【摘 要】目的 研究玉林地区 2012～ 2016 年淋病奈瑟菌对临床常用几种抗生素的耐药性临测及产青霉素酶淋病奈瑟菌（PPNG）和高水平耐四环素淋病奈瑟菌（TRNG）的流行情况，为制定防治策略和治疗方案提供参考依据。方法 对临床分离的 116 株淋病奈瑟菌进行系统鉴定后，用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC），用纸片酸度定量法测定β-内酰胺酶。结果 在检测的 116株淋病奈瑟菌中检出 PPNG 阳性 52株（44.83%），TRNG 阳性64株（55.17%），对环丙沙星耐药率分别为39/116（33.62%）、头孢克肟的耐药率为4/116（3.45%），头孢曲松和大观霉素的耐药率分别为 0.00 %和 0.00%。结论 玉林地区淋病奈瑟菌耐药形势严峻，其中对环丙沙星的耐药严重，且 PPNG 菌株和 TRNG 菌株流行严重，对大观霉素和头孢曲松敏感。
【关键词】淋病奈瑟菌；药物监测；最小抑菌浓度
淋病是性传播疾病中最重要的病种之一，是我国法定的乙类传染病。近年来由于抗菌药物的滥用和错用，诱导淋病奈瑟菌对抗菌药物产生耐药性。为此笔者对 2012 ～ 2016 年来收集的淋病奈瑟菌采用了世界卫生组织（ＷＨＯ）西太区淋球菌耐药监测规划推荐的琼脂稀释法和药物敏感性判断标准进行监测 ［
1 材料和方法
1.1 材料 菌株来源：2012年1月～2016年12月
自本院性病门诊患者处获得116株淋病奈瑟菌，其中
男性患者98株，女性患者18株。年龄最大72岁，最小15岁。男性患者由尿道口
内3～4cm处取材，女性患者由宫颈口内1～2cm处取材，所有菌株均经分离鉴定（革兰染色、氧化酶和糖发酵试验）并分纯后置脱脂牛奶于液氮中保存备用。抗菌药物：四环素、环丙沙星由澳大利亚威尔市亲王医院Tapsall博士提供，大观霉素为美国UpJohn公司产品，头孢曲松为瑞士Roche公司产品。培养基：GC基础培养基（英国Oxoid公司产品）加入10%脱纤维新鲜羊血。标准菌株：A，B，C，D，E共5株WHO标准淋病奈瑟菌菌株，由中国医学科学院皮肤病防治研究所性病参比实验室提供。
1.2 检测方法
1.2.1 最低抑菌浓度（MIC）测定 采用琼脂稀释法[1]，即先精确称取纯品抗菌药物，溶于合适的溶剂中，用无菌蒸馏水稀释后加到培养基中，配成含系列浓度抗生素的琼脂平皿。4种抗菌药物的浓度范围分别为：环丙沙星0.002～8μg/mL，头孢曲松0.002～0.5μg/mL，大观霉素4～128μg/mL。将分纯后的淋病奈瑟菌配成107cfu/mL的菌悬液，用多头接种器接种到含不同浓度药物的琼脂平皿上，置36℃，5%CO2培养箱中培养，36h后观察结果，以淋病奈瑟菌不生长的最低药物浓度为MIC。每批试验用已知MIC值的WHO标准参照菌株进行质量控制。以WHO西太区淋球菌耐药监测项目推荐的标准判断[1]。
1.2.2 β-内酰胺酶的测定 采用纸片酸度法[2]测定，让滤纸吸足青霉素溶液（pH8.0的0.05mol/L磷酸缓冲液100mL，加0.2g嗅甲酚紫和5.0g结晶青霉素）
后放于空平皿中，用接种环取10～20个淋病奈瑟菌菌落在滤纸上溶成一小点（直径约为5mm），盖好平皿后，在37℃孵箱中孵育30min，如菌株为产β-内酰胺酶的菌株，则该酶分解青霉素的β-内酰胺环形成青霉噻唑酸，使pH值下降，指示剂颜色由紫变黄。涂点颜色不变者为阴性。每次试验以WHOE株作为阳性对照，B株作为阴性对照。
2 检测结果
见表 1。共检测了116 株淋病奈瑟菌，其中在质粒介导的耐药菌株中：产青霉素酶淋病奈瑟菌（PPNG）阳性率为52（44.83%），高水平耐四环素淋病奈瑟菌（TRNG）阳性率为64/116（55.17%）；染色体介导的耐药菌株中：环丙沙星的耐药率为39/116（33.62%），头孢克肟的耐药率为4/116（3.45%）头孢曲松的耐药率为 0/116（0.00 %），大观霉素的耐药率为0/116（0.00%）。
表 1 分离的淋病奈瑟菌的耐药性结果 株（%）
3 讨论
淋病是指由淋病奈瑟菌感染引起的各种部位的炎症，是最常见的性传播疾病之一。淋病奈瑟菌是引起人类淋病的病原体，感染后可引起尿道炎、宫颈炎等。淋球菌对抗生素敏感。临床上常使用抗生素治疗淋球菌感染。随着抗生素的使用，淋球菌逐渐对青霉素类、四环素类、喹诺酮类药物产生耐药。目前头孢菌素类药物作为治疗淋球菌感染的一线药物，主要有头孢曲松和头孢克肟等。但引起人们高度关注的是，世界各地均有报道淋球菌对头孢菌素类药物的敏感性逐渐下降，特别是2010年分别在日本、法国和西班牙报道了“超级淋球菌”。近年来由于抗菌药物的广泛使用，淋病奈瑟菌的耐药性越来越严重，使淋病的治疗也越来越困难。本研究就 2012 ～ 2016 年所收集的淋病奈瑟菌株进行抗菌药物的敏感性测定，监测结果分析，116 株淋病奈瑟菌中共检出PPNG 阳性率占52/116（44.83%），TRNG 阳性率64/116（55.17%）。比广东珠海检出 ＰＰＮＧ阳性率为 ３２．４％高，ＴＲＮＧ阳性率为４７．９％高；比南宁PPNG 阳性（11.10%）高，TRNG 56.05 %略低；比广州２００８～２０１４ 年度 ＰＰＮＧ 检出率占 ３６．４％高，２００８～２０１４ 年度 ＴＲＮＧ 检出率占 ４２．６％高，和叶顺章等报道我国 1993 ～ 2000 年 PPNG 检出 率 15.54%及TRNG 检出率 10.48%[ 3]高出很多，表明玉林地区 PP-NG 和 TRNG 的流行相当严重。玉林地区耐环丙沙星淋病奈瑟菌的百分率为39（33.62%），对环丙沙星的耐药严重。近年，头孢克肟出现耐药菌株，耐头孢克肟淋病奈瑟菌的百分率为4/116（3.45）。美国疾病控制中心认为当一种抗菌药物的耐药菌百分率超过 5%时，该药就不应作为治疗的首选药物。因此，青霉素、四环素及环丙沙星等抗菌药物在本地区不应再作为治疗淋病的第一线药物，头孢克肟接近5%，面临不作为治疗淋病的第一线药物的危险。淋病奈瑟菌对头孢曲松耐药率为 0.00%，对大观霉素为0.00%，对大观霉素和头孢曲松敏感。虽然头孢曲松和大观霉素抗菌活性很强，但是近几年也出现个别耐头孢曲松和耐大观霉素的菌株，因此，要同时在临床上应更加注意规范用药
参考文献：
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6，韩燕１，尹跃平１，曹文苓２，朱邦勇３，郑钟洁４，吴兴中５，唐小正６，张保原７，陈绍椿１，戴秀芹１，陈祥生，等.中国淋球菌头孢菌素类药物临床耐药监测方案的推进现状调查。中国艾滋病性病２０１５年２月第２１卷第２期ＣｈｉｎＪＡＩＤＳＳＴＤＶｏｌ．２１Ｎｏ．２Ｆｅｂ２０１５
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8，李治清，刘宏星，谢江玲，等.武鸣县182例淋球菌药敏检测结果分析，应用预防医学2016年4月第22卷第2期
论文作者:何绍,庞赤宇,李作日,卢祖初,王伟途
论文发表刊物:《航空军医》2017年第5期
论文发表时间:2017/5/4
标签：淋病论文; 头孢论文; 菌株论文; 环丙沙星论文; 曲松论文; 药物论文; 率为论文; 《航空军医》2017年第5期论文;