吴学龙[1]2004年在《hrmA诱导水稻抗病性的研究》文中指出从丁香假单胞菌(Psuedomonas syringae pv.syringae)中分离的hrmA基因是在寄主烟草上具有类似无毒基因功能的基因。而且，P.s.syringae处理水稻能诱导水稻产生抗病性。本研究主要是对转hrmA基因水稻的抗病性进行研究分析。 首先对转hrmA基因植株进行了观察和分子生物学鉴定。温室中生长正常小苗移栽至实验大田生长、结实。根据后期死亡与否、以及结实情况分为叁大类，第一类，未及抽穗或者抽穗阶段死亡的9个株系；第二类，产生少量穗子但未能结实的8个株系；第叁类，正常抽穗和结实的18个株系。本研究中所涉及的株系为11个正常抽穗和结实的第叁类株系。PCR检测T1代以及T2代转基因的各个株系，得到了8个阳性株系。Northern Blot分析检测不到这些株系中hrmA基因的表达，RT—PCR分析发现这些株系间hrmA基因的表达丰度有差异，而CamV35S和Pal启动子两种不同启动子驱动的转基因水稻中的hrmA基因表达丰度没有明显的差异。 其次对转基因水稻的稻瘟病菌抗性进行了分析。对野生型非转基因水稻致病稻瘟病菌97-220E3活体接种的病情统计结果表明，转基因水稻的病情要弱一两个等级。Northern Blot和RT-PCR分析显示了稻瘟病菌接种前后，转基因苗的PAL、pBZ1和Gluc等病程相关基因的表达丰度都要比野生型水稻有所提高，甚至表现为弱组成性的表达。这说明hrmA基因诱导水稻对稻瘟病菌的抗性提高，而这种抗性提高可能是通过hrmA基因诱导病程相关基因的提高起作用。 最后研究了植物特有的WRKY转录因子家族参与hrmA基因诱导水稻抗性提高的基因。采用简略阵列分析了转基因样以及稻瘟病菌诱导样中WRKY基因和一些病程相关基因(PRs)的变化，89个WRKY基因有21个可能参与了hrmA基因诱导水稻的抗病反应，43个PRs中亦有15个基因参与。Northern Blot和RT-PCR分析了一些WRKY基因验证阵列的结果表明，这些方法得到的结果基本一致，即WRKY基因家族参与hrmA基因诱导水稻的抗性反应，且这种抗性反应和hrmA基因的表达丰度是相关的。
程志强[2]2002年在《转hrmA基因和铁蛋白基因水稻的抗病性研究》文中研究说明水稻抗病反应是一个相当复杂的过程，不同的抗病途径交叉作用又增加了对了解水稻抗病机理的难度。外源基因导入水稻是提高其抗病和明确其机理的有效途径之一。本文对来源于病原菌丁香假单胞菌的hrmA基因和豌豆铁蛋白基因在水稻抗病反应中的作用进行了分析。主要内容如下： 首先从生理生化方面分析HrmA蛋白对水稻抗病性的影响。将丁香假单胞菌hrmA基因构建到原核表达载体pET-29(b)，得到的重组质粒pET-hrmA转入大肠杆菌(BL21)中，经IPTG诱导表达融合蛋白。以纯化的融合蛋白处理烟草叶片，5天后烟草叶片处理部位出现典型的过敏性反应，说明原核表达的HrmA蛋白具有生物活性。HrmA蛋白处理水稻悬浮细胞，能快速的诱导活性氧进发，处理20分钟后达到最高值，并能持续相当长的时间。其结果与来源于酵母细胞壁裂解物的激发子(YE)相似。同样，HrmA融合蛋白处理水稻细胞能诱导病程相关蛋白(PR)基因的表达，PBZ1基因表达丰度随时间延长而增加，而在处理时间内葡聚糖酶基因表达丰度没有明显变化。实验结果表明HrmA融合蛋白具有激发子活性，在水稻抗病反应中起着一定的作用。 其次，对hrmA基因进行了水稻转化研究。将hrmA基因分别构建在PAL启动子和35S控制的植物表达载体pCAMBIA1301中，并且在hrmA基因前嵌合了PR1b信号肽序列，表达的HrmA蛋白能分泌到细胞外。两个载体分别命名为pCam-PALpro-hrmA和pCam-35S-hrmA。载体通过PCR及酶切鉴定后利用基因枪转化法分别转入水稻愈伤组织中，经过潮霉素筛选、分化再生及生根壮苗培养，然后移至温室。共获得48个独立株系，其中PALpro控制的30株，35S控制的18株。除以35S启动子的转基因植株有叶片枯死及植株死亡情况外，其它都生长正常。 转hrmA基因植株的分子生物学鉴定及抗病性分析。提取转基因植株21个株系基因组DNA，进行PCR扩增，结果有20个株系可扩增出与预期大小一致的特异条带。选取35S和PALpro控制的转基因植株各5株，进行Northern杂交分析，结果表明hrmA基因在转基因植株中得到稳定表达，而非转基因植株则检测不到hrmA基因的表达。取Northem blot鉴定的转基因植株叶片，离体接种稻瘟病菌，结果表明转基因植株与非转基因植株相比，转基因植株对稻瘟病菌的抗性增强。 转豌豆铁蛋白基因水稻的遗传与生理功能分析。对转豌豆铁蛋白（ferrtin，Fer） 基因水稻乃代的53个株系进行PCR检测，52个株系都能扩增出阳性PCR产物。通 过测定光合作用过程中最大光化学通量（Fv／Fm值）分析了由百草枯处理引起的T；代 水稻叶片的氧化损害。与未转基因水稻相比，转Fer基因水稻的叶片对氧化胁迫的耐 受能力有不同程度的增强。百草枯处理后转基因植株叶片叶绿素含量与水处理叶片叶 绿素含量相比没有明显下降，而未转基因植株叶片叶绿素含量降低至水处理叶片的20 ％左右。选取 9株对氧化胁迫的耐受能力较强的水稻进行了 Northern杂交分析和 TZ 代的稻瘟病抗性测定，表明其中5株转基因植株Fer mRNA积累增强。病原菌接种后 T。代转基因植株的病斑数量明显少于非转基因植株。表明转Fer基因水稻对氧化胁迫 和病原菌有较好的抗性。
蒋冬花[3]2002年在《隐地疫霉（Phytophthora cryptogea） Cryptogein基因的克隆及其功能的研究》文中认为激发素(elicitin)是一类由卵菌纲(Oomycete)的疫霉属(Phytophthora)和腐霉属(Pythium)真菌分泌的蛋白类激发子，在烟草与疫霉菌的互作中起无毒因子作用。隐地蛋白(Cryptogein)由隐地疫霉(P. cryptogea)所分泌，该激发素在极低浓度下能诱导烟草产生过敏性反应(HR)，并使植株获得广谱抗病性(SAR)。可以预见，将Cryptogein基因转入烟草植株中表达应能诱导产生完整的抗病防卫反应，提高对多种病原物的抗性。因此本研究以隐地疫霉为基因源，克隆了Cryptogein(Crypt)基因并经PCR定点突变获得了13位氨基酸突变的CryK13V基因，构建了这两种基因的植物双元表达载体，并转化了烟草。对两种转基因烟草的抗病性、耐盐性、农艺性状、抗病耐盐分子机理及T1代的遗传特性等进行了初步的研究。具体结果如下： 1 目的基因的克隆和改造：根据已知的核苷酸序列，设计一对引物，以隐地疫霉的基因组DNA为模板用pfu DNA聚合酶进行PCR扩增，获得了一长度约为300bp的PCR产物，用酶切鉴定和测序分析证明克隆的Crypt基因与已报导的序列相同。进一步用一对突变引物进行PCR定点突变扩增，获13位赖氨酸(K)突变成缬氨酸(V)的PCR产物(OryK13V)，与pUC-mT载体连接后(pUC-CryK13V)通过酶切鉴定和测序证实与预期结果相一致。 2 构建了两个植物双元表达载体：针对Crypt基因的生物学活性和大多数病原菌从根、茎、叶等的表皮细胞侵入的特点，选用弱组成兼病菌诱导型，并能在表皮细胞中特异性表达的水稻苯丙氨酸解氨酶基因PAL启动子控制Crypt基因的表达；对突变基因CryK13V则选用35S强启动子控制。由于Crypt蛋白作用的受体位于植物细胞膜上，因此，在Crypt和CryK13V基因前设计了分泌结构(PR1b信号肽序列)；选用具有卡那霉素抗性植物双元表达载体CHF3，构建了两个植物双元表达载体CHF3-PAL-PRs-Crypt和CHF3-35S-PRs-CryK13V。用冻融法将含Crypt和CryK13V基因植物双元表达载体分别转入根癌农杆菌EHA105菌株中，通过PCR鉴定阳性的转化子用于烟草的转化。 3 转基因烟草植株的获得：将含Crypt和CryK13V基因的农杆菌与烟草叶盘共培养。经卡那霉素抗性筛选分别获转Crypt和CryK13V基因的再生植株22株和33株，PCR检测有21株和30株为阳性；部分植株的Southern杂交结果表明Crypt和 C仙JV基因己以低拷贝门～3个）整合到烟草基因组中。N0rthem杂交分析和 RTPCR检测结果表明 Cypt和 C他叁厂基因在转化烟草植株中有低水平的表达。 4 TO、TI代转基因烟草植株的抗病性分析：用不同接种方法测定转基因烟草植株的抗病性，统计分析结果表明，约一半（54．9％）的植株同时对烟草上3种重要病原菌高抗，80％左右的转基因植株对 3种病原菌的抗性比对照增强。引株转基因烟草植株中对烟草黑脏病菌高抗（0级）的有35株，抗病门～二级）的有8株，感病（3级）的有8株。对烟草赤星病菌高抗（0级）的有33株，抗病门～2级）的有9株，感病（3级）的有9株。大部分转基因烟草植株（81．8％）对烟草野火病均表现为高抗（0级）。而未转基因的烟草植株对3种病原菌均表现为感病。表明大部分转Cyp t和Cp 3厂基因烟草植株具有广谱抗病性。转Cyp t和CyK 3厂基因烟草植株对烟草上3种病原菌的抗性反应基本相近。 5 转基因烟草的耐盐性测定：将转基因和非转基因烟草种子播于含200 mMNaCI的1o 培养基上测定耐盐性。结果表明：大部分转基因烟草小苗的耐盐性比对照强，在含 200 mM NaCI的 1o 培养基中生长 40 d左右，转基因烟草小苗生长和生根基本正常；而转未转基因的烟草种于萌发后生长和生根明显被抑制，最后死亡。表明转基因烟草的耐盐性显着增强。 6 转基因烟草植株抗病、耐盐增强的分子机理初探：用Northern杂交对抗病。耐盐分子机理进行了初步探讨。结果表明：具有高水平 PR－la蛋白积累的转基因植株具有更强和更广的抗病性；PR－la等防卫反相关基因快速和超量诱导表达可能是转基因植株抵抗病原菌侵入的另一种机制。转录因子OPBI的活化与转基因烟草植株的耐盐、抗病性有一定的正相关性；渗调蛋白PRJ基因高水平组成型或诱导型表达也是提高转基因烟草植株耐盐性的原因之一。 n Cptogin基因对烟草其它农艺性状的影响：大部分转基因植株生长正常，并在长势、植株高度、生育期等有一定程度的改变，表现为苗期促进发棵，生长期长势旺盛、植株高度增加，生育期缩短，开花提早。也有少数转基因植株表现为矮化，不能正常现蕾、开花、结籽等异常现象。 8 TI代转基因烟草遗传分析：以卡那霉素抗性为筛选标记结合PCR检测，对部分＊代转基因烟草进行分离比测定，同时结合Southern杂交估算整合的拷贝数。结果转基因烟草TI代的分离基本符合孟德尔 3：1、15：1和 64：1的遗传规律。大多数转基因植株以单拷贝整合，少数为2个或3个拷贝整合。TO代抗病的转基因植株 TI代普遍表现为抗病，表明整合的 Cypt和 CIyK二厂基因己稳定遗传和表达。
刘红霞[4]2006年在《叁种Ⅲ型蛋白影响黄单胞菌—水稻互作与植物抗病性研究》文中研究说明利用24个已知抗病基因的近等基因系材料对我国285个水稻白叶枯菌株的毒性进行了研究。除了IRBB51以外,含有多个抗病基因的水稻品种几乎对所有菌株都表现了高度的抗性。因此,我们选出对白叶枯菌株抗感反应有明显差异的13个含有单个抗病基因的水稻品种用于进一步的实验。IR24和IRBB10抗性很弱,仅对少数菌株具有抗性;而IRBB5、IRBB7以及IRBB21则具有较高的抗性,对大多数菌株表现出高度的抗性。其它单基因品种如IRBB2、IRBB3、IRBB4、IRBB7、IRBB13等在菌株间的抗感反应有着显着的差异。因此,根据白叶枯病菌与近等基因系水稻之间的互作,我们筛选出6个单基因品种(IRBB5,IRBB13,IRBB3,IRBB14,IRBB2,IR24)作为鉴别品种,从而将我国的白叶枯病菌菌株划分为9个小种,其互作模式依次为:RRRRRR、RRRRRS、RRRRSS、RRRSSS、RRSSSS、RSRRRS、RSSRRS、RSSSSS、SSSSSS,对应小种频率分别为10.18%、10.53%、4.91%、10.18%、24.21%、5.96%、11.23%、22.46%、0.35%。我国白叶枯菌株的毒性呈现多样性,不同时期、不同地区菌株毒性差异明显。与菲律宾菌株的毒性进行比较,也存在较大的差异。通过构建Xanthomonas oryzae pv.oryzae PXO99的hrpA、hrpF基因突变菌株PXO99/PMD-A(AOS)、PXO99/PMD-F(FOS)及其功能互补菌株AOS/pUFR034∷hrpA(cAOS)、FOS/pUFR034∷hrpF(cFOS),并分别对之进行GFP荧光标记,产生PXO99/pHM1∷gfp(PXO99-GFP)、AOS/pHM1∷gfp(AOS-GFP)、FOS/pHM1∷gfp(FOS-GFP)、AOS/pHM1∷hrpA∷gfp(cAOS-GFP)、FOS/pHM1∷hrpF∷gfp(cFOS-GFP),对水稻-白叶枯病菌互作进行研究。用PXO99、AOS、FOS、cAOS、cFOS、PXO99-GFP、AOS-GFP、FOS-GFP、cAOS-GFP、cFOS-GFP分别处理水稻及烟草。GFP标记菌株与非GFP标记菌株对水稻的致病性及在烟草上形成HR的能力没有明显差别。突变体FOS对水稻的致病性减弱,AOS几乎完全丧失了对水稻的致病性,形成褐斑。FOS仍然具有诱导烟草形成HR的能力,而AOS同时丧失了在烟草上形成HR的能力。功能互补菌株cAOS、cFOS对水稻的致病性比突变体有所恢复,但达不到野生型的水平。cAOS不能恢复AOS在烟草上形成HR的能力,cFOS仍然可诱导烟草叶片形成HR。病原菌喷雾处理水稻叶片的荧光观察显示,野生型菌株、功能互补菌株、突变体FOS-GFP通过伤口及自然孔口形成侵染,而突变体AOS不能形成侵染。电镜观察结果表明,野生型菌株多数以聚集的方式吸附在自然孔口周围,而突变菌株AOS则多数以分散的形式吸附于水稻叶片表面。以上结果显示,hrpA的突变可能对菌株的识别及聚集能力产生了影响,从而影响了菌株的侵染。已有研究试图确定harpins在植物细胞中的作用部位。但对不同的harpins如来自Erwinia amylovora的HrpN_(Ea)、Pseudomonas syringae pv.phaseolicola的HrpN_(Psph)等研究结果都不尽相同。因此,harpins的识别部位、结合受体等一直不清楚,在本研究中,作者利用荧光蛋白标记构建融合蛋白,以便今后进一步研究HrpA、HrpF在水稻上的作用部位。HrpA_(Xoo)、HrpF_(Xoo)和HrpA_(Xooc)、HrpF_(Xooc)分别是由水稻白叶枯病菌和水稻细菌性条斑病菌的hrpA、hrpF基因编码产生的蛋白质。从水稻白叶枯病菌和水稻细菌性条斑病菌中分别克隆hrpA和hrpF基因,与gfp(green fluorescent protein)构建融合基因,连接pET30a(+)载体,获得了重组质粒pET30a(+)∷hrpA_(Xoo)∷gfp、pET30a(+)∷hrpA_(Xooc)∷gfp、pET30a(+)∷hrpF_(Xoo)∷gfp和pET30a(+)∷hrpF_(Xooc)∷gfp,转化宿主菌BL21(DE3)产生表达菌株pAGGE、pARGE、pFGGK和pFRGK。表达菌株经IPTG诱导培养,收集菌体,超声波破碎后分别取上清和沉淀进行SDS-PAGE电泳,分别产生94.6 kD、94.8 kD、116.3 kD、116.3 kD大小的组氨酸标记的目的蛋白质与GFP的融合蛋白条带。水稻细菌性条斑病菌HpaG_(Xooc)蛋白质作为harpin效应分子可促进植物生长、诱导过敏性细胞死亡、诱导植物对病原菌的抗病性。其编码基因hpaG_(Xooc)包含两个富含甘氨酸的结构域(glycine-rich motif,GRM)和一个半胱氨酸(cysteine)。GRM是harpin类蛋白的共同特征,而一般harpin类蛋白结构中则不含有半胱氨酸。我们对hpaG_(Xooc)的GRM进行了缺失突变得到突变体hpaG_(Xooc)MG(MG),对hpaG_(Xooc)的半胱氨酸位点进行定点突变,将其半胱氨酸突变成苏氨酸得到突变体hpaG_(Xooc)C47T(C47T)。hpaG_(Xooc)、MG、C47T经体外表达得到HpaG_(Xooc)、MG和C47T。用它们分别处理烟草,MG和C47T诱导烟草产生的死亡细胞数目分别是HpaG_(Xooc)的1.7和1.2倍;标记基因hin1、hsr203的表达结果与之一致。MG和C47T处理的植株的抗病性也明显增强。以HpaG_(Xooc)、MG、C47T处理的烟草再接种病斑TMV病毒,5天后调查,叁种蛋白处理的植株叶片病斑分别减少了58%、92%、81%;以Pseudomonas syringae pv.tomato(DC3000)接种番茄,5天内对病原菌进行持续分离,统计其细胞数目。经HpaG_(Xooc)、MG、C47T处理的番茄上的病原菌的数目分别约为对照的1/160、1/15860、1/1260。防卫相关基因Chia5、NPR1、PR-1a的表达结果与之一致。HpaG_(Xooc)、MG和C47T还可促进番茄生长,地上部分的增长幅度分别为15%、46%、125%、;地下部分的增长幅度分别为53%、106%、77%。细胞延展与生长相关基因EXP2的表达情况与之一致。这些结果说明HpaG_(Xooc)中富含甘氨酸的区域以及半胱氨酸的存在抑制了蛋白本身对植物的效应。HpaG_(Xooc)、HrpF_(Xooc)、HrpA_(Xooc)作为水稻细菌性条斑病菌的Ⅲ型蛋白,与病原菌的致病性密切相关。HpaG_(Xooc)作为效应分子,HrpF_(Xooc)参与病原菌Ⅲ型泌出系统通过寄主植物的转运结构的形成。HrpA_(Xooc)可能参与病原菌Ⅲ型泌出系统的泌出结构的形成。叁者之间是否存在某种关系呢?通过酵母双杂交系统探讨Ⅲ型蛋白HrpAXooc、HrpFXooc与HpaGXooc之间的关系。分别构建AD载体pGADT7∷hrpA_(Xooc)、pGADT7∷hrpF_(Xooc)和DNA-BD载体pGBKT7∷hpaG_(Xooc)、pGBKT7∷MG、pGBKT7∷C47T。AD载体与DNA-BD载体共转化酵母菌株Y190,β-Galactosidase Assays显色表明,HrpA_(Xooc)、HrpF_(Xooc)与HpaG_(Xooc)、MG、C47T之间不存在直接的互作。本研究的创新点:(1)通过突变体阐释Ⅲ型蛋白HrpA和HrpF在水稻-黄单胞菌互作中的功能;(2)通过对HpaG_(Xooc)的结构的改变,明确Ⅲ型效应子HpaG_(Xooc)的关键结构特征对其植物效应的影响;(3)通过酵母双杂交系统探讨Ⅲ型蛋白HrpA_(Xooc)、HrpF_(Xooc)与HpaG_(Xooc)之间的关系。本研究的缺点:有些地方文字描述不够准确,个别地方缺乏统计数据。
蒋冬花, 陈旭君, 吴坤陆, 郭泽建[5]2004年在《表达Cryptogein基因的烟草抗病性和耐盐性增强》文中进行了进一步梳理隐地蛋白(cryptogein, Crypt)是由隐地疫霉(Phytophthora cryptogea)分泌的一种分子量约为10 kD的蛋白类激发子. 用农杆菌介导的叶盘转化法获转Crypt (PAL::Crypt)和CryK13V (CaMV35S::CryK13V) 基因的烟草植株. 接种试验结果表明, T2代转基因烟草株系对黑胫病菌(Phytophthora parasitica var nicotiana, Ppn)、赤星病菌(Alternaria alternata)和野火病菌(Pseudomonas syringae pv tabaci)的抗性显着增强. Northern杂交和RT-PCR分析结果表明, 低水平的表达转化基因Crypt和CryK13V就足以激活PR-1a和PR-5等防卫反应相关基因的表达; 在PAL::Crypt转化系统中, 病原菌Ppn能快速和高水平诱导PR-1a等病程相关基因的表达, 表明诱导型PAL启动子对入侵病原菌能及时识别并快速、有效地激活防卫反应, 从而赋予转基因植株抵抗病原菌侵染的能力. 研究还发现, 表达Crypt和CryK13V基因的烟草植株耐盐性比对照明显提高, 转化株系中高水平组成型表达PR基因和转录因子可能与耐盐性增强有一定正相关性. 上述结果表明, 植物对生物和非生物逆境的抗性途径和机制存在着交叉.
陈功友[6]2000年在《水稻黄单胞菌（Xanthomonas oryzae）hrp基因克隆与特性研究》文中研究表明如同其它革兰氏阴性植物病原细菌一样，水稻上两种重要的病原细菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzae（简称Xoo）and pv.oryzicola（简称Xooc））也拥有hrp基因。hrp基因决定着植物病原细菌在非寄主植物上激发过敏反应（hypersensitive response，HR）和在感病寄主植物上致病（pathogenicity）的能力。hrp基因还编码组成Ⅲ型泌出系统的蛋白并将效应分子转运至寄主细胞中。harpin是激发非寄主产生HR的蛋白类信号分子。hrp基因发生突变，则丧失上述功能。 本研究用硫酸二乙酯（DES）化学诱变Xoo野生菌株JXOⅢ和PXO99~A及Xooc野生菌株RS105，获得26株叁种类型的hrp~-突变体：HR~-/Pth~-/harpin~-，HR~-/Pth~-/Ⅲ~-和HR~-/Pth~±/harpin~-；4株dsp~-突变体。dsp~-突变体丧失致病功能但胞外多糖能够正常产生。野生型菌株和部分hrp~-突变体经细胞超声波破碎和10％水饱和酚法验证，脂多糖LPS不是激发烟草产生HR的信号物质。激发HR的信号物质为蛋白类，其对热稳定，对蛋白酶K敏感。hrp~-突变体的胞外水解酶类（淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、果胶酶和脂酶）活性与野生型菌株相比没有显着差异。hrp~-突变体在hrp诱导培养基上产生的胞外蛋白数目不等。 以E.coli S17-1为宿主菌，以pUFR034为载体而构建的JXOⅢ和RS105基因文库，交叉互补法导入受体菌M55（Xooc hrp~-突变体）中，获得来自JXOⅢ的hrp基因阳性克隆pUHRX245和来自RS105的pUHRS130、pUHRS138和pUHRS662。经酶切和亚克隆分析发现，pUHRX245所携hrp基因片段大小为36.8-kb，pUHRS130、pUHRS138和pUHRS662所携hrp基因片段大小都为39.3-kb，酶切位点相同。在此基础上，构建了36.8-kb和39.3-kb hrp基因片段的限制性酶切图谱。pUHRX245和pUHRS138不仅能功能互补所有的hrp~-突变体恢复激发烟草产生HR，而且可使hrp~-突变体M1005恢复致病性，表型为细 初 耍条斑病症状。 来自pUHAIQ45的36．SAn hrp基因片段，经一系列亚克隆，获得了3．3协Sacl功能片段，能使所有的h件突变体可在烟草上激发HR（来自PXOg吵的帅－突变体M16除外人序列测定结果表明，3．3－kb DNA片段中含完整的bpc基因，另外还含有与热激蛋白卯家族有关的基因卿OAN和仰ON。HSpOKF和恤OM的功能还不清楚。据推测，可能与感应环境温度和植物信号分子有关。 来自 pUHRS138的 39．3七b hrp基因片段，经一系列亚克隆，获得 4．M’bM’bB删dL闷吐功能片段，能功能互补所有的h叶突变体恢复在烟草上激发HR。：序列测定结果表明，4．5－o DNA片段中含有完整 h叭和 h恤C基因。 交叉功能互补研究表明，来自 XoO的 h咖可交叉互补 XOOC h矿突变体，而来自XooC的hrp“和h恤OC不能单独起作用。 h冲渝o和h…地co序列比较发现，与形成a一螺旋一转一a一螺旋有关的序列高度保守。这一基序的上游，在3862位点和273毛94位点，m户h比和坏林OO有所不同。 根据来自 PXO86的 bed。和来自大豆斑疹病菌（XCpV poed）的 hrof基因序列，PCR方法可从仰基因克隆p和pUHRS138以及XOO、Xe中扩增出h叭和hind同源片段，大小与h叭和bud相同。h叭的序列与bed。相同。PCR的扩增结果还显示，bed。在测试的黄单胞茵中较为保守，hrall在测试的植物病原细菌中较为保守。这说明，pUHRX25和 pUHRS138所携hrp基因片段，不仅含有hrp调控基因hrpG和切和乙而且还含有hrp基因簇的帅基因。：
蒋冬花, 郭泽建, 陈旭君, 程志强, 郑重[7]2003年在《激发子隐地蛋白基因介导的烟草抗病性研究》文中研究指明从隐地疫霉(Phytophthoracryptogea)中克隆cryptogein(Crypt)激发子基因。针对病原菌侵染和Crypt基因的特点,选用能在根、茎、叶等的表皮细胞中特异性表达的、弱组成型并受病原菌诱导的水稻(Oryzasativa )苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)的启动子;同时为了使表达的cryptogein蛋白能分泌到细胞外,更好地与植物细胞膜受体互作,在Crypt基因前还融合了病程相关蛋白PR1b的信号肽;然后将此融合基因构建于植物表达载体CHF3中。通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefancens)介导的叶盘转化法转入烟草(Nicotianatabacum)。经卡那霉素抗性筛选获22株再生植株,PCR检测都为阳性,部分植株的Southern杂交结果表明,Crypt基因已以低拷贝(1～2个)整合到烟草基因组中。抗病性测定结果表明,转化植株对烟草黑胫病菌(P.parasitica var.nicotianae )、赤星病菌(Alternariaalternata )和野火病菌(Pseudomonassyringae pv.tabaci )的抗性均有提高。
童普国, 欧阳解秀, 阎新, 李绍波, 廖鹏飞[8]2016年在《1个组培特性优良的籼稻品种的发现及其农杆菌转化体系的建立》文中认为对生产上广泛应用的4个优质籼型杂交水稻保持系中9B、金23B、Ⅱ–32B和川香29B,2个恢复系9311和明恢63的组培特性进行系统研究,发现川香29B愈伤组织的诱导率、继代培养增殖率、耐继代能力及分化再生能力均高于其他籼稻品种,其愈伤诱导率和分化再生率分别为96%和82%,说明川香29B是1个具有优良组培特性的籼稻品种;进一步对川香29B的农杆菌遗传转化体系进行优化,并初步建立了川香29B稳定的农杆菌介导的转化体系,即农杆菌EHA105菌液浓度OD600 nm为0.1,浸染液AAM中乙酰丁香酮浓度为200μmol/L,浸染时间30 min,黑暗条件下共培养72 h,共培养温度为19℃,抗性植株转化率为19.6%。
刘宇帅, 张杰, 钟瑾, 李晶, 孟利强[9]2018年在《解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌脂肽芬芥素的分离鉴定及抑菌作用》文中研究指明对一株解淀粉芽孢杆菌TF28产生的抗菌脂肽进行分离鉴定及抑菌活性研究,采用酸沉淀、乙酸乙酯和甲醇萃取技术制备了抗菌脂肽粗提物,经过2次HPLC分离纯化,在保留时间32～42min内获得8个抗菌脂肽纯品,经MALDI-TOF-MS鉴定为芬芥素(fengycins),对尖孢镰刀菌和禾谷镰刀菌显示出较强的抑菌活性,该研究为提高菌株TF28抗菌脂肽产量的定向遗传改造奠定基础。
史畅, 王永茂[10]2016年在《水稻稻瘟病防治技术》文中进行了进一步梳理稻瘟病是我国水稻最常见的一种病害,严重时甚至会颗粒无收。基于此,简要阐述稻瘟病的发病症状及有效的防治措施,以供参考。
参考文献：
[1]. hrmA诱导水稻抗病性的研究[D]. 吴学龙. 浙江大学. 2004
[2]. 转hrmA基因和铁蛋白基因水稻的抗病性研究[D]. 程志强. 浙江大学. 2002
[3]. 隐地疫霉（Phytophthora cryptogea） Cryptogein基因的克隆及其功能的研究[D]. 蒋冬花. 浙江大学. 2002
[4]. 叁种Ⅲ型蛋白影响黄单胞菌—水稻互作与植物抗病性研究[D]. 刘红霞. 南京农业大学. 2006
[5]. 表达Cryptogein基因的烟草抗病性和耐盐性增强[J]. 蒋冬花, 陈旭君, 吴坤陆, 郭泽建. 科学通报. 2004
[6]. 水稻黄单胞菌（Xanthomonas oryzae）hrp基因克隆与特性研究[D]. 陈功友. 南京农业大学. 2000
[7]. 激发子隐地蛋白基因介导的烟草抗病性研究[J]. 蒋冬花, 郭泽建, 陈旭君, 程志强, 郑重. 农业生物技术学报. 2003
[8]. 1个组培特性优良的籼稻品种的发现及其农杆菌转化体系的建立[J]. 童普国, 欧阳解秀, 阎新, 李绍波, 廖鹏飞. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2016
[9]. 解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌脂肽芬芥素的分离鉴定及抑菌作用[J]. 刘宇帅, 张杰, 钟瑾, 李晶, 孟利强. 中国生物工程杂志. 2018
[10]. 水稻稻瘟病防治技术[J]. 史畅, 王永茂. 河南农业. 2016