分别为2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml，置于无菌烧瓶中，加流动相进行稀释，并摇晃均匀，获取标准溶液进行测试。测试依然应用高压液相色谱仪，每份取10μg，测试过程中观察变化并记录色谱图，建立坐标系，设峰面积积分值为纵轴，以Y表示，设浓度为横轴，以X表示，获取两个计算方程：
Y（咖啡因）=2.077*104X+0.29，r=0.9997
Y（氨基比林）=1.057*104X-0.21，r=0.9996
通过分析得知，当氨基比林和咖啡因含量分别处于90-210μg·ml-1和18μg·ml-1范围内时，二者线性关系良好。
2.3空白实验
从沈阳医疗化工集团获取不含氨基比林和咖啡因的健脑合剂试验品，应用高压液相色谱法进行测定，精密称取药品若干置于无菌反应器中，使用0.46μm滤波抽滤，并应用超声清洗机进行脱气处理。流速方面，控制在0.78-0.82ml·min-1之间，在室温条件下进行检测，所获数据表明，其他成分不会干扰氨基比林和咖啡因含量的检测[1]。
2.4重复实验
为求了解实验的科学性，进行4次重复实验，选用的设备依然为德国诺尔Knauer公司的Smartline 1050色谱仪、TCQ—250超声清洗机、云南龙发制药有限公司生产健脑合剂（批准文号：国药准字Z20027175，产品编号：12000292111）、沈阳化工集团三厂提供的磷酸、三乙胺（分析纯）、乙睛（色谱纯）。重复实验的结果表明，氨基比林的含量变动幅值为0.03％、RSD为0.8％；咖啡因含量变动幅值为0.04％，RSD为0.9％，结果基本无变化，这表明实验结果精准可信。
2.5样品测定与回收率实验
通过样品测定进行重复分析，精密称取氨基比林和咖啡因置于无菌反应器中，加入温度为70℃的热水，使氨基比林和咖啡因自行溶解，放置120min，使其冷却至室温水平，加入蒸馏水进行稀释，要求每1ml混合液中含有氨基比林和咖啡因分别为750μg、150μg，再重复上述步骤进行测试分析，结果如表1所示。
表 1 样品测定结果
回收率方面，选用标准样本和固定仪器、采用固定流程进行5次实验，对每次实验结果进行记录、比对和计算，结果表明，氨基比林的平均回收率为99.8％（RSD=0.8％）；咖啡因的回收率为99.7％（RSD=0.9％）。
3.讨论
3.1HPLC法与健脑合剂中氨基比林和咖啡因的含量测定
HPLC法也被称为“高分离度液相色谱法”、“高压液相色谱法”、“近代柱色谱法”、“高速液相色谱法”，是随着科技发展得到应用的一类新的测试方法，可以看做是色谱法的一个核心分支，应用该方式进行物质含量测定，以高压输液系统制备均匀的混合溶液，将混合液体作为流动相，将其置入装有固定相的色谱柱中，通过在色谱柱中的反应完成分离，再进行成分测定，有效避免了其他因素的干扰，使测定结果更加科学可信。本次研究中，空白实验和重复试验所获结果充分证明了HPLC法下测定结果的可信性[2]。目前，HPLC法已经广泛应用于医学、化学、农学、工业、法检、商检等领域，且起到了明显的积极作用。在医学领域，可以用于健脑合剂等药物的成分测定，了解其核心药剂的含量，健脑合剂处方中，严格要求氨基比林含量为15g、澳化钾为30g、咖啡因为3g、加蒸馏水至1000ml，对其含量进行测定可以确保用药科学性。
3.2检测波长
在对健脑合剂中氨基比林和咖啡因的含量进行测定时，检测波长的选取十分重要，本次实验中，确定的初步检测波长范围为：180—450nm，通过不断的对比和紫外光谱扫描，持续调整检测波长，最终发现氨基比林处于220—270nm波长之间时，吸收率最高，咖啡因处于267—278nm波长之间时，吸收率最高，由于氨基比林的吸收率敏感性更低，波长幅值变化为50nm，而咖啡因的吸收率敏感性较高，波长幅值变化为11nm，为保证对咖啡因检测结果的精确性，最终决定选取274nm作为检测波长。
综上所述，应用HPLC法测定健脑合剂中氨基比林和咖啡因的含量，数据准确，反应灵敏快速，具有较高的可行性。
参考文献：
[1]张少凤,徐弘灏,刘向前.HPLC法测定10个引自北美蓝莓品种果实中的糖酸组分及含量[J].食品工业科技,2016,37(10)：77-81.
[2]叶勇树,王国才,李药兰.HPLC法测定陈皮水提物中三种活性成分含量[J].亚太传统医药,2015,11(03)：24-27.
李铁胜 1981 男 黑龙江省大兴安岭加格达奇人 名族 蒙古 职称 副主任药师 学历 大学本科 研究方向 药品检验
论文作者:李铁胜
论文发表刊物:《科技新时代》2018年2期
论文发表时间:2018/4/27
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